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Cell Technology/aCella™ TOX/500/CLATOX100
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- Description
- Additional Information
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- Assay Principle
- Reviews
Key Benefits
- Safe – Non Radioactive Enzyme release assay.
- Versatile – Useful for measuring activity of T Cells, Primary Cells, NK, complement and other lytic agents.
- Assay can be run in serum supplemented media.
- Homogenous – One-step, no wash assay. Assay can be run in same plate as samples.
- FAST – Results in 3-5 minutes. Chromium 51 or europium release for measurement are time consuming. The inherent sensitivity of luciferase detection is enhanced by the amplification effect of enzyme turnover, which produces thousands, millions or billions of high – energy molecules for each molecule of the enzyme.
- Highly Sensitive – Can detect fewer than 500 cells/well in the presence of serum or as few as 10 cells/well in serum-free or heat-killed media.
- GAPDH: The fact that GAPDH is a natural component of cells, and does not need to be introduced into the cells in any manner, distinguishes this assay from all methods which require prelabelling of cells, transfection, transformation, or other methods of introducing proteins or other molecules into the target cells in order to generate a signal in a later step.
- Advantages for measurement of cell mediated or complement mediated cytolysis – It is usually desirable to use smaller numbers of TCells than are needed for the 51Cr – release assay, since excessive numbers of effector cells can increase the background signal. This is now possible due to the high sensitivity of aCella-Tox.
- ADCC / CMC Assays – A non radioactive alternative to 51Cr assays. Please click here for a direct comparison between the aCella-TOX and (51Cr) Chromium Release Methods
- HTS – Adaptable for High Throughput format
- Non-destructive assay allows monitoring of additional parameters.
Additional information
| Kit Size | 500, 1000 |
|---|---|
| Includes | No Plates, 5 Lumi Plates, 5 Lumi Plates + 5 Tissue Culture Plates |
GAPDH is an important enzyme in the glycolysis and gluconeogenesis pathways. This homotetrameric enzyme catalyzes the oxidative phosphorylation of D-glyceraldehyde-3-phosphate to 1,3-diphosphoglycerate in the presence of cofactor and inorganic phosphate. In the aCella-TOX reaction scheme the release of GAPDH is coupled to the activity of the enzyme 3-Phosphoglyceric Phosphokinase (PGK) to produce ATP. ATP is detected via the luciferase, luciferin Bioluminescence methodology. Further, aCella-TOX is a homogeneous cytotoxicity assay; alternatively in dual mode, aCella-TOX can measure cytotoxicity and cell viability in the same plate. Culture supernatants can also be removed from the original plate and assayed in a different plate, allowing kinetics runs to be set up. The assay is non-destructive, allowing the monitoring of additional parameters such as gene expression.
| Document Title |
| aCella-TOX v1_3 Protocol |
| aCella-TOX Datasheet |
| msds.aCella-TOX |
| Title | File | Link | Author(s) | Journal | Year; Edition:Pages |
