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| Microarray Panel | Multiple organ tumor with adjacent normal tissue microarray, containing 2 each of malignant melanoma, clear cell carcinoma and diffuse B cell lymphoma, 1 each of high grade serous carcinoma and endometrioid adenocarcinoma, 1 each of adjacent normal tissue of skin, ovary, kidney, 1 lymph node tissue, duplicated cores per case | |
| Cores | 24 |  |
| Cases | 12 | |
| Row number | 4 | |
| Column number | 6 | |
| Core Diameter (mm) | 1.5 | |
| Thickness (µm) | 5 | |
| Tissue Array Type | FFPE | |
| Species | Human | |
| Applications | Routine histology procedures including Immunohistochemistry (IHC) and In Situ Hybridization (ISH), protocols which can be found at our support page. | |
| Notes | 1. TMA slides were sectioned and stored at 4°C and may not be fresh cut, but still suitable for IHC. Please request fresh cut if experiment involves phospho-specific antibodies, RNA studies, FISH or ISH, etc. A minimum of 3 slides per TMA must be purchased to cover the cost of trimming for fresh sectioning.2. Most TMA slides were not coated with an extra layer of paraffin (tissue cores can be easily seen on the glass). To prevent tissue detachment during antigen retrieval, unbaked slides must be baked for at least 30 to 120 minutes at 60°C. before putting into xylene for de-paraffinization. Baked slides were sent out baked for 2 hours.In the following specsheet,“*” means invalid core; “-” means no applicable or negative in IHC markers. | |
Mouseover and click individual cores to view high resolution images.
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| ||||||||
| A |  |  |  |  |  |  | |||
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| B |  |  |  |  |  |  | |||
| C |  |  |  |  |  |  | |||
| D |  |  |  |  |  |  |  |
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-03-06
弗元生物，专注干细胞与再生医学研究，在干细胞、再生医学、基因编辑方向上竭力，为生物医学的发展做出自己的贡献。 弗元生物细胞基因编辑平台与中科院合作开展CRISPR/Cas9细胞基因编辑工作，平台使用该技术编辑基因超过300例，具有丰富的实际操作经验。在非致死基因的敲除上成功率接近100%。 目前，平台仅针对细胞进行操作，目标细胞包括肿瘤细胞系、永生化细胞系、原代细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、iPS。 平台采用独有的操作... 查看更多
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2021-09-21
江苏锐阳生物科技有限公司是大肠杆菌基因敲除技术服务商之一，从事大肠杆菌基因敲除已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业大肠杆菌基因敲除技术服务，您可以搜索更多相关的大肠杆菌基因敲除实验技术服务，以便挑选到性价比高，合适的大肠杆菌基因敲除产品。而生物在线将会为您在大肠杆菌基因敲除方面提供全方位的解决方案。 查看更多
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2018-04-16
上海优予生物科技有限公司在发布的pk18mobsacB Vector,芽孢杆菌基因敲除载体供应信息，浏览与pk18mobsacB Vector,芽孢杆菌基因敲除载体相关的产品或在搜索更多与pk18mobsacB Vector,芽孢杆菌基因敲除载体相关的内容。 查看更多
