| Description: | OTUD6B belongs to the OTU (ovarian tumour) family of deubiquitinating enzymes. Functions of this enzyme are not clear. In vitro, purified OTUD6B has not activity for cleavage of various di-Ub chains. |
| Order #: | H3800-UBP |
| Unit Size: | 50 μg |
| Supplier: | UBPBio |
| Restrictions: | Only available in selected countries. |
| Shipping: | Dry ice |
| Storage: | -80 °C |
| Subcategory: | Deubiquitinating Enzymes |
| More information: | Go to webpage |
MoBiTecGmbH是一家私人控股公司,由StephanDiekmann教授于1987年创立。与Max-Planck学会的密切关系以及德国领先的研究中心之一哥廷根的所在地促进了与某些研究中心的密切合作。德国最具创造力的科学家。此外,MoBiTec一直与欧洲和北美的科学家广泛合作,包括法国巴斯德研究所和荷兰Vrije大学的科学家。通过将许多研究人员的精彩创意商业化,MoBiTec能够提供一系列独特的高质量产品和简化的协议,使实验室生活更轻松,并为实际研究留出更多时间。MoBiTec的产品包括e。G。用于体内检测蛋白质-蛋白质或DNA-蛋白质相互作用的双杂交系统,用于筛选特定肽配体的噬菌粒展示系统和选择具有特异性结合特性的新蛋白质,方便的LamBDaPS基因组文库用于克隆的多功能DNA载体,表达和分析靶基因,有效表达和纯化重组蛋白的试剂盒,细胞转染试剂和细胞培养工具,固定化和可溶性酶,许多用于基因组学和蛋白质组学研究的产品(例如用于PCR,核酸和蛋白质纯化和分析),众多抗体,细胞因子,生长因子和重组蛋白,优质荧光试剂和试剂盒(如蛋白标记试剂盒,标记抗体,细胞染色试剂,柱和凝胶电泳附件)。与其自有产品线并行,MoBiTec分销德国多家国际公司的产品,包括荧光探针和研究化学品(AnaSpec,TEFLabs),量子点,各种DNA纯化试剂盒和DNA聚合酶(EdgeBio),诊断工具(ZJBioTech)),凝胶电泳配件(Amresco,ClareChemical),糖生物学产品(DextraLaboratories,Sumitomo),细胞转染试剂(Mirus)以及抗体,蛋白质,底物,精细化学品和分子和细胞生物学试剂盒 -特别是病毒学,免疫学,神经生物学,细胞凋亡,信号转导,细胞增殖,细胞毒性和癌症研究(MBLI,AGScientific,Amresco,AdarBiotech,AnaSpec,Echelon)。MoBiTec提供全面的服务,从清晰完整的产品文档开始,为客户提供个性化的建议和技术服务。MoBiTec产品通过MoBiTec的总部在德国分销,在其他国家由分销商分销。此外,MoBiTec不断寻求新产品和可销售的许可技术,因此对科学合作非常感兴趣,以开发创新的产品理念。
MoBiTec拥有来自欧洲和北美的研究人员,包括法国的Pasteur研究中心和荷兰的Vrije大学的科学家。MoBiTec公司能提供独一无二的高质量产品,从而简化实验设计,而留出更多更宝贵的时间用于实际的研究。产品包括:双杂交和单杂交系统——体内蛋白-蛋白和DNA-蛋白关系,噬菌体展示系统——筛选特殊的多肽配体和选择具有特异性结合特性的新的蛋白质,LamdaPS基因文库,用于克隆的多功能DNA载体,靶基因的表达与分析,重组蛋白质高效表达和纯化试剂盒,细胞转染试剂和细胞培养工具,各种固体和溶解状态的酶,基因组学和蛋白组学研究产品(PCR,核酸,蛋白质纯化分析),各种抗体、细胞因子、生长因子、重组蛋白质,高级荧光试剂和试剂盒(蛋白质标记试剂盒,标记抗体,细胞染色试剂,钙指示器),亲和层析仪,凝胶分析工具——凝胶柱和凝胶电泳附件。
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一) 酶具有高度的专一性
(二)酶具有很高的催化效率(高效性) 一般地说,醇催化的反应速度比化学催化剂催化的反应速度要市106-1013 倍
(三)反应条件温和 化学催化剂催化化学反应,一般需要剧烈的反应条什(如:高温、高压、强酸、强碱等),但是,酶催化反应(酶促反应)一般是在常温、常压、中性酸碱度等温和的反应条件下进行的.