| Heat shock enhances the expression of cytotoxic granule proteins and augments the activities of tumor-associated antigen-specific cytotoxic T lymphocytes. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3468674/ | Takahashi A, Torigoe T, Tamura Y, et al. | Cell Stress & Chaperones | 2012;17(6):757-763 | |
| IGF-1R peptide vaccines/mimics inhibit the growth of BxPC3 and JIMT-1 cancer cells and exhibit synergistic antitumor effects with HER-1 and HER-2 peptides. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4368154/ | Foy KC, Miller MJ, Overholser J, Donnelly SM, Nahta R, Kaumaya PT | Oncoimmunology | 2014;3(11):e956005 | |
| HER-3 peptide vaccines/mimics: Combined therapy with IGF-1R, HER-2, and HER-1 peptides induces synergistic antitumor effects against breast and pancreatic cancer cells. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4368151/ | Miller MJ, Foy KC, Overholser JP, Nahta R, Kaumaya PT | Oncoimmunology | 2014;3(11):e956012 | |
| Phase I Active Immunotherapy With Combination of Two Chimeric, Human Epidermal Growth Factor Receptor 2, B-Cell Epitopes Fused to a Promiscuous T-Cell Epitope in Patients With Metastatic and/or Recurrent Solid Tumors. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2773479/ | Kaumaya PTP, Foy KC, Garrett J, et al. | Journal of Clinical Oncology | 2009;27(31):5270-5277 | |
| Identification of Cellular Proteins Required for Replication of Human Immunodeficiency Virus Type 1. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3448097/ | Dziuba N, Ferguson MR, O"Brien WA, et al. | AIDS Research and Human Retroviruses | 2012;28(10):1329-1339 | |
| Insulin-Like Growth Factor-1 Receptor Signaling Increases the Invasive Potential of Human Epidermal Growth Factor Receptor 2-Overexpressing Breast Cancer Cells via Src-Focal Adhesion Kinase and Forkhead Box Protein M1. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4293451/ | Sanabria-Figueroa E, Donnelly SM, Foy KC, et al. | Pharmacology | 2015;87(2):150-161 | |
| Combination Treatment with HER-2 and VEGF Peptide Mimics Induces Potent Anti-tumor and Anti-angiogenic Responses in Vitro and in Vivo. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3075707/ | Foy KC, Liu Z, Phillips G, Miller M, Kaumaya PTP | The Journal of Biological Chemistry | 2011;286(15):13626-13637 | |
| Resistance to Cytarabine Induces the Up-regulation of NKG2D Ligands and Enhances Natural Killer Cell Lysis of Leukemic Cells. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2586691/ | Ogbomo H, Michaelis M, Klassert D, Doerr HW, Cinatl J. | Neoplasia (New York, NY) | 2008;10(12):1402-1410 | |
| Anti-Tumor Effects of Peptide Therapeutic and Peptide Vaccine Antibody Co-targeting HER-1 and HER-2 in Esophageal Cancer (EC) and HER-1 and IGF-1R in Triple-Negative Breast Cancer (TNBC). | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4586465/ | Overholser J, Ambegaokar KH, Eze SM, et al. | Disis ML (Nora), ed. Vaccines | 2015;3(3):519-543 | |
| Generation and preclinical characterization of an antibody specific for SEMA4D. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4966508/ | Fisher TL, Reilly CA, Winter LA, et al. | mAbs | 2016;8(1):150-162 | |
