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eEnzyme是一家美国高质量生物学试剂及检测试剂盒品牌供应商，其与美国国立卫生研究院合作紧密，在全球范围内为广大科研客户提供高品质的产品与技术服务，其主要生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原，细胞因子蛋白，pcr产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂，产品应用于生物技术研究，制药，药物发现，癌症研究，传染性疾病，微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域
eENZYME为科学界生产和销售高质量的生物试剂盒和生物分析试剂盒。与NIH密切合作以保证产品在生命科学研究的多个领域成功地使用。努力提供新颖价廉且有效的工具，使实验更容易成功。产品在科研、生物技术、制药和政府的研究实验室中得到广泛的应用，包括药物发现、癌症研究、传染病研究、微生物学和分子诊断。
【简单介绍】eENZYME生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原，细胞因子蛋白，PCR产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂，产品应用于生物技术研究，制药，药物发现，癌症研究，传染性疾病，微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域。【详细说明】欢迎eENZYMEeENZYME生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原，细胞因子蛋白，PCR产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂，产品应用于生物技术研究，制药，药物发现，癌症研究，传染性疾病，微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域。 Ë ENZYMEis的高品质生物试剂及实验室设备科学界一个制造商和分销商。我们密切合作，与美国国立卫生研究院的社区，以保证我们的产品生命科学研究在广泛领域的成功表现。我们致力于提供创新和具有成本效益的工具，使您更容易取得成功。我们的产品用于在学术，生物技术，制药和政府研究实验室，包括药物发现，癌症研究，传染病研究，微生物学和分子诊断许多不同的应用。公司网站：www.eenzyme.com 目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA（A/California/06/09）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1（H1N1/Pan）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1（A/新喀里多尼亚）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP（A/新Caledonia/20/1999）（甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型（H1N1/A/新喀里多尼亚（H1N1））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3（H3N2）（A/WIS/2005）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5（A/香港Kong/483/97）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1（H5N1）（A/Vietnam/1203/2004）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1（H5N1，禽流感）（A/斑头雁/Qinghai/12/05）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1，人）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1（A/Chicken/NY/29878/91）（H2N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1（A/chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA（A/Chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1（A/duck/Hainan/6/2004）（H6N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1（A/鸡/荷兰/2/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA（A/Chicken/Netherlands/1/03）（H7N7）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11（A/duck/Yangzhou/906/02）（H11N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0031抗B型流感（NP）的多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0032抗B型流感（医管局）多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-013-0100抗-H12（A/pintail/Alaska/102/05）（H12N5）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-014-0100抗-H4（A/environment/Maryland/1101/06）（H4N6）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-018抗-H15（A/Australia/83/00（H15N8））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-019抗-H16（A/Sweden/99（H16N3））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYME目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA（A/California/06/09）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1（H1N1/Pan）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1（A/新喀里多尼亚）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP（A/新Caledonia/20/1999）（甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型（H1N1/A/新喀里多尼亚（H1N1））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3（H3N2）（A/WIS/2005）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5（A/香港Kong/483/97）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1（H5N1）（A/Vietnam/1203/2004）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1（H5N1，禽流感）（A/斑头雁/Qinghai/12/05）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1，人）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1（A/Chicken/NY/29878/91）（H2N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1（A/chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA（A/Chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1（A/duck/Hainan/6/2004）（H6N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1（A/鸡/荷兰/2/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA（A/Chicken/Netherlands/1/03）（H7N7）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11（A/duck/Yangzhou/906/02）（H11N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0031抗B型流感（NP）的多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0032抗B型流感（医管局）多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-013-0100抗-H12（A/pintail/Alaska/102/05）（H12N5）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-014-0100抗-H4（A/environment/Maryland/1101/06）（H4N6）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-018抗-H15（A/Australia/83/00（H15N8））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-019抗-H16（A/Sweden/99（H16N3））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYME目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA（A/California/06/09）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1（H1N1/Pan）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1（A/新喀里多尼亚）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP（A/新Caledonia/20/1999）（甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型（H1N1/A/新喀里多尼亚（H1N1））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3（H3N2）（A/WIS/2005）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5（A/香港Kong/483/97）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1（H5N1）（A/Vietnam/1203/2004）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1（H5N1，禽流感）（A/斑头雁/Qinghai/12/05）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1，人）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1（A/Chicken/NY/29878/91）（H2N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1（A/chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA（A/Chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1（A/duck/Hainan/6/2004）（H6N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1（A/鸡/荷兰/2/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA（A/Chicken/Netherlands/1/03）（H7N7）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11（A/duck/Yangzhou/906/02）（H11N2）兔多克隆抗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请教园友：
一般做mRNA表达的时候，需要注意提取的RNA中是否有DNA污染，或者通过设计跨内含子的引物来解决。那么，检测MmiRNA的时候，需要注意RNA中DNA污染的问题么？
两步法，是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度，而且定量PCR的产物都很短，需要的时候都短，所以两步法更方便。三步法的话，花的时间长，不利于快速实验。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：
对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
几点注意：
1。必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。
4。 最好不用Syber Green
C代表的是cycle，循环数目，T代表的是threshold,阈值。
所以表达量越少的话，需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值，这是怎么回事呢？几乎在0附近，但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的，这是为什么呢？
检测指标是：各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
原理：
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
QPCR在实验室中已经非常普及，现在整理一些关于QPCR的相关资料上传，希望对大家有所帮助。
荧光定量PCR技术（FQ-PCR,也称为Real-timePCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光定量PCR技术原理及利用.pdf(1473.28k)
这样设想的前提是因为，普通Taq酶也具有5‘－3’外切酶活性，如果可以的话，与普通PCR相比，反应体系需要做什么样的改动呢？
用的是ABI的机器。