(四)酶易变性失活 化学催化剂在一定条件下,会因中毒而失去催化能力;而酶比化学催化剂更加脆弱,更易失去活性.凡是使蛋白质变性的因素(加强酸、强碱、高温等),都能够使酶完全失去活性.
(五)体内酶活性是受调控的 在生物体内,酶活性是受到调节控制的.这是酶区别于化学催化剂的又一个重要的特征.对酶活性调控的方式很多,如:反馈调节、共价修饰调节、酶原激活、别构调节、激素调节等.
相同点:都能以DNA为模板,从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物,而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能,而DNA聚合酶没有,当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性,而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性,还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对,所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程;DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程
大多数肝病患者都把转氨酶和肝功能相提并论,提起肝功能,马上就想到转氨酶的高低。其实这种想法是有一定错误的,转氨酶只不过是临床上常用的检查肝脏功能的一项指标,转氨酶的正常与否,并不能代表肝功能的好坏,转氨酶的高低也不是与肝脏功能状态呈比例的。
一、肝脏有哪些功能
人体的肝脏一般在1250克左右,是一个重要的器官,人不能离开肝脏而存活。有人称肝脏为人体的“加工厂”,这不仅不过分,而且也只表达了肝脏的一部分功能而已。肝脏的功能包括:第一,代谢功能。其中包括了合成代谢、分解代谢和能量代谢。人每天摄入的食物中含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质等各种营养物质,这些物质在胃肠内初步消化吸收后被送到肝脏,在肝脏里被分解,“由大变小”,蛋白质变(分解)为氨基酸、脂肪分解为脂肪酸、淀粉分解为葡萄糖,等等,分解后的“小物质”又会根据身体需要再在肝脏内被合成为蛋白质、脂肪和一些特殊的碳水化合物或能量物质等,这是一个“由小变大”的过程。经过这个过程之后,摄入的营养物质就变成了人体的一部分,也就不会“吃猪肉长猪肉了”。在此顺便纠正一下人们普遍存在的某些错误的诸如吃肺补肺,吃肝补肝,吃脑补脑,甚至吃雄性动物的生殖器能够“壮阳”等荒谬的所谓“理论”。可想而知,如果肝脏“罢工”,人体的营养来源就会中断,生命也就危险了。第二,解毒功能。人体代谢过程中所产生的一些有害废物及外来的毒物、毒素、药物的代谢和分解产物,均在肝脏解毒。第三,胆汁生成和排泄:胆红素的摄取、结合和排泄,胆汁酸的生成和排泄都由肝脏承担。肝细胞制造、分泌的胆汁,经胆管输送到胆囊,胆囊浓缩后排放入小肠,帮助脂肪的消化和吸收。第四,造血、储血和调节循环血量的功能。新生儿的肝脏有造血功能,长大后不再造血,但由于血液通过两根血管(门静脉和肝动脉)流入肝脏,同时经过另一根血管(肝静脉)流出肝脏,因此肝脏的血流量很大,肝脏的血容量相应地也很大。如此说来肝脏就象一个仓库,在需要时可以供出一部分血液来,为其他器官所用,比如一个人发生了消化道大出血,血液容量急剧下降,心、脑、肾经受不住缺血,肝脏就可以帮一些忙了。第五,免疫防御功能。肝脏是最大的网状内皮细胞吞噬系统,它能通过吞噬、隔离和消除入侵和内生的各种抗原。另外,肝脏里的淋巴细胞也有很高含量,尤其是在有炎症反应时,血液或其他淋巴组织里的淋巴细胞很快“赶”到肝脏,解决炎症的问题。