| A Human Anti-M2 Antibody Mediates Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity (ADCC) and Cytokine Secretion by Resting and Cytokine-Preactivated Natural Killer (NK) Cells. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4411161/ | Simhadri VR, Dimitrova M, Mariano JL, et al. | Reeves RK, ed. PLoS ONE | 2015;10(4):e0124677 | |
| Natural Cytotoxicity Receptor-Dependent Natural Killer Cytolytic activity Directed at Hepatitis C Virus (HCV) Is Associated With Liver Inflammation, African American Race, IL28B Genotype, and Response to Pegylated Interferon/Ribavirin Therapy in Chronic HCV Infection. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3997579/ | Meng Q, Rani MRS, Sugalski JM, et al. | The Journal of Infectious Diseases | 2014;209(10):1591-1601 | |
| Myxoma Virus Infection Promotes NK Lysis of Malignant Gliomas In Vitro and In Vivo. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3677932/ | Ogbomo H, Zemp FJ, Lun X, et al. | Ulasov I, ed. PLoS ONE | 2013;8(6):e66825 | |
| Targeting a Glioblastoma Cancer Stem Cell Population Defined by EGF Receptor Variant III. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5661963/ | Emlet DR, Gupta P, Holgado-Madruga M, et al. | Cancer research | 2014;74(4):1238-1249 | |
| Genetically Associated CD16+56− Natural Killer Cell Interferon (IFN)-αR Expression Regulates Signaling and Is Implicated in IFN-α-Induced Hepatitis C Virus Decline. | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3295604/ | Conry SJ, Meng Q, Hardy G, et al. | The Journal of Infectious Diseases | 2012;205(7):1131-1141 |
| Reference |
| Methods and compositions for coupled luminescent assays. United States Patent 6,811,990 Corey and Kinders, issued November 2, 2004. |
| Corey, M. J. and Kinders, R. J. (2005) "Coupled Luminescent Methods in Drug Discovery: 3-Min Assays for Cytotoxicity and Phosphatase Activity" Drug Discovery Handbook, Ed. Shayne Cox Gad, published by John Wiley & Sons, Inc., pp. 689-731 |
| Corey, M.J., et al., "A Very Sensitive Coupled Luminescent Assay for Cytoxicity and Complement-Mediated Lysis," Journal of Immunological Methods 207:43-51, 1997. |
| Corey, M. J., et al., Mechanistic Studies of the Effects of Anti-factor H Antibodies on Complement-mediated Lysis,” Journal of Biological Chemistry 275: 12917-12925, 2000. |
| Schafer, H., et al., "A Highly Sensitive Cytotoxicity Assay Based on the Release of Reporter Enzymes, From Stably Transfected Cell Lines," Journal of Immunological Methods 204:89-98, 1997. |
| Racher, LDH Assay, in Cell and tissue culture: Laboratory procedures in biotechnology, A. Doyle and J.B. Griffiths, Eds. 1998, John Wiley & Sons: Chichester, New York, Weinheim. p. 71-5 |
| Decker, T. and Lohmann-Matthes, M.L. (1988) A quick and simple method for the quantitation of lactate dehydrogenase release in measurements of cellular cytotoxicity and tumor necrosis factor (TNF) activity. J. Immunol. Meth. 115, 61-9. |
| Korzeniewski, C. and Callewaert, D.M. (1983) An enzyme-release assay for natural cytotoxicity. J. Immunol. Meth.64, 313-20. |
| Crouch, S.P.M., et al., "The Use of ATP Bioluminescence as a Measure of Cell Proliferation and Cytotoxicity," Journal of Immunological Methods 160:81-88, 1993. |
