
Description
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Transfection Reagent for SW480 Cells (Colon Adenocarcinoma Cells, CCL-228)
- A biodegradable polymer based transfection agent – once inside the cell, the polymer degrades into smaller less toxic components reducing cell toxicity, facilitating release of the transgene, and improving transfection efficiency
- Effective transfection under conditions of up to 40% serum
- Gentle enough to be used for single cell analysis
- Download in vitro SW480 transfection protocol: [PDF]
- Download SW480 CRISPR/Cas9 transfection protocol: [PDF]
- Download PowerPoint presentation for SW480 cells transfection kit: [PPT]
- Developed and manufactured by Altogen Biosystems
Transfection Efficiency:
Reagent exhibits at least 82% transfection efficiency of siRNA delivery. Transfection efficiency was determined by qRT-PCR.
Transfection Protocol and MSDS:
Download Altogen Biosystems SW 480 Transfection Protocol: [PDF]
Download MSDS: [PDF]
SW480 Cell Line:
Colorectal cancer is the second primary cause of cancer-related deaths in men, accounting for nearly 50,000 fatalities annually in the United States, as per the American Cancer Society (ACS). Colorectal cancer cell lines are extensively employed in preclinical colon cancer research and represent accurate molecular models of primary carcinomas. The SW480 cell line was established from a Dukes type B tumor in the colon of a 50-year-old Caucasian male patient with colorectal adenocarcinoma. The cells exhibit an epithelial morphology, and are susceptible to human immunodeficiency virus 1. Also, The SW480 cell line is negative for colon antigen 3 and colon-specific antigen-p and produces granulocyte-macrophage colony-stimulating factor. This cell line is positive for keratin by immunoperoxidase staining. SW480 display elevated levels of p53 protein, and positively expresses c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, sis, myb, and fos oncogenes. SW480 cells have a mutation in the 12 codon of the ras p.o.gene, and therefore can be used in PCR assays of mutation for this codon. This cell line is widely used in biomedical research related to the search for treatments for colon cancer. Altogen Biosystems provides polymer-based transfection kits for the SW480 cell line.
Data:
Figure 1. siRNAs targeting Lamin A/C mRNA or non-silencing control siRNA were transfected into SW480 cells following the recommended protocol. At 48 hours post-transfection the cells were analyzed by qRT-PCR for Lamin A/C gene expression levels. 18S rRNA levels were used to normalize the Lamin A/C data. Values are normalized to untreated sample. Data are means ± SD (n=4).
Figure 2. Protein expression of Lamin A/C in SW480 cells. DNA plasmid expressing Lamin A/C or siRNA targeting Lamin A/C were transfected into SW480 cells following Altogen Biosystems transfection protocol. At 72 hours post-transfection the cells were analyzed by Western Blot for protein expression levels (normalized by total protein, 10 µg of total protein loaded per each well). Untreated cells used as a negative control.
Selected in vivo transfection product citations (ALTOGEN® IN VIVO Transfection Kits used in the following publications):
- 2008 454(7203):523-7. Innate immunity induced by composition-dependent RIG-I …Saito et al [PDF]
- Am J Pathology. 2010 177(4):1870-80. Role of ocular complement factor H in a murine model … Lyzogubov et al [PDF]
- Nature Biotechnology. 2011 29(4):341-5. Delivery of siRNA to the mouse brain by … Alvarez-Erviti et al [PDF]
- Cancer Research. 2011 71(15):5144-53. Inhibition of miR-193a expression by… Iliopoulos et al [PDF]
- 2010 16(11):2108-19. RNase L releases a small RNA from HCV RNA that refolds … Malathi et al [PDF]
SW480 Transfection Kit
Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems is a life sciences company that offers cell type-specific and pre-optimized transfection products, electroporation kits, and in vivo delivery reagents. Advanced formulation of reagents and optimized transfection protocols provide efficient intracellular delivery of protein, DNA, mRNA, shRNA and siRNA molecules. Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.
Altogen Research Services:
Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).