二、如何正确认识“转氨酶”
通过以上所述大家对于功能已有基本的发解。是以,“转氨酶”水平的高低几乎不能反应肝脏的功能,转氨酶不过是肝细胞里面的一种成分而已,相比较而言这种成分在肝细胞中的含量比较高,肝细胞一旦遭到打击和破坏,转氨酶就被释放到了血液。而在这个时候,如果损害的肝脏细胞不多,肝脏完全能够正常工作。我们又可以再次用“加工厂”来说明这个问题,要维持正常人的生存,或正常的生命活动,大约只要有1/3的肝脏“开工”即可,就象有些工厂,生产能力大于市场需求,部分工人或部分机器停工不会影响生产线的正常运转。
但是,如何正确认识转氨酶的确是有点学问的。我们说转氨酶水平的高低不能完全代表肝功能的好坏,更确切地说转氨酶水平与肝功能状态不成平行关系。概要地有这么几种情况:①转氨酶水平正常,肝脏损害持续存在。见于某些肝炎病人,比如所谓慢性乙型肝炎病毒携带者,这些人乙型肝炎病毒指标一直阳性,但转氨酶从来没有升高过,可是如果对这样的病人做肝脏活组织检查却能发现肝脏的炎症反应很严重,有的已经发生了纤维化,甚至肝硬化和肝癌;还有不少急性和慢性丙型肝炎病人也有类似情况。②转氨酶水平很高,但不过是一时性的肝损害,不会给肝功能造成很大影响,后果也不很严重,比如服用某种对肝脏毒性较强的药物。我们医院就曾经有位老教授,生病住院期间,就因为吃了一粒药物,转氨酶升高到2 000多单位,停药后两天就恢复到正常;另外,大多数急性甲型肝炎病人在发病期转氨酶水平很高,经过短期休息和治疗后很快恢复正常;一次性大量喝酒也会有类似现象。③黄疸很深,转氨酶不高,甚至正常。有三种情况:一是胆道阻塞,胆汁排泄不畅,做肝功能试验检查时发现血液胆红素很高,而转氨酶不高或轻度升高,可见于胆管结石、胆道和胰头周围的肿瘤患者;二是重型肝炎。这是一种很严重的肝病,病死率很高。患病的早期,转氨酶有不同程度的升高,胆红素在较高的水平上,但随着病情的进展,胆红素越来越高,转氨酶反而下降,及至正常,医学上称之为“胆酶分离”,这是病情严重的信号,靠药物治疗恐已无济于事,条件允许时最好及时做肝移植手术。我们医院在这两年里就处理过十几例这样的病人,其中有一家三兄弟均为严重肝病,经过肝移植后恢复得很好。三是淤胆型肝炎。可由多种原因引起,以肝内小胆管损害为主,导致胆汁分泌异常,比如各种少数急性黄疸型肝
炎、药物性肝炎、妊娠等。④某些肝硬化和肝癌病人,尽管得了晚期肝病,肝功能很糟糕,但转氨酶却是正常的。不少人因为有了大量腹水、消化道出血,或者体检时发现其他异常才得知原发疾病。需要提醒的是,这些所谓“少数”病人在我们医生的病例记载里却不算少,在人们的生活水平普遍提高的今天,每年1~2次健康体检是不可缺少的,能发现不少发病很隐匿、进展很缓慢的疾病,隐源性肝硬化是其中一种。⑤转氨酶长期异常,但水平不高。这多见于慢性肝炎病人,包括慢性乙型和丙型肝炎、自身免疫性肝炎、长期大量饮酒后的酒精性肝炎等。像这种转氨酶水平不是很高,大多在100~200单位之间,或者小于100单位的慢性肝炎病人最需要重视,因为这类病人的人数最众,病情持续发展,预后也最差,最终要发展为肝硬化或肝癌。宜及早采取恰当的治疗,尤其是病毒性肝炎病人的抗病毒治疗。⑥最后还有一类现代文明病,即脂肪肝,表现为转氨酶轻度升高,一般不超过100单位,这种人一般体重超标,或严重超标。近几年来在我们国家“脂肪肝”的发病率逐年上升,这与饮食结构不当、饮食过量、嗜酒无度、缺乏运动等有关,是典型的“富贵病”。过去人们称结核病为“富贵病”,意思是说只有富贵人才生得起的病,实在是一种讽刺。现代人中发病率不断攀升的脂肪肝、高血压、糖尿病、冠心病、胆石症才是真正的富贵病,该引起我们警惕了!
