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TransfectionReagentforHepG2Cells(HepatocellularCarcinomaCells,HB-8065)
- Proprietarycationiclipidsformulation
- HightransfectionefficiencyofsmallRNA(siRNA,shRNA,miRNA),mRNA,pDNA
- Effectiveandrobustintracellulardelivery
- KitincludesTransfectionEnhancerreagent
- Producesconsistentresults,lot-to-lot,plate-to-plate,andwell-to-well
- Work inthepresenceofserum
- Aprovenreagentforestablishingstablecelllines
- Optimizedtransfectionprotocolsareadaptedforusewithbothstandard&reversetransfectionmethods
- DownloadinvitroHepG2 transfectionprotocol:[PDF]
- Download HepG2CRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
- DownloadPowerPointpresentationforHepG2cellstransfectionkit:[PPT]
- DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems
TransfectionEfficiency:
Reagentexhibitsatleast90%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.TransfectionefficiencywasdeterminedbyqRT-PCR.
TransfectionProtocolandMSDS:
DownloadAltogenBiosystemsHepG2TransfectionProtocol:[PDF]
DownloadMSDS:[PDF]
HepG2CellLine:
Livercancerishighlyaggressiveanddevastatingdiseasethatfeaturesseveralmaincharacteristics,includingahighrateofrecurrence,lowearlydetectionrateandineffectivetreatmentapproaches.Inadditiontobeingthefifthcommonmalignancy,itisconsideredthesecondprimarycauseofcancer-relatedmortalitiesworldwide,asstatedbyOncotarget,publishedinJuly2015.TheHepG2hepatomacelllineisimportantforthetoxicologicalassessmentofnovelcombinatorialdrugs.HepG2wasderivedfromthelivertissueofa15-year-oldmalewithdifferentiatedhepatocellularcarcinoma.Thesecellsareepithelialandhaveamodelchromosomenumberof55.HepG2cellssecreteavarietyofmajorplasmaproteins,includingalbumin,transferrin,alpha1-antitrypsin,alpha2-macroglobulin,andplasminogen(theyhavebeengrownsuccessfullyinlarge-scalecultivationsystems).Thecellsareresponsivetostimulationwithhumangrowthhormone.HepG2cellshavealsobeenshowntoberesistanttoG418.HepG2cellsandtheirderivativesareusedasamodelsystemforstudiesoflivermetabolismandtoxicityofxenobiotics,antigenotoxicandcogenotoxicagents,understandinghepatocarcinogenesis,thedetectionofcytoprotective,andfordrugtargetingstudies.Also,HepG2cellsarecommonlyemployedintrialswithbio-artificialliverdevices.Thiscelllineiswidelyusedinhumancancerresearchoftheliverandisessentialformanydifferenttypesofbiomedicalresearch.AltogenBiosystemsoffershighlyefficienttransfectionreagentkitsfortheHepG2hepatomacellline.
Data:
Figure1.GAPDmRNAlevelswerequantifiedusingreal-timeRT-PCRintheHepG2cellstransfectedwithsiRNAstargetingGAPDornon-silencingsiRNA.Forty-eighthourspost-transfection,thecellswereharvestedandanalyzedbyreal-timeRT-PCRforGAPDHmRNAexpressionlevels.Datawerenormalizedagainstthe18SrRNAsignal.Controlsampleswereeithermock-transfectedoruntreated.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataaremeans±SD(n=3).
Figure2.ProteinexpressionofGAPDHinHepG2cells.DNAplasmidexpressingGAPDHorsiRNAtargetingGAPDHweretransfectedintoHepG2cellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.