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2021-08-13
上海邦耀生物科技有限公司在发布的基因敲除大鼠供应信息，浏览与基因敲除大鼠相关的产品或在搜索更多与基因敲除大鼠相关的内容。 查看更多
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2021-08-25
上海麒盟生物科技有限公司在发布的CRISPR基因敲除慢病毒稳转细胞株 (LentiCas9-Stable)供应信息，浏览与CRISPR基因敲除慢病毒稳转细胞株 (LentiCas9-Stable)相关的产品或在搜索更多与CRISPR基因敲除慢病毒稳转细胞株 (LentiCas9-Stable)相关的内容。 查看更多
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2021-08-04
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA供应信息，浏览与CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的产品或在搜索更多与CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的内容。 查看更多
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2018-03-20
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的CDKN2A Knockout Cell Lysate; CDKN2A基因敲除细胞裂解物-CRISPR供应信息，浏览与CDKN2A Knockout Cell Lysate; CDKN2A基因敲除细胞裂解物-CRISPR相关的产品或在搜索更多与CDKN2A Knockout Cell Lysate; CDKN2A基因敲除细胞裂解物-CRISPR相关的内容。 查看更多
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2021-08-27
原文链接：http://shop.edigene.com/sales.php新的一年，新的开始，博雅辑因也带着满满的诚意归来。特意准备了 100 种基因敲除细胞裂解物试用装，免费提供给广大科研人员。 申请流程： 提交申请：下载试用装申请表，填写完毕后发送到邮箱 marketing@edigene.com，邮件标题：「试用装申请+货号」； 信息审核：信息审核为 2~3 个工作日，审核通过将会通过邮件或电话直接联系您，最终确认寄送地址及... 查看更多
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2021-09-06
北京高校生物技术服务平台联盟在发布的条件性基因敲除小鼠供应信息，浏览与条件性基因敲除小鼠相关的产品或在搜索更多与条件性基因敲除小鼠相关的内容。 查看更多
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2021-09-12
北京大学生命科学学院魏文胜课题组使用一个线性供体片段，该片段包含一个报告系统。结合一种不依赖于同源重组（HR）的敲入策略，成功地富集了特异性携带靶基因突变的细胞克隆。 查看更多
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2021-07-18
我们实验室在细胞信号转导方面技术非常强，但因为没有动物体内的结果，每次发表的文章档次大打折扣。我的导师因此决定要我构建基因敲除小鼠，来验证一些体外研究结果。由于我们是一个传统的cellular biochemistry实验室，对基因敲除小鼠技术的了解，仅限于书本知识，实践起来完全不够用。这样的课题对我来说几乎是impossible mission，但哪怕最终只有0.1%的成功概率，我也不想放弃，万一成功了呢？ 我们前期研究发现，一个... 查看更多
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2018-06-13
转基因动物模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不可或缺的作用，拜睿生物模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不 查看更多
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利用CRISPR@@Cas9系统构建Prdx6基因敲除的RAW264.7细胞系123
pregene2021-08-29
客户提供：
1.目的基因信息(GenBankAccessionnumber、GeneID、或关键词)。
2.细胞系和培养条件
话说CRISPR技术的利与弊123
愿萌安好5311262017-10-29
优点:使用方便，构建简单，可以覆盖大多数区域的基因编辑需求，成本低。
缺点：质粒仍然较大，转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性，局限了基因编辑的运用范围，而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
缺点：质粒仍然较大，转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性，局限了基因编辑的运用范围，而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
【求助】是否可以直接体内注射CRISPR/Cas相关载体做基因敲除鼠...123
龙在我心2021-09-01