关于“转氨酶”还有一个称谓的问题值得一提。在大众口头上,“转氨酶、GPT、PT、大PT、小PT”用得比较混乱。医学上被简称为转氨酶的有两种,分别是“丙氨酰氨基转移酶”和“门冬氨酸氨基转移酶”。过去分别用英文字母GPT、GOT来简称,现在称ALT和 AST,各家医院的肝功能化验单上都注明了这两种转氨酶,他们都是肝细胞内的酶,如果两种都比较高,而且AST水平超过ALT,一般说明肝细胞损害比较严重,而且特别多见于酒精性肝炎。
参考资料:http://www.labmed.cn/jiaoxue/hychsh/200507/839.html展开
Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。
中文名
荧光素酶报告基因
外文名
Luciferase
底 物
荧光素(luciferin)
生物荧光
bioluminescence
转录因子
反式作用因子
转录因子
行使调控基因表达的蛋白质分子
简介
Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。
应用原理
转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合,这些特异性的序列被称为顺式作用元件,转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。
其原理简述如下:
(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等。
(2) 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。
(3) 加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应,产生荧光,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。
技术流程
(1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
(2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。
(3)筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
(4) 扩增转录因子质粒,提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照,提纯备用。
(5) 培养293(或其它目的细胞),并接种于24孔板中,生长10-24小时(80%汇合度)。
(6) 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
(7)提取蛋白并用于荧光素酶检测。
(8) 加入底物,测定荧光素酶的活性。
(9) 计算相对荧光强度,并与空载对照比较。
发展
双荧光素酶报告基因测试∶ 结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时, 通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal, GUS)不够便利,因为各自的测试化学,处理要求检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL 载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。系统还提供 PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品。对于正在使用萤火虫荧光素酶报告基因载体的研究人员。双荧光素酶报告基因测试系统将使他们体会到该系统的便利。
体外分泌的荧光素基因:目前NEB公司提供新型的可在细胞外分泌的荧光素酶,分别是Gluc和Cluc,具体使用帮助可在NEB官方网站找到.展开
同题,请大神指正
1.反应混合液
15mM4-AA溶液0.10ml
0.2%(w/v)苯酚溶液0.10ml
2.0M甲醇溶液0.25ml
50U/mlPOD溶溶液0.10ml
超纯水0.25ml
备注:
*50U/mlPOD溶液:将500U的POD溶于10ml超纯水中并混匀。
2.反应终止液
无水乙醇
3.酶稀释缓冲液
10mMTris-HCl缓冲液pH=8.0
4.说明
(1)4-AA:4-氨基安替比林
(2)POD:辣根过氧化物酶
5.过程
精确称量约20mg样品,加酶稀释缓冲液至总量为20ml,用酶稀释缓冲液稀释,根据需要调节浓度(χ,χ≤0.04mg/ml)
6.实验
1.准确地吸取1.0ml反应混合液到小试管中后,在37℃预孵育。
2.5分钟后,加入50μL酶溶液,并在37℃混合开始反应。在空白对照中,加入50μL酶稀释缓冲液代替酶溶液。
3.在反应开始5分钟后,加入2.0ml反应终止液以终止反应。
4.测量480nm处的吸光度。
吸光度样本溶液:As
空白对照:Ab
△A=(As-Ab)≤0.20Abs
酶抑制剂新药发现的途径:一是来源于天然化合物,包括动植物和各种微生物等,二是化学合成物。在目前上市的药物中,以受体为作用靶点的药物占52%,以酶为靶点的药物占22%,以离子通道为靶点的药物占6%,以核酸为靶点的药物占3%。因此,酶抑制剂的开发是新药来源的一个主要途径。以酶为靶点开发新药存在巨大潜力,今后很长一段时间仍然是发现新药的重要着手点。
Nutrition.2005Jul-Aug;21(7-8):838-47.
