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常用缓冲液配制方法
来自 : mayitao

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■高效连接粘性末端和平末端
■T/A克隆
■dsDNA切刻修复
■构建高丰度克隆文库
■RNA和DNA的连接

概述

该酶催化双链DNA或RNA上相邻的5?-磷酸末端和3?-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切刻。

来源

纯化自E.coliC600pcl857pPLc28lig8。

反应条件

1XT4DNA连接酶反应缓冲液
[50mMTris-HCl(pH7.5@25℃),10mMMgCl2,10mMDTT,1mMATP]。推荐DNA5?末端浓度为0.1-1.0μM,16℃温育。
热失活:65℃10分钟。

质保声明

T4DNA连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有zui高的活性和纯度。

单位定义(粘性末端活性单位)

1单位指在20μl1XT4DNA连接酶反应缓冲液中,16℃反应条件下,30分钟能使50%的经HindⅢ消化的λDNA片段[5?端浓度为0.12μM(300μg/ml)]连接所需的酶量。

浓度

400,000units/ml和2,000,000units/ml。

注意事项

与E.coliDNA连接酶需要NAD+作辅因子不同,T4DNA连接酶的辅因子是ATP。


稀释后的T4DNA连接酶应于-20℃、50%甘油贮存缓冲液(稀释缓冲液A,NEB#B8001)中保存。如稀释后马上使用,也可用1XT4DNA连接酶反应缓冲液稀释。


只要在反应体系中补加1mMATP,连接反应就可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液或在

T4DNA多聚核苷酸激酶反应缓冲液中进行。

金牌连接酶NEB#产品名称规格单价M0202LT4DNALigase100,000units3,029M0202MT4DNALigase,highconc.100,000units3,029M0202ST4DNALigase20,000units699M0202TT4DNALigase,highconc.20,000units699M0202VT4DNALigase10,000units349M2200LQuickLigationKit150rxns4,569M2200SQuickLigationKit30rxns1,009M2200VQuickLigationKit15rxns509M0367LBlunt/TALigaseMasterMix250rxns4,569M0367SBlunt/TALigaseMasterMix50rxns1,149M0370LInstantSticky-endLigaseMasterMix250rxns4,569M0370SInstantSticky-endLigaseMasterMix50rxns1,149

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