
- Convenientformulations.
- Highestquality:>99%purity.
- TestedinPCR.
- Greatvalue!
Highestqualitydeoxynucleotides,2'-deoxynucleoside5'-triphosphates,atagreatvalue,formulatedforyourconvenience.
Thesenucleotidesarealsosuitablefor:
- sequencing
- nicktranslation
- CDNAsynthesis
- TdT-tailingreactions
- fill-inreactions
2.5mMdNTPMix,PCRGrade
Thisready-to-usedNTPMixisamixtureofallfournucleotides(dATP,dCTP,dGTP,dTTP),eachdissolvedinhighlypurifiedwaterataconcentrationof2.5mM,atpH8.3.TwomillilitersoftheMixisenoughfor500standard50µlEconoTaq®andTaqSelect™DNAPolymerasePCRreactions.Freesampleavailable.
10mMdNTPSet,PCRGrade
Thishigh-puritydNTPsetallowsyoutoformulateyourownPCRmix.Eachofallfournucleotides(dATP,dCTP,dGTP,dTTP),isprovidedinaseparatevial(750µleach),dissolvedataconcentrationof10mMinhighlypurifiedwater,pH8.3.
PLEASENOTE
SomeapplicationsinwhichLucigen’sdNTPscanbeusedmaybecoveredbypatentsissuedandapplicableintheUnitedStatesandcertainothercountries.Becausepurchaseofthisproductdoesnotincludealicensetoperformanypatentedapplication,usersofthisproductmayberequiredtoobtainapatentlicensedependingupontheparticularapplicationinwhichtheproductisused.ThePCRprocessisthesubjectofEuropeanPatentNos.201,184and200,262ownedbyHoffman-LaRoche.ThosepatentsexpiredonMarch28,2006.ThecorrespondingPCRprocesspatentsintheUnitedStatesexpiredonMarch29,2005.Itisthesoleresponsibilityofthebuyertoensurethatuseoftheproductdoesnotinfringethepatentrightsofthirdparties.
ORDERINFORMATION
The2.5mMdNTPMixisamixtureofallfournucleotides,eachdissolvedinhighlypurifiedwaterataconcentrationof2.5mM,atpH8.3.The10mMdNTPSetprovideseachnucleotideinaseparatevial(750µleach),dissolvedataconcentrationof10mMinhighlypurifiedwater,pH8.3.ebiomall.com






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检测指标是:各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳,GoldView染色,检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
原理:
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
如果要测量细胞表面2个受体的比率,最好用流式细胞仪来测量
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
两步法,是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度,而且定量PCR的产物都很短,需要的时候都短,所以两步法更方便。三步法的话,花的时间长,不利于快速实验。
QPCR在实验室中已经非常普及,现在整理一些关于QPCR的相关资料上传,希望对大家有所帮助。
荧光定量PCR技术(FQ-PCR,也称为Real-timePCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光定量PCR技术原理及利用.pdf(1473.28k)