SelectedHepG2transfectionreagentproductcitations:
- JournalofMolecularEndocrinology2010.Identificationofproteinkinasesthatcontrolovarianhormone release…Sirotkinetal[PDF]
- FEBSLetters2009(583).MicroRNA125aanditsregulationofthep53tumorsuppressorgene…Zhangetal[PDF]
- CellularPhysiology2011.IdentificationofMicroRNAsControllingHumanOvarianCellProliferation …Sirotkinetal [PDF]
Selected invivo transfectionproductcitations(ALTOGEN® INVIVO TransfectionKits usedinthefollowingpublications):
- 2008454(7203):523-7.Innateimmunityinducedbycomposition-dependentRIG-I…Saitoetal[PDF]
- Am JPathology.2010177(4):1870-80.RoleofocularcomplementfactorHinamurinemodel…Lyzogubovetal[PDF]
- NatureBiotechnology.201129(4):341-5.DeliveryofsiRNAtothemousebrainby…Alvarez-Ervitietal [PDF]
- CancerResearch.201171(15):5144-53.InhibitionofmiR-193aexpressionby…Iliopoulosetal[PDF]
- 201016(11):2108-19.RNaseLreleasesasmallRNAfromHCVRNAthatrefolds…Malathietal[PDF]
- 201255(7):2069-79.Thep47phox-andNADPHoxidaseorganiser1…Younetal [PDF]
- BritishJournalofCancer.2012 107(3):516-26.TIGARinducesp53-mediatedcell-cycle…Madanetal[PDF]
- 201463(2):353-61.Tissuetransglutaminasecontributesto…Liuetal[PDF]
- Circulation Research.201015;107(8).Kruppel-likefactor-4transcriptionallyregulates…Cowanetal[PDF]
- 201259(1):158-66.Roleofuncoupledendothelialnitricoxidesynthase…Gaoetal[PDF]
- JounalofBIOLOGicalChemistry.2012287(4):2907.Chaperoningofmutantp53protein…Gognaetal [PDF]
- PLoSPathogens.20128(8)Uridinecompositionofthepoly-U/UCtractofHCVRNA…Schnelletal[PDF]
- JProteomeRes.2012(11) Retinalproteomeanalysisinamousemodelofoxygen-induced…Kimetal[PDF]
- 2011141(2) Differential typeIinterferon-mediatedautophagictrafficking…Desaietal[PDF]
- PLoSPathog.201410(10)ExosomesfromhepatitisCinfectedpatientstransmitHCV…Bukongetal[PDF]
HepG2TransfectionKit
AltogenBiosystems:
AltogenBiosystemsisalifesciencescompany thatmanufacturesover100celltypespecificandpre-optimizedtransfection kits, electroporationbuffers,andtargetedinvivo deliverykitsandreagents.Advancedformulationofreagentsandoptimizedtransfectionprotocolsprovidehighlyefficientintracellulardeliveryofbiomolecules(proteins,DNA,mRNA,shRNA andsiRNA,andsmallmoleculecompounds).Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’s TransfectionResource.
AltogenLabsResearchServices:
AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BiologyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).
VolumeOptions:
- 0.5ml(Catalog#2067)
- 1.5ml(Catalog#2068)
- 1.5mlCRISPR(Catalog#2154)
- 8.0ml(Catalog#2069)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
ebiomall.com
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质粒转染一般是说DNA转染,用常用的sinofection等转染试剂就可以;
小干扰RNA(Small interfering RNA;siRNA)有时称为短干扰RNA(short interfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA),是一个长20到25个核苷酸的双股RNA,这种RNA的转染需要用专门的RNA转染试剂。
如题,PolyplusTransfection转染试剂在中国区的代理商有哪些?求推荐1-2个靠谱的,谢谢!
想用RNAiMAX或者lipo2000转染siRNA,但是看了下转染试剂的说明书和锐博的siRNA说明书,觉得分别对siRNA的用量描述差别挺大的呀,不知道到底该参考哪个呢。
以24孔板为例在siRNA说明书中写到,siRNA终浓度是50nM的话,加入浓度为20μM的siRNA1.25ul,每孔体积是500ul,那这样的话,每孔最终siRNA的量是25pmol。
但是在RNAiMAX或者是lipo2000说明书中,一个写的每孔siRNA用量是5pmol,一个是500ng,这与siRNA厂家所提供的量相差也太多了吧。
到底该看哪一个呢。
ps.一旦siRNA的量和体积确定下来之后,转染试剂的量和siRNA1:1的加就可以了吗?
请各位大神解答。
1.siRNA说明书中的用量,红线圈出
2.RNAIMAX说明书中siRNA的用量。
3.lipo2000说明书中siRNA用量
对重复性要求不高的试验,一般没有问题的,只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。
为了避免这个问题,推荐收到货之后,进行适当分装,用多少,拿出来多少最好。
但是在选择的时候,也需要注意其他的一些问题。
1、采用何种原料和抗体,是否高效、灵敏、特异
2、规范包被操作,吸附是否均匀
3、重复性、可靠性
6、是否提供技术服务
7、适用于血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
8、可检测动物类型是否丰富
9、可检测指标是否齐全
elisa试剂盒就查下博欧特生物
使用方法:
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cellwall)上的特有成分,主要是脂多糖中的类脂A,在细菌被裂解时被释放出来,由于其化学结构和特性,在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率,此外会激活造血细胞(如B细胞、巨噬细胞等)的非特异免疫反应,造成实验的假阳性,所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。