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MCLAB/2X Taqman probe based HoTaq qPCR Kit/HTP430/1 Ea
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MCLAB/2X Taqman probe based HoTaq qPCR Kit/HTP430/1 Ea
品牌 / 
MCLab
货号 / 
HTP430
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TaqmanprobeisdesignedtoincreasethespecifictyofquantitativePCR. ItiscompatIBLewithalltypesofreal-timePCRmachines.Thisisahighperformancereal-timePCRreagent.ItutilizesMCLAB'sproprietaryquantitativePCRtechnology.

ForResearchUseOnly.

2hottaqpcrkits.jpg

Figure:AmplificationofhumanGAPDHgenetargetwith2XHoTaqReal-timePCRKit.Amplificationcurvesareshownfortenfolddilutionsof0.0002pMto20pMofplasmid.Insetshowsthestandardcurvedata.

Description:
Thisisahighperformancereal-timePCRreagent.ItutilizesMCLAB'sproprietaryquantitativePCRtechnology.

Advantages:
2xHoTaqPCRReactionMixproductsaresuperiorinamplifyingdifficulttemplatescomparingwithsimilarproductsfromothersuppliers.
mclab_pcr_image001.gif
-ThisistheamplificationofGPIIBgene(70%G+C).
-10~10Kcopiesfrom30pghumangenomicDNAhavebeendetected.

Application:
ProbebasedquantitativePCR:includingDNAquantification,2-stepRTPCR,SNPanalysis,etc.

Primerandprobedesign:
1.Toachievethebestperformance,appropriatesoftware,suchasABIPrimerExpressTM,shouldbeusedtodesignprimerswith50°C~65°Cannealingtemperatureand68°C~70°Cforprobeswith17~30nucleotidesinlength
2.Ampliconsizeshouldbesmall,<150bp
3.Avoidsecondarystructuresinprimersandprobes
4.Avoidmorethan3consecutiveGsinprimersandprobes
5.Primersshouldnothavecomplementary3'-ends
6.17~30nucleotidesinlength

RecommendedReactionConditions::
95°C,10minutes.->(95°C,5seconds.->60°C,30seconds.)for50cycles.

RecommendedStorageCondition:-20°C

Notes:
Toachieveaccuratequantification,itishighlyrecommendedtodoreplicatesandtoreducepipettingerrors.

Reference:
1.Holland,P.M.,Abramson,R.D.,Watson,R.,andGelfand,
2.D.H.1991.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA88:7276-7280.
3.Livak,K.J.,Flood,S.J.A.,Marmaro,J.,Giusti,W.,andDeetz,K.1995.PCRMethodsandApplications4:357-362.
4.Lee,L.G.,Connell,C.R.,andBloch,W.1993NucleicAcidsResearch21:3761-3766.

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One of responses to increased blood pressure is cardiac hypertrophy through increased size of ventricular myocardial cells leading to increased thickness of th 查看更多>
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  自从1985年PCR技术首次应用于遗传病基因诊断以来,已有近百种遗传病可用PCR 技术进行诊断和产前诊断,利用PCR技术诊断遗传病的途径有五个,①基因突变位点 的直接检出②筛查与遗传病③④有关的点突变③遗传多态性标记连锁分析间接诊断④ 利用cmRNA逆转录为cDNA进行分析或直接分析cmRNA.  传统的 查看更多>
Biotium 31000 EvaGreen qPCR和HRM荧光定量PCR染料5*1mlBiotium:GelRed(41003)、GelGreen(41005)、Biotium 31000 EvaGreen荧光定量PCR染料5*1mlEvaGreen®是一种... 查看更多>
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2018-12-26
Her2 or ERBB2 belongs to a class of proteins having high homology with epidermal growth factor receptor (EGFR or ERBB1). It encodes a protein with the molecul 查看更多>
Nanocs的PEG聚合物; Chromotek羊驼抗体; Polysciences转染试剂; Echelon-inc 脂类研究试剂盒; R&D Systems抗体及Elisa试剂盒; Jackson二抗及封闭血清;... 查看更多>
RFLP法1)常规制备DNA盐析法1.用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。2.每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次,再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。3.加50μl 10% SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质,37℃过夜或55℃ 3h。4.加0.25体积饱和醋酸钠溶液,剧烈摇动15s。5.2000 查看更多>
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如果有标准曲线,按照标准曲线计算。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下:
对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。
首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。