Volume Options:
- 0.5 ml (Catalog #6920)
- 1.5 ml (Catalog #6921)
- 1.5 ml CRISPR (Catalog #2198)
- 8.0 ml (Catalog #6922)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofecttransfectionreagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下:
实验方法
转染试剂:Turbofecttransfectionreagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(EngreenBiosystemCo,Ltd)
待处理细胞:humanCD8+T细胞
1.针对Turbofect转染的方法
每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。
取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀;
取0.2μLTurbofecttransfectionreagent和agomir稀释液充分混合。
转染复合物制备完成;混匀后室温下孵育15-20分钟,直接取10μL加入已铺好细胞的孔中,继续培养24h收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。
转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+0.2μLTurbofect+9.3μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+0.5+23.25
2.EntransterTM-R4000转染
每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。
取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀,制成10μLagomir稀释液;
取0.25μLEntransterTM-R4000,然后加入9.75μL无血清稀释液体,充分混匀,制成10μLEntransterTM-R4000稀释液;
将EntransterTM-R4000稀释液和agomir稀释液充分混合(可用振荡器或加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。
转染复合物制备完成;
将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中,前后移动培养皿,混合均匀;
转染后6h观察细胞状态,并更换培养基,继续培养24h后收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。
转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+9.5μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+23.75;Etranster稀释液:(0.25μLEtranster+9.75μL无血清的RPMI1640)×5=1.25+48.75(室温静置5分钟),取20μL至ago和N.C.管中,室温静置15分钟。
实验结果
结论:从目的miRNA表达水平的检测结果来看,转染24h后,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntransterTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。
讨论:从实验结果来看,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntranstenTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。EntransterTM-R4000是英格恩生物(EngreenBiosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。该试剂可将RNA导入多种细胞系,包括原代细胞和悬浮细胞。无论有无血清、抗生素存在均可获得很高的转染效率。
但是在选择的时候,也需要注意其他的一些问题。
1、采用何种原料和抗体,是否高效、灵敏、特异
2、规范包被操作,吸附是否均匀
3、重复性、可靠性
6、是否提供技术服务
7、适用于血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
8、可检测动物类型是否丰富
9、可检测指标是否齐全
elisa试剂盒就查下博欧特生物
使用方法:
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
—DNA转染试剂Polyjet-适用于普遍的哺乳动物细胞
LipoD293-适用于悬浮细胞的转染(包括昆虫细胞SF9)-对于普遍的哺乳动物细胞具有更优异的转染效率
—DNAandsiRNA转染试剂
Lipojet-适用于大多数哺乳动物细胞的转染-低毒性(无需换液)-用量少-DNA/RNA共转染(co-transfection)-效果优于Lipofectamine2000
—siRNA转染试剂
GenMute-适用于大多数哺乳动物细胞转染-低毒性(无需换液)-用量少-DNA/siRNA共转染(co-transfection)PepMute-适用于普遍的哺乳动物细胞的转染
如题,PolyplusTransfection转染试剂在中国区的代理商有哪些?求推荐1-2个靠谱的,谢谢!
想用RNAiMAX或者lipo2000转染siRNA,但是看了下转染试剂的说明书和锐博的siRNA说明书,觉得分别对siRNA的用量描述差别挺大的呀,不知道到底该参考哪个呢。
以24孔板为例在siRNA说明书中写到,siRNA终浓度是50nM的话,加入浓度为20μM的siRNA1.25ul,每孔体积是500ul,那这样的话,每孔最终siRNA的量是25pmol。
但是在RNAiMAX或者是lipo2000说明书中,一个写的每孔siRNA用量是5pmol,一个是500ng,这与siRNA厂家所提供的量相差也太多了吧。
到底该看哪一个呢。
ps.一旦siRNA的量和体积确定下来之后,转染试剂的量和siRNA1:1的加就可以了吗?
请各位大神解答。
1.siRNA说明书中的用量,红线圈出
2.RNAIMAX说明书中siRNA的用量。
3.lipo2000说明书中siRNA用量

