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OptimizePCRamplificationoflongDNAampliconsupto40kb
Fast,simpleoptimizationstartingwiththecompletekit- EasilyamplifyDNAtargetsupto40kblong
- ReducePCR-inducederrorsintheselongampliconswiththishighfidelityDNApolymerasemix
TheMasterAmp™Extra-LongPCRKitisacompletesystemforsuccessfulandaccurateone-stepamplificationofDNAsequencesupto~40kb.ThekitcontainstheMasterAmp™Extra-LongDNAPolymeraseMix,aswellasnineMasterAmpExtra-LongPCR2XPreMixeswithdNTPs,buffer,andvaryingamountsofMgCl2andtheMasterAmpPCREnhancerwithBetaine.*
Werecommendfirstusingthecompletekit(Cat.No.MHF9220)totestthedifferentMasterMixExtra-Long2XPreMixes(Step1,Fig.1)witheachnewtemplateandprimersettoidentifythebestperformingone.OnePreMixwillamplifyyourlongtemplateandgiveconsistentresultsinallsubsequentamplifications(Step2,Fig.1).OncetheoptimalPreMixisidentifiedcontinuetousethatcombinationofMasterAmpExtra-Long2XPreMixandDNAPolymeraseforallsubsequentamplificationsusingthattemplateDNAandprimerset.
| Figure1.TwostepstoreliableandconsistentPCRresults. | |
| STEP1.FindtheoptimalMasterAmp™Extra-LongPCRPreMix.PerformPCRwithyourtemplate,primers,andtheninePreMixes. | STEP2.UsethesameMasterAmp™Extra-LongPCRPreMixtoobtainreliable,consistentPCRofthesamesequence. |
 |  |
| A.Amplificationofa20-kbregionoflamBDaDNAusingMasterAmp™Extra-LongPCR2XPreMixes(1-9).MasterAmp™Extra-LongPCRPreMix4producedoptimalresults. | B.SubsequentPCRofa20-kblambdaDNAregionwiththesameprimerpairandMasterAmp™PreMix4gaveconsistentresults,usingtheoptimalPreMixdeterminedinStep1. |
 | Figure2.Extra-longamplificationoflambdaDNAusingtheMasterAmp™Extra-LongPCRKit.PCRconditionswereoptimizedandMasterAmpPremix4wasselectedforPCRof1ngoflambdaDNAineachsample.Resultswereanalyzedona0.5%agarosegel.Ampliconsizeswere30kb(lane1),35kb(lane2)and40kb(lane3).LaneM,5-KbDNAladder. |
*Coveredbyissuedand/orpendingpatents.
MasterAmp™Extra-LongPCRKit;Purchaseofthisproductincludesanimmunityfromsuitunderpatentsspecifiedintheproductinserttouseonlytheamountpurchasedforthepurchaser"sowninternalresearch.Nootherpatentrights(suchas5´NucleaseProcesspatentrights)areconveyedexpressly,byimplication,orbyestoppel.FurtherinformationonpurchasinglicensesmaybeobtainedbycontactingtheDirectorofLicensing,AppliedBiosystems,850LincolnCentreDrive,FosterCity,California94404,USA.
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-07-16
实时荧光定量PCR(RealTime PCR) 实时荧光定量PCR(RealTime PCR)【相关服务：DNA测序】，DNA测序 8月2日，绿叶制药（02186.HK）母公司绿叶集团宣布收购新加坡基因测序公司Vela Diagnostics。这标志着绿叶集团正式进军精准医疗市场，而该公司的基因测序技术将与绿叶集团现有业务产生协同效应，形成从诊断到治疗的精准医疗全产业服务。绿叶集团人士告诉21世纪经济报道记者：“这家公司生产的设备、试剂 查看更多
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2021-09-01
由上海东松医疗科技有限公司组织招标的《上海交通大学医学院附属仁济医院血流测量仪等设备》(招标编号：0811-DSITC170015)询价采购项目，于2017年1月12日在中国上发布招标信息。 经评审小组评议及用户确认，现将本次评审结果公告如下： 设备名称及数量： 第1包：血流测量仪/壹套 成交供应商：帕瑞医学科技(北京)有限公司 第2包：细胞钙成像系统/壹套 成交供应商：默瑞(上海)生物科技有限公司 第3包：荧光定量P... 查看更多
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2018-07-16
通善 荧光定量PCR服务 实验技术服务基因组DNA提取服务项目材料要求服务价格获得DNA量周期细菌基因组DNA提取对数生长期的新鲜菌液1-2ml50元/样品1-2ug1-2周细胞基因组DNA提取1×106新鲜或冻存的细胞50元/样品≈10ug1-2周血液基因组DNA提取1ml新鲜或液氮冻存的样本50元/样品≈10ug1-2周组织基因组DNA提取100mg新鲜或-20度冻存的样本50元/样品≈10ug1-2周服务项目材料要求服务价格获得R 查看更多
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2018-12-14
北京基莱生物科技有限公司在发布的实时定量PCR（Real time PCR,qPCR）技术服务供应信息，浏览与实时定量PCR（Real time PCR,qPCR）技术服务相关的产品或在搜索更多与实时定量PCR（Real time PCR,qPCR）技术服务相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