最新一期Nature上，张锋实验室发表了《InvivogenomeeditingusingStaphylococcusaureusCas9》，在文章中，他们用腺病毒AAV包装SaCas9和gRNA，靶向小鼠肝脏中胆固醇调节基因Pcsk9。注射AAV一周内，他们观察到>40%基因改变，血清中Pcsk9下降。那么问题来了，这种效率情况下，可否靶向精子或者卵细胞中的特定基因，然后通过交配获得杂合子，进一步获得纯合子。这样是否可行？谢谢！
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
《鼠年说鼠》第十四期:CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠如何鉴定?123
no1lbt2021-08-14
请教各位大神，CRISPR/Cas9基因敲除的小鼠（完全性敲除）构建后，鉴定的方法是不是只要PCR扩增进行基因型鉴定就可以了？核型鉴定及southernblot检测需不需要呢？谢谢！
crispr/cas9的介绍123
纪念死去q22021-09-08
CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9 系统通过将入侵噬菌体和质粒 DNA 的片段整合到 CRISPR 中，并利用相应的 CRISPR RNAs（crRNAs）来指导同源序列的降解，从而提供免疫性。向左转|向右转
谁才是CRISPR技术的所有者?123
75█基佬天降█2021-09-06
近年来，CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室，并催生了上千篇文章的发表。然而，麻省理工学院（MIT）的《Technology Review》杂志提出了一个问题，谁才是CRISPR技术的所有者？ 立即索取更多资料 生物通 www.ebiotrade.com
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近年来，CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室，并催生了上千篇文章的发表。然而，麻省理工学院（MIT）的《Technology Review》杂志提出了一个问题，谁才是CRISPR技术的所有者？生物通 www.ebiotrade.com
一个月前，“科学突破奖”（Breakthrough Prize）揭晓。加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna和德国亥姆霍兹传染研究中心的Emmanuelle Charpentier因在CRISPR技术方面的重要贡献而获奖，且每人获得了300万美元的奖金。
这一领域的另一位风云人物，Broad研究院的张锋（Feng Zhang）虽然没有获得科学突破奖，但在今年4月获得了CRISPR/Cas9的首个专利。他的研究中心控制着这一技术的每个重要商业应用。生物通 www.ebiotrade.com
那么问题来了，这个备受瞩目的奖项和专利为何会落入不同人的手中？究竟是谁发明了它？“这一领域的知识产权相当复杂，”CRISPR Therapeutics公司的CEO Rodger Novak谈道。Emmanuelle Charpentier是这家公司的创始人之一。
Tech Review的记者Antonio Regalado指出，张锋与Doudna共同创立了Editas Medicine公司，它获得了Broad的技术授权。不过，在张锋成功申请专利之后，Doudna就与该公司断绝了关系。她将她的知识产权（专利申请中）授予了另一家竞争性的公司Intellia Therapeutics。然而，让事情更加复杂的是，Charpentier又将她在同一专利申请中的权利出售给了CRISPR Therapeutics。生物通 www.ebiotrade.com
此外，围绕这一技术的科学信用，那也是错综复杂。2012年夏天，Doudna、Charpentier及她们的团队发表了一篇文章，证明CRISPR/Cas9系统可以作为一种可编程的DNA编辑工具。半年后，张锋博士以及哈佛大学的George Church发表文章称它可应用于人类细胞，不久后，Doudna也发表了类似的结果。
但是，张锋表示他对Doudna和Charpentier的工作知之甚少。为了支持他的专利申请，他提交了实验室笔记本的照片，表示他在2012年年初就开始了这方面的研究，早于Doudna和Charpentier。生物通 www.ebiotrade.com
Charpentier表示：“我可以说的是，我和Jennifer Doudna是在我的实验室中开展研究。这里的一切都很夸张，因为这是一项人们很容易学会的技术。事情发生得太快了。”
Regalado在文中写道：“目前还没有CRISPR药物。但是如果CRISPR真的如科学家想象得那么重要，对这一基本技术的商业控制将价值数十亿美元。”也许，这场专利之战才刚刚开始。（生物通 薄荷）
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近年来，CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室，并催生了上千篇文章的发表。然而，麻省理工学院（MIT）的《Technology Review》杂志提出了一个问题，谁才是CRISPR技术的所有者？生物通 www.ebiotrade.com
一个月前，“科学突破奖”（Breakthrough Prize）揭晓。加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna和德国亥姆霍兹传染研究中心的Emmanuelle Charpentier因在CRISPR技术方面的重要贡献而获奖，且每人获得了300万美元的奖金。
这一领域的另一位风云人物，Broad研究院的张锋（Feng Zhang）虽然没有获得科学突破奖，但在今年4月获得了CRISPR/Cas9的首个专利。他的研究中心控制着这一技术的每个重要商业应用。生物通 www.ebiotrade.com
