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MCLAB/2X HoTaq™ SYBR Green One-Step Real-Time RT-PCR Kit/HTSRT-100/1 Ea
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MCLAB/2X HoTaq™ SYBR Green One-Step Real-Time RT-PCR Kit/HTSRT-100/1 Ea
品牌 / 
MCLab
货号 / 
HTSRT-100
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TheMCLAB"sHoTaq™SYBRGreenOne-StepRT-PCRKitallowsresearcherstoperformSYBRGreenbasedRT-qPCRinasinglestepwithinasingletube.ThekitutilizesourownproprietaryengineeredQuantumScriptHDreversetranscriptaseandhot-startTaqDNApolymerase.Noadditionalreagentsorstepsarerequiredonethereactionisinitiated.ThekitenablesthequantificationofspecificRNAtargetswithhighsensitivity,unparalleledconvenience,andwidedynamicrange.

Description:
RT-PCRiswidelyusedformeasuringgeneexpressionintissuesamplesorcellculturesystems.TrADItionally,itisperformedintwoseparatereactionsteps.First-strandCDNAisreverse-transcribedfromtotalRNAorpoly(A)+RNAusingareversetranscriptase.Next,thecDNAisamplifiedbyPCRusingaDNApolymeraseinanotherreaction.

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Thetechniquereducestheriskofcross-contaminationandminimizestheuseofreagents.ThismethodisparticularlyusefulforapplicationsinwhichtheexpressionofasmallnumberofgenesthatmustbeanalyzedinmanydifferenttotalRNAsamples,androbustlyamplifyinghigh-abundancetranscriptsfromcrudetotalRNApreparations.

Application:
-GeneExpressionAnalysis
-Genotyping
-Real-TimePCR

Primerandprobedesign: 
Toachievethebestperformance,appropriatesoftware,suchasABIPrimerExpress™,shouldbeused.

RecommendedReactionConditions:
Onecycleat50°Cfor10to30minutes *;
Onecycleat95°Cfor10minutes;
Followedby40cyclesof:95°Cfor15seconds,60°Cfor1minute #;
4°Chold(optional)
* ReactiontimecouldbeadjustedaccordingtoRNAinput.
# Cyclenumberandannealingtemperatureareexperimentdependent.

RecommendedStorageCondition: -20°C

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比色皿一般为长方体,其底及两侧为磨毛玻璃,另两面为光学玻璃制成的透光面粘结而成。所以使用时应注意以下几点:1 拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面。2 不得将光学面与硬物或脏物接触。盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附,然 查看更多>
2021-08-11
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2017-11-14
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2018-07-16
通善 荧光定量PCR服务 实验技术服务基因组DNA提取服务项目材料要求服务价格获得DNA量周期细菌基因组DNA提取对数生长期的新鲜菌液1-2ml50元/样品1-2ug1-2周细胞基因组DNA提取1×106新鲜或冻存的细胞50元/样品≈10ug1-2周血液基因组DNA提取1ml新鲜或液氮冻存的样本50元/样品≈10ug1-2周组织基因组DNA提取100mg新鲜或-20度冻存的样本50元/样品≈10ug1-2周服务项目材料要求服务价格获得R 查看更多>
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《小翊实验手账》荧光定量PCR之引物篇 荧光定量PCR是实验室中出镜率非常高的一种技术手段。它通过在PCR体系中添加荧光基团来显示DNA产物的累积情况,从而达到对PCR过程进行实时监控的目的。并且可以通过数据分析计算出起始模板量,这就是“荧光定量”中“定量”一词的来源。荧光定量PCR实验因为灵敏度高所以经常是差之毫厘谬以千里,所以在实验过程中,我们需要注意诸多细节,谨慎操作。小伙伴们看到这... 查看更多>
常规(HE)染色技术服务 选实验技术服务,还在上海通善。 您的选择,就是对我们公司的肯定。 相信通善,相信自己,我们有太多优势,让您在众多信息流中独具慧眼的找到我们。 一,通善的服务与态度 公司的宗旨是以更高的品质、更低的价格、更快的供货、更优质的服务的“四更”要求为国内广大科研实验工作者提供更为完善的产品供应渠道和售后服务。 二,通善的技术支持 上海通善公司是依托复旦大学,集研发、销售、实验室技术服务于一体的高科技企业。公司拥有配备 查看更多>
MiRNA定量PCR MiRNA定量PCR【相关服务:DNA测序】,DNA测序 8月2日,绿叶制药(02186.HK)母公司绿叶集团宣布收购新加坡基因测序公司Vela Diagnostics。这标志着绿叶集团正式进军精准医疗市场,而该公司的基因测序技术将与绿叶集团现有业务产生协同效应,形成从诊断到治疗的精准医疗全产业服务。绿叶集团人士告诉21世纪经济报道记者:“这家公司生产的设备、试剂已经拿到批文,接下来在国内注册就可以销售了。目前该公 查看更多>
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ROX Reference Dye,可用于需要Dye的Real Time PCR扩增仪,用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪上,用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差.并不是每次都会用到.
一般有ROX Reference Dye和ROX Reference Dye II两种,针对不同的PCR仪.一般ABI PRISM 7000/7700/7900HT和7300 Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye,而7500 Real-Time PCR System和7500 Fast Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye II.其它牌子如Thermal Cycler Dice Real Time System、LightCycler 等Real Time PCR扩增仪时不必使用.
实时荧光定量PCR即
Real time PCR(也称实时定量PCR)
定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术,即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量,不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法,已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。
实时荧光定量PCR 技术的主要应用:
1. DNA 或RNA 的绝对定量分析:包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测,RNAi 基因失活率的检测等
2. 基因表达差异分析:例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等 ),特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证
3. 基因分型:例如SNP 检测,甲基化检测等
Realtime PCR 常用的两种方法分别为:Sybr green(荧光染料掺入法) 和Taqman probe (探针法)
SYBR green
在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
此方法适用:
1、灵敏度高:使用SYBR可使荧光效果增强到1000倍以上
2、通用性好,不需要设计探针,方法简便,省时,价格低廉。
3、通用型方法,在国内外科研中普遍使用。
4、高通量大规模的定量PCR检测
5、专一性要求不高的定量PCR检测。
Taqman Probe
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步
此方法适用:
1、具有高适应性和可靠性,实验结果稳定重复性好,特异性更高。
2、适用于扩增序列专一的体系的检测。
3、样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。
4、靶基因的特异序列较短,无论怎样优化引物设计条件都不能解决。
5、存在与靶基因同源的序列,在PCR中容易出现非特异性扩增,对特异性要求较高的定量。
6、广泛用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物制品的鉴定。