OBJECTIVE:Involvementoflipoxygenase(LOX)andcyclo-oxygenase(COX)oncellulardifferentiationorapoptosisinducedbybutyratehasbeenreportedrecently,buttheeffectontightjunction(TJ)permeabilityhasnotbeenreported.Onemajoractivityofbutyrateand,toalesserextent,propionateistomodulategenetranscriptionviahistoneacetylationbytheirhistonedeacetylaseinhibitoractivity.Inthisstudy,weevaluatedtheactivationofLOXandCOXinTJpermeabilitychangesbyshort-chainfattyacids,butyrate,propionate,andacetateinintestinalmonolayercellsandtheirpossIBLemechanismbyhistoneacetylation.METHODS:TheeffectsofLOXandCOXinhibitorsonTJpermeabilityandtheexpressionofLOXorCOXmRNAinducedbyshort-chainfattyacidswereinvestigatedinCaco-2cellsusingTranswellchambers.Theeffectsofhydroxyeicosatetraenoicacid(aproductofLOX)onTJpermeabilitywerealsoevaluated.Theeffectsofshort-chainfattyacidswerecomparedwiththoseoftrichostatinA(histonedeacetylaseinhibitor).RESULTS:ALOXinhibitorclearlyinhibitedtheeffectofbutyrateonTJpermeability,whereasCOXinhibitorsdidnot.TheLOXandCOXinhibitorspartlyinhibitedtheeffectsofpropionatebutnotofacetate.ButyrateincreasedLOXmRNAexpression,andhydroxyeicosatetraenoicacidandtrichostatinAmimickeditseffect.CONCLUSION:Theseresultssuggestthatshort-chainfattyacids,especiallybutyrate,induceTJpermeabilitychangesthroughLOXactivationthroughhistoneacetylation.
在肠腔,短链脂肪酸可以通过激活脂肪氧化酶的活性从而改变单层细胞间紧密连接的通透性
目的:最近,有文献报道了丁酸盐可以诱导细胞的分化或者凋亡,并且这种效应与脂肪氧化酶(LOX)以及环氧合酶(COX)有关,但是,关于丁酸盐对紧密连接的影响目前未见报道。人们已经知道,丁酸盐以及丙酸盐都可以通过他们对组蛋白去乙酰化酶的抑制作用从而引起组蛋白的乙酰化,并最终实现对基因转录的调控。在我们的研究中,我们研究了短链脂肪酸、丁酸盐、丙酸盐以及醋酸盐对肠上皮细胞间紧密连接通透性的影响,以及这种变化过程中LOX和COX的活化情况,并且研究了这些物质引起组蛋白乙酰化的可能机制。
方法:实验者利用Caco-2细胞以及Transwell小室建立肠腔的体外模型,研究了几种LOX、COX抑制物质对紧密连接通透性的影响,以及对LOX、COXmRNA水平的影响。同时,还研究了羟基二十碳四烯酸(这是一种LOX的催化产物)对TJ通透性的影响。在实验中,研究者还将几种短链脂肪酸的效应与曲古抑菌素A(一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂)的效应进行了比较。
结果:使用LOX抑制剂能够明显的抑制丁酸盐所引起的紧密连接通透性的增加,而COX抑制剂则没有这种作用。丁酸盐能够增加细胞中LOXmRNA的表达水平,而羟基二十碳四烯酸以及曲古抑菌素A也都有类似的作用。
结论:以上结果表明,短链脂肪酸,尤其是丁酸盐,能够通过对组蛋白的乙酰化作用活化LOX,并且导致肠上皮细胞间紧密连接通透性的增加。