那么问题来了，这个备受瞩目的奖项和专利为何会落入不同人的手中？究竟是谁发明了它？“这一领域的知识产权相当复杂，”CRISPR Therapeutics公司的CEO Rodger Novak谈道。Emmanuelle Charpentier是这家公司的创始人之一。
Tech Review的记者Antonio Regalado指出，张锋与Doudna共同创立了Editas Medicine公司，它获得了Broad的技术授权。不过，在张锋成功申请专利之后，Doudna就与该公司断绝了关系。她将她的知识产权（专利申请中）授予了另一家竞争性的公司Intellia Therapeutics。然而，让事情更加复杂的是，Charpentier又将她在同一专利申请中的权利出售给了CRISPR Therapeutics。生物通 www.ebiotrade.com
此外，围绕这一技术的科学信用，那也是错综复杂。2012年夏天，Doudna、Charpentier及她们的团队发表了一篇文章，证明CRISPR/Cas9系统可以作为一种可编程的DNA编辑工具。半年后，张锋博士以及哈佛大学的George Church发表文章称它可应用于人类细胞，不久后，Doudna也发表了类似的结果。
但是，张锋表示他对Doudna和Charpentier的工作知之甚少。为了支持他的专利申请，他提交了实验室笔记本的照片，表示他在2012年年初就开始了这方面的研究，早于Doudna和Charpentier。生物通 www.ebiotrade.com
Charpentier表示：“我可以说的是，我和Jennifer Doudna是在我的实验室中开展研究。这里的一切都很夸张，因为这是一项人们很容易学会的技术。事情发生得太快了。”
Regalado在文中写道：“目前还没有CRISPR药物。但是如果CRISPR真的如科学家想象得那么重要，对这一基本技术的商业控制将价值数十亿美元。”也许，这场专利之战才刚刚开始。（生物通 薄荷）
—CRISPRCas9 基因敲除技术了解学习 张华林123
小刀1882021-09-05
基因敲除、阳性单克隆筛选、真核细胞、斑马鱼、基因组、植物
CRISPR（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats）RNA，是最近几年才发现的原核生物中的调控RNA，用以抵御病毒和质粒入侵。在II型CRISPR系统中，CRISPRRNA（crRNA）与转录激活crRNA（Trans-activatingcrRNA,tracrRNA）退火形成的复合物能特异识别基因组序列，引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂（double-strandbreaks,DSBs）。CRISPR-Cas系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种生物，包括人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。多个科研小组的研究都显示，与锌指核酸酶（ZFNs）和转录激活样效应核酸酶（Transcriptionactivator-likeeffectornucleases,TALEN）相比较，CRISPR-Cas系统介导的基因组靶向实验在真核细胞中具有相似甚至更高的效率。
剪刀手生物专注于基因编辑多年，最新推出基因组编辑工具CRISPR/Cas9专家系统，该系统灵活简单、可以对特定基因组位点进行切割置换，特异性高、细胞毒性低。CRISPR/Cas9系统可广泛应用于基因组工程，如基因抑制，基因敲除，基因敲入，基因修复等。CRISPR-Cas9体系为基因组工程研究提供了一项简便而强大的工具。
作为一种新的基因编辑技术，CRISPR/Cas9有以下特点和优势：
1、操作简单，靶向精确性更高。
2、CRISPR/Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰，其基因修饰可遗传。
3、基因修饰率高，基因调控方式多样，例如敲除、插入、抑制、激活等
4、可实现对靶基因多个位点同时敲除。
5、无物种限制。
6、实验周期短，最快仅需1个月，节省大量时间和成本。
CRISPR/Cas9的应用中，活性检测或是突变效率的检测：
错配酶法靶序列经Cas/sgRNA切割后由于缺乏修复模板，将主要以非同源重组的方式进行修复，或多或少会插入或删除一些碱基。因此将靶序列PCR扩增后经变性、退火，将形成错配。错配酶将识别错配的杂合双链并剪切。产物跑电泳，比较切割条带与未切割条带的比例，即可反映出Cas/sgRNA的活性。
关于CRISPR/Cas9基因编辑技术,表述不正确的是（） 上学吧继续教...123
vhxfhggffffbjg2021-08-11
Overview of CRISPR/Cas9
http://www.addgene.org/crispr/guide/
http://www.addgene.org/crispr/guide/
crispr 和rna干扰的区别_问答详情_CRISPR基因敲除_基因编辑_分子...123
心碎娃娃RFoj92021-08-18
在一项新的研究中，来自美国北卡罗来纳州立大学的研究人员利用CRISPR-Cas系统开发出能够识别出特定的细菌菌株，切割它们的DNA，从而消除感染，而且经证实选择性除去特定的细菌菌株同时不影响有益的细菌群体是可行的。这种新方法是利用很多细菌中存在的被称作CRISPR-Cas的免疫系统来发挥作用的。这种CRISPR-Cas系统作用机制如下所示：产生小片段被称作CRISPRRNA的RNA链，与一种特定入侵者中特异性的DNA序列匹配，当这些CRISPRRNA找到这样的匹配DNA序列时，它们释放Cas蛋白来切割这种DNA序列。在这项研究中，经设计让CRISPRRNA匹配细菌自身的靶DNA序列能够让细菌自杀，这是因为细菌的CRISPR-Cas系统攻击它自身的DNA序列；在存在不同细菌组合的培养物中测试了这种方法，并且能够只清除特定的细菌菌株；这种方法清除了一种细菌物种的菌株，但是不能清除相同物种中的另一种菌株，尽管它们的基因组序列99%是相同的。