| Henry Ogbomo, Anke Hahn, Janina Geiler, Martin Michaelis, Hans Wilhelm Doerr, Jindrich Cinatl Jr. NK sensitivity of Neuroblastoma cells determined by a highly sensitive coupled luminescent method;Biochemical and Biophysical Research Comunications 339 (2006) pp375-379. Click here to read the publication |
| Part# | Reagent | Temperature |
| Part # 6001 | 4X Enzyme Assay Reagent | -20C |
| Part # 3008 | 1X Enzyme Assay Diluent | 2-8C |
| Part # 6003 | Glyeraldehyde 3-Phosphate (G3P) | -20C |
| Part # 6002 | 50X Detection Reagent | -20C |
| Part # 3009 | 5.5X Detection Assay Diluent | -20C |
| Part # 3035 | Lytic Agent | 2-8C |
| N/A | 5 Lumi Plates (Catalog# CLATOX100-3L) | N/A |
| N/A | 5 Lumi Plates + 5 Tissue Culture Plates (Catalog# CLATOX100-3P) | N/A |
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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上海博舜生物科技有限公司在发布的TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 供应信息，浏览与TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 相关的产品或在搜索更多与TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 相关的内容。 查看更多
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2018-06-13
转基因动物模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不可或缺的作用，拜睿生物模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不 查看更多
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2021-08-21
CRISPR/Cas9 技术是近年来发展起来的可以对基因组完成精确修饰的一种技术，可完成基因定点 InDel 突变、敲入、多位点同时突变和小片段的删失等。与传统的 TALEN 和 ZFN 技术相比，CRISPR/Cas9 系统更便捷、高效，应用也更广泛，目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确修饰。为让广大从事医学、生命科学事业的人员更多的了解 CRISPR/Cas9 技术方法，更 查看更多
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2021-08-09
提供商：上海睿玻生物科技有限公司 查看更多
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2021-08-04
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA供应信息，浏览与CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的产品或在搜索更多与CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的内容。 查看更多
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2021-08-03
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的ADA Knockout HeLa Cell Line; ADA 基因敲除细胞-CRISPR供应信息，浏览与ADA Knockout HeLa Cell Line; ADA 基因敲除细胞-CRISPR相关的产品或在搜索更多与ADA Knockout HeLa Cell Line; ADA 基因敲除细胞-CRISPR相关的内容。 查看更多
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2018-05-22
深圳南博屹生物科技有限公司在发布的基因敲除技术供应信息，浏览与基因敲除技术相关的产品或在搜索更多与基因敲除技术相关的内容。 查看更多
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2021-08-22
百奥迈科生物技术有限公司在发布的Precut pSG-target Cloning kit & SSA assay （CRISPR/Cas9 基因敲除技术）供应信息，浏览与Precut pSG-target Cloning kit & SSA assay （CRISPR/Cas9 基因敲除技术）相关的产品或在搜索更多与Precut pSG-target Cloning kit & SSA assay （CRISPR/Cas9 基因敲除 查看更多
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2021-08-26
货号：M20301-0500 查看更多
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2021-07-30
上海北诺生物科技有限公司在发布的pKD20细菌基因敲除系统供应信息，浏览与pKD20细菌基因敲除系统相关的产品或在搜索更多与pKD20细菌基因敲除系统相关的内容。 查看更多
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2021-08-06
赛业（广州）生物科技有限公司是TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）技术服务商之一，从事TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）技术服务，您可以搜索更多相关的TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）实验技术服务，以便挑选到性价比高，合适的TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）产品。而生物在线将会为您在TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）方面提供全方位的解决方案。 查看更多
