求助：荧光定量PCR标准曲线稀释

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求助：荧光定量PCR标准曲线稀释

2021-07-31

问题描述：

求助各位大侠，最近做的荧光定量PCR，标准曲线稀释一直不好，请教各位，

采用的标准品是自己提的细胞基因组，浓度最高从125ng/uL，5倍稀释，到最低0.2ng/uL，问题如下：

1.最后一个浓度做出来的扩增曲线重复性非常差，而且与前一个浓度梯度CT值差值约为5左右，稀释过程与前几个浓度时操作一致。

2.待测样品中目标基因若含量高，则重复性尚可，若含量略低，Ct值在30及以上，重复性也很差。

说明，

1、每个标准曲线浓度的稀释操作均一致，涡旋混匀时间>15s

2、所用移液枪无问题，枪头为低吸附枪头

3、操作移液枪无问题

实验不顺，甚是不爽，各位大侠出手解救

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yizhe2011

用户

1.移液器使用技术问题2. 0.2ng hgDNA只有66拷贝，重复性差是可能的，Ct也确实比较高3. DNA最好加2ul以上4.多做几个孔

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