CRISPCas系统介导的基因编辑技术论文123
ni林T373522021-08-01
近日，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建了世界首个基因敲除狗模型。科研人员所使用的“基因编辑技术”，顾名思义，能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。一、与诺奖“擦肩而过”的CRISPR/Cas9技术这不是CRISPR/Cas9这项明星技术第一次得到人们的关注。在此之前，有着“豪华版”诺奖之称的“2015年度生命科学突破奖”颁发给了发现基因组编辑工具“CRISPR/Cas9”的两位美女科学家——珍妮弗·杜德娜和艾曼纽·夏邦杰。二人更是获得了2015年度化学领域的引文桂冠奖——素有诺奖“风向标”之称，曾被认为是今年诺贝尔化学奖的最有力竞争者。那CRISPR/Cas9到底是一项什么技术，为何能够获得如此这般青睐，又何以在短短两三年时间内，发展成为生物学领域最炙手可热的研究工具之一，并有近700篇相关论文发表？它将来又会如何影响到我们的生活？CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。与前两代技术相比，其成本低、制作简便、快捷高效的优点，让它迅速风靡于世界各地的实验室，成为科研、医疗等领域的有效工具。
CRISPR/Cas9基因编辑系统中两种 gRNA活性检测方法比较123
文天羽丶陜彊2017-10-29
利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
CRISPR/Cas9制作基因敲除和基因敲入的一些经验分享 转基因...123
casgene2021-09-14
大家都知道Cas9很火，用于Genomeediting非常方便。本文主要是回顾一下发现历程、分享一些在制作基因敲除细胞系、基因敲除小鼠和最近做GenomewideCas9筛选过程中的一些心得体会。
一、Cas9简介
二、如何设计gRNA
三、如何快速克隆gRNA
四、如何制作基因敲除、基因敲入和条件性敲除
A
B
C条件性敲除
目前的条件性敲除小鼠主要是基于Cre-LoxP系统的。Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组成,它能导致重组发生在特定的DNA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除。
传统的条件性敲除
基于Cre-LoxP的基因打靶要分两步来进行。
传统方法，首先要在胚胎干细胞的基因组中引入LoxP序列，这一步可以通过打靶载体的设计和对同源重组子的筛选来实现。
第二步，通过Cre介导的重组来实现靶基因的遗传修饰或改变。在细胞水平上，可以用Cre重组酶表达质粒转染中靶细胞，通过识别LoxP位点将抗性标记基因切除；在个体水平上将重组杂合子小鼠与Cre转基因小鼠杂交，筛选子代小鼠就可得到删除外源标记基因的条件性敲除小鼠。将Cre基因置于可诱导的启动子控制下，通过诱导表达Cre重组酶而将LoxP位点之间的基因切除（诱导性基因敲除），实现特定基因在特定时间或者组织中的失活。
一般需要一年以上的时间，价格在15-20万不等。
基于Cas9系统的条件性敲除
原理上和传统的条件性敲除类似，差别在于利用OptimizedCas9/CRISPRSystem(OCAS)技术在基因组上加入loxp序列，可以快速获得Loxp位点插入的小鼠。
一般只需要4-5个月。价格也比传统方法大大降低。
五、如何制作基因敲除小鼠
因为技术和仪器的缺陷，一般实验室都不太会做到这一步。
mark先定格框架慢慢写
还开了另外一个帖子讲Cas9技术本身及在细胞生物学上的应用。也欢迎交流。
Cas9基因敲除技术详述-蚂蚁淘论坛
一、Cas9简介
二、如何设计gRNA
三、如何快速克隆gRNA
四、如何制作基因敲除、基因敲入和条件性敲除
A
B
C条件性敲除
目前的条件性敲除小鼠主要是基于Cre-LoxP系统的。Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组成,它能导致重组发生在特定的DNA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除。
传统的条件性敲除
基于Cre-LoxP的基因打靶要分两步来进行。
传统方法，首先要在胚胎干细胞的基因组中引入LoxP序列，这一步可以通过打靶载体的设计和对同源重组子的筛选来实现。
第二步，通过Cre介导的重组来实现靶基因的遗传修饰或改变。在细胞水平上，可以用Cre重组酶表达质粒转染中靶细胞，通过识别LoxP位点将抗性标记基因切除；在个体水平上将重组杂合子小鼠与Cre转基因小鼠杂交，筛选子代小鼠就可得到删除外源标记基因的条件性敲除小鼠。将Cre基因置于可诱导的启动子控制下，通过诱导表达Cre重组酶而将LoxP位点之间的基因切除（诱导性基因敲除），实现特定基因在特定时间或者组织中的失活。
一般需要一年以上的时间，价格在15-20万不等。
基于Cas9系统的条件性敲除
原理上和传统的条件性敲除类似，差别在于利用OptimizedCas9/CRISPRSystem(OCAS)技术在基因组上加入loxp序列，可以快速获得Loxp位点插入的小鼠。
一般只需要4-5个月。价格也比传统方法大大降低。
五、如何制作基因敲除小鼠
因为技术和仪器的缺陷，一般实验室都不太会做到这一步。
mark先定格框架慢慢写
还开了另外一个帖子讲Cas9技术本身及在细胞生物学上的应用。也欢迎交流。
Cas9基因敲除技术详述-蚂蚁淘论坛
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