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2017-10-02
百奥迈科生物技术有限公司在发布的Precut SgRNA Cloning kit & pSD-gRNA Plasmid（CRISPR/Cas9 基因敲除技术）供应信息，浏览与Precut SgRNA Cloning kit & pSD-gRNA Plasmid（CRISPR/Cas9 基因敲除技术）相关的产品或在搜索更多与Precut SgRNA Cloning kit & pSD-gRNA Plasmid（CRISPR/Cas9 基 查看更多
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【原创】CRISPR/Cas9 Talen基因敲除技术交流_问答详情_CRISPR基...123
晴天20142021-09-13
大家好，对于新技术CRISPR/Cas9Talen-基因敲除，这里有一个群，331527578，群里有一些资料，欢迎大家进群学习、交流331527578331527578
CRISPR Allinone和创建多个sgRNA配合Cas9基因敲除有什么区别?...123
wabenawn172021-08-17
是不是CRISPRall-in-one只能设置一个sgRNA？
为什么基因敲除会导致基因表达量下降 123
上好佳鲜虾片诶2021-08-05
基因敲除为什么会导致表达量的下降原因是什么？
尽量简洁
尽量简洁
基因编辑技术crispr/cas9和农杆菌转基因技术的不同– 960问答123
爱臌2021-08-27
中山大学人类胚胎遗传性致病基因修复实验采取了CRISPR／Cas9基因编辑技术。该技术是近年在锌指核酸酶（ZFN）技术、类转录激活样效应因子核酸酶（TALEN）技术之后出现的新型基因编辑技术，原理来自细菌的适应性免疫防御机制。相比传统的基因打靶技术和其他基因编辑技术，CRISPR／Cas9更为精确、高效和经济。
科学家发现，细菌在遭遇噬菌体等病毒侵染之后，可以获得其部分DNA（脱氧核糖核酸）片段并整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，转录出相应的RNA（核糖核酸），利用其中的“定位信息”引导Cas蛋白复合物定位和切割、彻底地摧毁入侵病毒的DNA。CRISPR／Cas9技术就是利用这一原理，用一种定制的RNA引导Cas，对预设DNA位点进行切割，造成DNA断裂，启动细胞内基因组修复机制，实现基因敲除、特异突变的修复或引入和定点转基因等。
科学家发现，细菌在遭遇噬菌体等病毒侵染之后，可以获得其部分DNA（脱氧核糖核酸）片段并整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，转录出相应的RNA（核糖核酸），利用其中的“定位信息”引导Cas蛋白复合物定位和切割、彻底地摧毁入侵病毒的DNA。CRISPR／Cas9技术就是利用这一原理，用一种定制的RNA引导Cas，对预设DNA位点进行切割，造成DNA断裂，启动细胞内基因组修复机制，实现基因敲除、特异突变的修复或引入和定点转基因等。
酿酒酵母做crispr基因敲入donor dna加多少123
韩晓柒37592021-09-11
利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
浅谈CRISPR/Cas9原理及优势 123
含笑饮毒酒7682017-10-29
此系统的工作原理是 crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通过碱基配对与 tracrRNA （trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。而通过人工设计这两种 RNA，可以改造形成具有引导作用的sgRNA （singleguide RNA ），足以引导 Cas9 对 DNA 的定点切割。
作为一种 RNA 导向的 dsDNA 结合蛋白，Cas9 效应物核酸酶是已知的第一个统一因子（unifying factor），能够共定位 RNA、DNA 和蛋白，从而拥有巨大的改造潜力。将蛋白与无核酸酶的 Cas9（ Cas9 nuclease-null）融合，并表达适当的 sgRNA ，可靶定任何 dsDNA 序列，而 sgRNA 的末端可连接到目标DNA，不影响 Cas9 的结合。因此，Cas9 能在任何 dsDNA 序列处带来任何融合蛋白及 RNA，这为生物体的研究和改造带来巨大潜力。向左转|向右转
作为一种 RNA 导向的 dsDNA 结合蛋白，Cas9 效应物核酸酶是已知的第一个统一因子（unifying factor），能够共定位 RNA、DNA 和蛋白，从而拥有巨大的改造潜力。将蛋白与无核酸酶的 Cas9（ Cas9 nuclease-null）融合，并表达适当的 sgRNA ，可靶定任何 dsDNA 序列，而 sgRNA 的末端可连接到目标DNA，不影响 Cas9 的结合。因此，Cas9 能在任何 dsDNA 序列处带来任何融合蛋白及 RNA，这为生物体的研究和改造带来巨大潜力。向左转|向右转
【求助】是否可以直接体内注射CRISPR/Cas相关载体做基因敲除鼠...123
龙在我心2021-09-01
最新一期Nature上，张锋实验室发表了《InvivogenomeeditingusingStaphylococcusaureusCas9》，在文章中，他们用腺病毒AAV包装SaCas9和gRNA，靶向小鼠肝脏中胆固醇调节基因Pcsk9。注射AAV一周内，他们观察到>40%基因改变，血清中Pcsk9下降。那么问题来了，这种效率情况下，可否靶向精子或者卵细胞中的特定基因，然后通过交配获得杂合子，进一步获得纯合子。这样是否可行？谢谢！
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
CRISPRCas9技术原理123
无风642021-07-28
CRISPR （Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats）是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。
CRISPR derived RNA
就是用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统衍生的RNA。
CRISPR derived RNA
就是用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统衍生的RNA。
哪一家公司可以代做CRISPR/Cas9基因敲除小鼠?123
恋莫_AsLG2021-08-28
哪里可以做CRISPR/Cas9基因敲入小鼠，有谁做过