荧光定量PCR数据如下表,想通过GraphPadPrism5软件构建柱状图,但不知道是将2-△△Ct数据导入GraphPadPrism5软件,还是将Mean和SD导入GraphPadPrism5软件中。请大神赐教。另外Mean和SD是求的△△Ct的还是2-△△Ct的?


Taq聚合酶 123
嘟嘴伦02662017-10-03
Taq酶水栖热菌 Thermus Aquaticus ( Taq )离具热稳定性DNA聚合酶般用Taq酶rTaq酶LTaq酶两类LTaq酶保真性更强耐热性比rTaq酶图" class="ikqb_img_alink">

各位战友

我实验室用的是Therimosci公司的SYBR试剂盒,说明书上要求DNA的量<500ng

但是测得CDNA浓度都在1000-2000多ng/ul

我第一次没注意500ng的问题就直接加了2ulcDNA结果CT值非常高

如果按500ng算,加的就不到1ul的量了,这样CT不是更高了嘛这样加对吗??

你这个结论并不对。两步法,三步法并没有本质区别,信号的读取都是在每一个延长结束后读取。定量PCR一开始的时候也是三步法的。

两步法,是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度,而且定量PCR的产物都很短,需要的时候都短,所以两步法更方便。三步法的话,花的时间长,不利于快速实验。

有大神做过人外周血全血miRNA的提取及后续PCR实验的吗?目前课题实验遇到瓶颈,求助大神!!!是否miRNA的PCR验证在全血做不出?必须要用血浆或者血清?目前血浆、血清也有部分样本。。。。有大神指条明路吗?

我明年就毕业了,可是论文还没投,快急的不行了,做的实时荧光绝对定量PCR,跑标曲带样用的Bio-RadIQ5机子,可是结果出来不知道分析的是哪个指标(ct,ctmean,sq,sqmean,logsq),不会处理数据,求高人指点啊,拜托了拜托了,好人好报啊
实时荧光定量PCR123
小镜a浣溪沙2017-10-03
实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。

检测指标是:各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳,GoldView染色,检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。

原理:

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
PCR 测受体太不靠谱,mRNA的量和蛋白量不是线性关系,尤其是受体。

如果要测量细胞表面2个受体的比率,最好用流式细胞仪来测量
荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。|||原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光。反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳。结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的。|||这个还真不大清楚|||貌似前者是定量,后者属于半定量。|||简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。|||引物设计是sybr定量PCR法的最大难点,机会好的话,设计一对引物就能得到很好的结果,机会不好的话7、8对引物也出不来,我就遇到过这样的问题,我在prime5.0上设计了8对引物,符合实验要求的一对也没有,我把退火温度提高到了68度也没能把引物二聚体搞定,后来我想通了,可能我这对引物把其它序列扩增出来了,而且扩增效率很高(我一个同学设计了十几对才找到一对好用的)。记住primer5.0设计出来的100%好的引物,到了定量PCR上不一定好使,这是我最大的经验。定量pCR的引物对匹配度要求不高,我现在使用的引物就有几个碱基不匹配,但实验结果很好。有一个办法可以帮助我们绕过引物设计这道坎,直接到罗氏网站上专区上找引物。罗氏网站在线有一个引物设计软件,你只要找好你目的基因的种属,输入你的片段序列就可以得到你要的引物。这个软件有很大的好处,他会自动地把你的种属序列背景扣除,最大限度地去除引物二聚体产生的可以。
realtimeRT-PCR,测了模板CDNA浓度1800ng/ml,纯度在1.96左右,但是检测内参GAPDH,CT值都有30多,目的基因的CT更大了。请问问题在哪里,CT值大不就是因为模板量不够吗,可是现在这个浓度显然是充足的,怎么解释?