几点注意:
1。必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减(扩增效率有可能不同)
3。 2的某次方只是理论值,实际扩增效率低于2。
4。 最好不用Syber Green
结果如图。A到E都是一个样本,A123是gapdh,后面共有18种引物。f到h是另一个样本,前三个是gapdh,后面是11种引物。结果是这样的没有起跳。。样本和引物之前做都没有问题。。做这次pcr,我只是在加样完毕到上机器之间有一个多小时在外面,前几十分钟在--20度冰箱。后20分钟在冷库解冻。放冷库的时候,用橡胶手套盖住遮光。不知道是不是这里出了问题。希望能有大神指点。
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值,这是怎么回事呢?几乎在0附近,但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的,这是为什么呢?


定量检测包括总RNA提取和纯化、(可能还需要做mRNA提取和纯化)、RT、定量PCR
还需要反转录用的引物、定量PCR用的一对引物、荧光信号源(荧光染料或荧光标记的探针,看你用什么策略来做定量PCR)
报价要看你需要服务商提供什么服务,如果你只提供实验材料,要求服务商做以上全部工作,只检测一个指标(一个基因的表达水平变化),价格大约每个样品350-500元,多一个指标大约多90元。
一般至少做一组数据两个样品嘛,所以你按1000块一组样品预算吧。
定量pcr主要测的是基因的表达水平,比如不同时期 基因的表达有所差异,具体差异了多少倍,就可以使用了。
最近要做realtimePCR,taqman探针法,没有买市场上的产品,可否先用普通taq酶试试?
这样设想的前提是因为,普通Taq酶也具有5‘-3’外切酶活性,如果可以的话,与普通PCR相比,反应体系需要做什么样的改动呢?
用的是ABI的机器。
PCR相关技术问题,可搜索oneshine,在交流专区,有比较全面的技术信息,希望能帮到你
半定量RT-PCR与定量RT-PCR的区别是半定量RT-PCR操作简便,可快速推测样品中特异mRNA的相对数量;而定量RT-PCB可实时定量,较半定RT-PCB更准确。

半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。
定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

半定量RT-PCR需要跑电泳,根据条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低或者是表达量的高低,而定量RT-PCR则无需电泳可以实时监测整个PCR的全程并且由给出的Ct值及Standard Curve来判断gene拷贝数的高低。
定量PCR方法及数据分析123
有木有3803722021-08-06
你所说的PCR应该就是最常规的PCR,以DNA为模板,通过上下游引物,实现DNA的扩增RT-PCR一般情况下是指反转录PCR(reversetranscription),尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也(realtimefluores-cencequantitativePCR)也简称RT-PCR,但是我觉得这是不对的,不推荐。基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录,然后将所获得的cDNA作为模板,设计引物进行扩增,是一种检测基因表达的常用方法。实时荧光定量PCR也就是Real-TimePCR,原理有点多,请自行百度百科,其最大的作用是检测样品中的初始DNA浓度。至于三者的关系,RT-PCR和实时定量PCR应该都属于PCR,在RNA实验中,这二者都会应用到。例如你要比较2个组织中的某基因的表达差异,首先你要提取2个组织的总RNA,然后通过RT-PCR检测该基因是否在2个组织中有表达,然后通过实时定量PCR测定该基因在2个组织中的表达量是否具有显著性差异。
这个指的就是样本中原有目标DNA的数量。

在另外的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。

PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的起始拷贝数了
荧光定量PCR123
2017-10-03
这几天一岁的闺女得手足口病,医院让查这个,荧光定量是查什么的?有什么用啊?尽量说的直白一点,完全不懂啊!
所谓Ct值,就是最先出现超过阈值信号的那个循环数。或者说是到了第几个循环才出现超过阈值的信号。

C代表的是cycle,循环数目,T代表的是threshold,阈值。

所以表达量越少的话,需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高