是的，确切来说是大量表达。 大肠杆菌是基因重组技术中常用的细菌，将外源目的基因(如人胰岛素基因)导入大肠杆菌后可在大肠杆菌内表达目的蛋白(如胰岛素)，由于细菌繁殖速度快，通过发酵便可在短时间内获得大量胰岛素，再经多步分离、纯化便得到了药用胰岛素。
流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
是的，确切来说是大量表达。 大肠杆菌是基因重组技术中常用的细菌，将外源目的基因(如人胰岛素基因)导入大肠杆菌后可在大肠杆菌内表达目的蛋白(如胰岛素)，由于细菌繁殖速度快，通过发酵便可在短时间内获得大量胰岛素，再经多步分离、纯化便得到了药用胰岛素。
流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
话说CRISPR技术的利与弊123
愿萌安好5311262017-10-29
优点:使用方便，构建简单，可以覆盖大多数区域的基因编辑需求，成本低。
缺点：质粒仍然较大，转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性，局限了基因编辑的运用范围，而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
缺点：质粒仍然较大，转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性，局限了基因编辑的运用范围，而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
CRISPRCas基因靶向修饰基因敲除基因打靶解读123
35z11701352021-08-07
课题设计； 5，而且其周期长工作量大. 获得Fo代小鼠. 体外转录sgRNA#47； 6. 获得F1代小鼠;Cas9进行活性检测，可实现多基因. 设计构建识别靶序列的sgRNA； 2； 5。虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，并获得F1阳性杂合子小鼠. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定; 6;； 4； 7； 3，5个月得到F1F1代杂合子小鼠;，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆： 1，速度快，得到阳性克隆;Cas9 mRNA，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定; 2。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的，用G418筛选转染后的胚胎干细胞； 3，基因敲除#47； 4，并植入到假孕小鼠的子宫内、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术. 按照课题设计. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程 1;敲入效率高. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选. 得到嵌合鼠，最快2个月即可得到F0代阳性鼠、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程;Cas9 mRNA和打靶载体;，其实不然？一、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用； 8;敲入. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA#47，订购课题BAC菌。基于胚胎干细胞的基因打靶技术，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单将重组载体电转到胚胎干细胞中基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型. 小鼠受精卵原核注射sgRNA#47。二，在生命科学，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，完成打靶载体设计和构建。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术、多物种基因敲除#47. 设计构建打靶载体展开
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zhby-w2021-07-24
昨日，NatureMethods上发表的一篇论文指出：CRISPR-Cas9基因编辑技术导致数百种意料之外的脱靶突变，该论文在业界引发了不小的轰动，也使该技术遭到了质疑。
众所周知，CRISPR-Cas9基因编辑技术凭借其简易、高效和多样化的特点，目前被越来越多的人认为是癌症的“控制中心”，可以用来修复导致失明的基因突变、治疗生物的遗传疾病、甚至通过编辑人类胚胎基因来找出导致不孕和流产的原因。
蛋白质数据库中编号为5AXW的金黄色葡萄球菌的Cas9蛋白晶状结构
然而，昨日发表的论文联合作者、哥伦比亚大学医学中心的StephenTsang博士说，“我们一致认为，CRISPR引起的偏靶突变这一发现具有非常严重的潜在危害，其中包括单核苷酸突变和基因组非编码区域的突变。”
在这项研究中，研究人员对课题组此前获得的进行过CRISPR基因编辑的小鼠进行了全基因组测序，并进行了健康程度比对。
他们发现：CRISPR基因编辑技术确实成功修复了小鼠体内导致失明的基因，但通过全基因组测序后发现小鼠体内有超过1500个单核苷酸发生突变，并且有100个以上的位点发生发生了大片段的缺失和插入。
同时，Tsang研究团队的报告指出：上述这些突变无一通过计算机设置的算法预测到。
NatureMethod论文中的部分关键实验结果统计
StephenTsang博士进一步说道，“研究人员一般并不会使用全基因组测序手段去检测脱靶效应导致的基因突变位点，并且可能忽视了潜在的重要突变位点，因为即便是单碱基突变也有可能造成较大的影响。我们希望，这一研究结果能够鼓励其他人使用全基因组测序作为确定CRISPR技术所有脱靶效应的方法，从而达到更安全、更精准的基因编辑”。
当谈及对于CRISPR技术用于疾病治疗的前景，该研究的共同通讯作者VinitMahajan博士说：“虽然我们依然对CRISPR持乐观态度。但作为医生，我们知道，每一种新疗法都有一些潜在的副作用，我们需要知道这些副作用是什么。”
参考资料：https://www.sciencealert.com/turns-out-crispr-gene-editing-can-cause-hundreds-of-unexpected-mutations
https://eurekalert.org/pub_releases/2017-05/cumc-cge052617.php
https://phys.org/news/2017-05-crispr-gene-hundreds-unintended-mutations.html
https://phys.org/news/2017-04-accurate-dna-method.html
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