Her2 or ERBB2 belongs to a class of proteins having high homology with epidermal growth factor receptor (EGFR or ERBB1). It encodes a protein with the molecul 查看更多
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Nanocs的PEG聚合物; Chromotek羊驼抗体; Polysciences转染试剂; Echelon-inc 脂类研究试剂盒; R&D Systems抗体及Elisa试剂盒; Jackson二抗及封闭血清;... 查看更多
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2018-12-18
荧光定量PCR,实时荧光定量pcr,荧光定量pcr原理,荧光定量pcr仪 查看更多
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2018-07-15
【MiRNA定量PCR服务】生物实验,分子生物学实验技术,BIOLEAF.实验技术服务 tosciencebio@126.com 选实验技术服务，还在上海通善。 您的选择，就是对我们公司的肯定。 相信通善，相信自己，我们有太多优势，让您在众多信息流中独具慧眼的找到我们。【MiRNA定量PCR服务】生物实验,分子生物学实验技术,BIOLEAF.实验技术服务 tosciencebio@126.com 一，通善的服务与态度 公司的宗旨是以 查看更多
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ABI7000定量PCR仪,ABIPrism7000是由上海朗赋实业有限公司代理或销售的0品牌的仪器，产品来源于美国。上海朗赋实业有限公司是中国最权威的ABI7000定量PCR仪,ABIPrism7000销售服务商之一，在上海等地方销售ABI7000定量PCR仪,ABIPrism7000已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业ABI7000定量PCR仪,ABIPrism7000仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的ABI7000定量PCR仪,ABIPrism7000产品 查看更多
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2018-12-26
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚 查看更多
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2018-12-26
自从1985年PCR技术首次应用于遗传病基因诊断以来，已有近百种遗传病可用PCR 技术进行诊断和产前诊断，利用PCR技术诊断遗传病的途径有五个，①基因突变位点 的直接检出②筛查与遗传病③④有关的点突变③遗传多态性标记连锁分析间接诊断④ 利用cmRNA逆转录为cDNA进行分析或直接分析cmRNA. 传统的 查看更多
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2018-09-10
多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试剂是由纽罗西敏生物科技代理或销售的品牌的试剂，产品来源于。纽罗西敏生物科技是中国最权威的多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试剂试剂销售服务商之一，在杭州等地方销售多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试剂试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试剂仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的多重巢式实时荧光定量PCR呼吸道病毒及甲型流感病毒分型检测试 查看更多
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PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别？希望能稍微介绍一下这...123
2021-08-03
实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同，是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料（SYBR Green 或Taqman 探针等等）。以SYBR Green为例，这种染料可以结合在双链的DNA上，当PCR不断进行时，每一次退火生成的双链DNA也在增加，荧光染料结合也越多，荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头，可以定量检测荧光的强度，转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势，因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR，同样价格也高一些。
PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同，是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料（SYBR Green 或Taqman 探针等等）。以SYBR Green为例，这种染料可以结合在双链的DNA上，当PCR不断进行时，每一次退火生成的双链DNA也在增加，荧光染料结合也越多，荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头，可以定量检测荧光的强度，转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势，因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR，同样价格也高一些。
qPCR过程中有关RNA的问题123
cneagle662021-08-18
请教园友：
一般做mRNA表达的时候，需要注意提取的RNA中是否有DNA污染，或者通过设计跨内含子的引物来解决。那么，检测MmiRNA的时候，需要注意RNA中DNA污染的问题么？
qPCR曲线正常,但溶解曲线杂乱无章,可能是什么原因呢? 分子生物...123
半度微凉灬2021-07-24
做实时定量PCR时,如果有引物二聚体,对实验结果有什么影响吗?在做...123
执xx丶4392021-08-04
荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。|||原理不同：荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光；普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量，一般是紫外光。反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp；普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小，荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析，普通pcr必须电泳。结果：荧光定量可以实现精确定量，普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程，可以看到扩增效率，溶解温度，直接得到的标准曲线等，这些是普通pcr无法实现的。|||这个还真不大清楚|||貌似前者是定量，后者属于半定量。|||简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段，用于克隆、测序等实验，后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量，而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。前些年有人讲过普通PCR后，通过电泳也可以进行定量，其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。|||引物设计是sybr定量PCR法的最大难点，机会好的话，设计一对引物就能得到很好的结果，机会不好的话7、8对引物也出不来，我就遇到过这样的问题，我在prime5.0上设计了8对引物，符合实验要求的一对也没有，我把退火温度提高到了68度也没能把引物二聚体搞定，后来我想通了，可能我这对引物把其它序列扩增出来了，而且扩增效率很高（我一个同学设计了十几对才找到一对好用的）。记住primer5.0设计出来的100%好的引物，到了定量PCR上不一定好使，这是我最大的经验。定量pCR的引物对匹配度要求不高，我现在使用的引物就有几个碱基不匹配，但实验结果很好。有一个办法可以帮助我们绕过引物设计这道坎，直接到罗氏网站上专区上找引物。罗氏网站在线有一个引物设计软件，你只要找好你目的基因的种属，输入你的片段序列就可以得到你要的引物。这个软件有很大的好处，他会自动地把你的种属序列背景扣除，最大限度地去除引物二聚体产生的可以。
实时荧光定量PCR技术的优点包括（）_简答题试题答案123
Kyoya云FX62017-10-03
普通的PCR大多数是定性实验，而实时荧光定量PCR则定量和定性都可以做。应用领域也不一样，普通PCR一般应用于基因组克隆、DNA测序、RNA反转录等，而实时荧光定量PCR一般应用于mRNA表达量分析、绝对定量、蛋白表达、SNP分析、阴阳性解析等领域。不是定量PCR比PCR好，而是两者应用与不同的领域，起到了不同的作用。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物，从而可进行绝对定量或者相对定量。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物，从而可进行绝对定量或者相对定量。
实时荧光定量pcr分析中cy5,fam,red是什么意思123
櫴7潩鳧4蝕2021-08-13
普通的PCR大多数是定性实验，而实时荧光定量PCR则定量和定性都可以做。应用领域也不一样，普通PCR一般应用于基因组克隆、DNA测序、RNA反转录等，而实时荧光定量PCR一般应用于mRNA表达量分析、绝对定量、蛋白表达、SNP分析、阴阳性解析等领域。不是定量PCR比PCR好，而是两者应用与不同的领域，起到了不同的作用。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物，从而可进行绝对定量或者相对定量。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物，从而可进行绝对定量或者相对定量。
taq酶价格,哈尔滨正君科技有限公司123
沐雨听风Safari2017-10-03
厚百搜查：Taq DNA Polymerase(5u/μl）500U 1091171000U,5000U快速型Fast Taq DNA Polymerase（5 U/μl）都厚百面查查看图" class="ikqb_img_alink">图" class="ikqb_img_alink">希望能帮啥疑问欢迎追问厚百holdbio提供试剂、耗材等全面实验室用品及实验技术服务科研整体服务（课题设计-实验-SCI）
请教大神!荧光定量PCR cDNA加样量的问题 核酸基因技术讨论版...123
nanakaro2021-08-14
求助:荧光定量PCR标准曲线稀释 核酸基因技术讨论版论坛123
雾都丑鱼2021-07-31
定量PCR方法及数据分析123
有木有3803722021-08-06
你所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reversetranscription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtimefluores-cencequantitativePCR）也简称RT-PCR，但是我觉得这是不对的，不推荐。基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，然后将所获得的cDNA作为模板，设计引物进行扩增，是一种检测基因表达的常用方法。实时荧光定量PCR也就是Real-TimePCR，原理有点多，请自行百度百科，其最大的作用是检测样品中的初始DNA浓度。至于三者的关系，RT-PCR和实时定量PCR应该都属于PCR，在RNA实验中，这二者都会应用到。例如你要比较2个组织中的某基因的表达差异，首先你要提取2个组织的总RNA，然后通过RT-PCR检测该基因是否在2个组织中有表达，然后通过实时定量PCR测定该基因在2个组织中的表达量是否具有显著性差异。
实时荧光定量PCR实验结果分析123
你大爷FbEc2021-07-22
如果有标准曲线，按照标准曲线计算。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：
对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
几点注意：
1。必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。
4。 最好不用Syber Green
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：
对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
几点注意：
1。必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。
4。 最好不用Syber Green
pcr ct值越高是否说明表达越低,ct值越高说明表达也低,是吗？最后结...123
hnrtn4aO932017-10-03
所谓Ct值，就是最先出现超过阈值信号的那个循环数。或者说是到了第几个循环才出现超过阈值的信号。
C代表的是cycle，循环数目，T代表的是threshold,阈值。
所以表达量越少的话，需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
C代表的是cycle，循环数目，T代表的是threshold,阈值。
所以表达量越少的话，需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
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