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求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤
样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。

细菌RNA试剂盒提完后有DNA污染，去除DNA的方法：做普通pcr，看看条带对不对。DNase I 处理，酚氯仿抽，然后isopropanol沉淀，DEPC水溶。 不需专门灭火，因为在反转录前有一个步骤是加热变性。一般是75度5min 后面取不超过40%反转录体积的RNA用于反转录，但反转录前最好检测一下RNA质量，免得浪费反转录酶。
但是，这样做的前提的，RNA提得要好，浓度要高，这样免得RNA降解到不能用了。因为在有二价阳离子的（DNAseI buffer含有）情况下，RNA在60度以上时必然发生非酶促降解。

我想构建一个细胞的全长CDNA文库，不知哪位大虾用过Clontech公司的SMARTcDNALibraryConstructionKit。效果怎么样？价位大约多少？还有无其它试剂盒？谢谢！！！

艾思进三种试剂盒中的一个，就这三种试剂盒，比较可以的。

众所周知，RNA是一种相当不稳定的分子，它在这一方面可比DNA差远了。我们大家在实验室里基本上都耳闻目睹过，处理这种核酸时发生的悲惨故事。幸运的是，随着RNA研究逐渐成为主流，可供选择的商业化工具也越来越丰富越来越成熟。
RNA制备过程中究竟有哪些问题需要注意，又有哪些工具可以助我们一臂之力呢，且听下文分解。
RNA制备的四大祸害碱性条件、金属离子和高温都会促使RNA分子水解。因此，RNA操作一般在0°C-4°C的中性或微酸性缓冲液中进行，人们也常常在其中添加螯合剂，比如0.1mMEDTA。有些应用不允许EDTA的存在，这时可以通过离子交换树脂来去除阳离子。
在制备RNA时，RNase一直是个令人头疼的大问题，因为这种酶基本上无处不在。生物样品本来就含有RNase，它们存在于细胞的小隔间里，当细胞被裂解时这些RNase就释放出来。另外，实验室操作也很容易引入RNase。“这种酶到处都是，我们皮肤细胞上就有。如果你戴着手套接触了脸或者手臂，也会沾到一些RNase，”Promega公司的产品经理EricVincent提醒道。
在收获组织或细胞时，“提取RNA要越快越好，或者就想办法令RNase失活，”NEB公司的RNA研究带头人BretRobb指出。
如果不能立刻提取RNA，就应当通过速冻来稳定样本，或者将样本储存在特殊的RNA保存液中，比如AllProtectTissueReagent、RNAlater。此外，PreAnalytiX公司的PAXgeneBloodRNATube也很适合保存这样的样本，“不仅能确保RNA的安全，而且让细胞不会因为温度或缓冲液条件的改变表达任何转录本，”Qiagen公司的MartinSchlumpberger介绍道。PreAnalytiX是BD和QIAGEN的一个合资公司。
绝大多数RNA分离试剂盒中的裂解缓冲液（例如Qiagen公司的RNAEasy），“可以失活任何样本所带的RNAse，”Schlumpberger解释道。“这些产品对于RNA来说是相当安全的。”如果你更喜欢自己DIY，那么异硫氰酸胍、酚/氯仿和SDS都能帮你保护样本中的RNA。
据介绍，RNA纯化之后对环境中的RNAse最为敏感，这个时候需要特别注意预防RNAse的污染。
可不可以做到万无一失如何才能保证RNA实验的成功，这已经是一个老生常谈的问题了。RNA操作时应该戴上一次性手套，并且在专门的空间里进行，尤其要与质粒制备和细菌操作分开。操作者尽量不要接触洁净度不能令人百分百放心的物品。
我们来看看NEB公司是如何做到万无一失的。NEB公司的RNA实验室统一使用RNA专用的一次性耗材。他们认为高压灭菌会使溶液中的微生物释放出RNase，而这些RNase会在灭菌之后复性。因此NEB公司只信任经过认证的无RNAse器皿，抛弃了高压灭菌过程。Robb介绍道，目前市面上有许多经过认证的RNA专用产品（试剂盒、试剂和耗材），进行RNA实验已经比十几年前容易得多了。
“过去人们在配制溶液的时候总是胆战心惊，恨不得屏住呼吸进行称量和搅拌，以免把RNase带到样本中去，”他解释道。而现在，你可以很方面的买到各种无RNAse的试剂，从水、1MTris到5MNaCl。“使用这些试剂可以为RNA实验提供额外的保障。”
许多无核酶的塑料产品都经过了第三方的检测和认证，MoBioLaboratories就提供这样的服务。“我们可以帮助制造商建立始终如一的无污染生产线，”培训操作者如何识别和消除污染源，MoBio公司的CarlTsang介绍道。
我国大多数实验室还是使用玻璃器皿，这些器皿至少需要在180°C的条件下烘烤几个小时，才能确保将RNAse永久性地摧毁。之后，研究者们可以通过商业化的试剂盒进行RNAse检测，比如NEB公司的RNAse污染分析试剂盒。
添加剂的使用DEPC（Diethylpyrocarbonate）一直被用于处理水和溶液，失活其中的RNAse。“多余的DEPC可以在高压锅中去除，因为DEPC在高温下很不稳定，会释放出CO2然后消失，”Schlumpberger说。不过许多人并不爱和这种可能致癌的化合物打交道，Schlumpberger强调，如果没有正确处理，残余的DEPC也会使RNA失活。
对于那些不能高压灭菌的器物，我们可以用RNaseAway试剂处理，然而将其浸泡在无RNAse的水里。
Vincent指出，RNAse抑制剂的使用应当成为常规。以Promega公司的RNAsin为例，RNAse抑制剂能够特异性结合并抑制实验室中常见的RNAse，包括RNAseA、B、C和人胎盘RNAse。“等你发现引入了RNAse时往往已经太迟了，多加一层保险是很有必要的，”他说。
只要我们了解威胁RNA的主要因素（高pH、高温、金属离子和内切酶），就能够想办法一一化解。这时你会发现，RNA制备其实并没有那么难。
http://seq.cn/article-10584-1.html

向左转|向右转

tRNA（又叫转运RNA）约含70~100个核苷酸残基，是分子量最小的RNA，占RNA总量的16%，现已发现有100多种。tRNA的主要生物学功能是转运活化了的氨基酸，参与蛋白质的生物合成。
各种tRNA的一级结构互不相同，但它们的二级结构都呈三叶草形。这种三叶草形结构的主要特征是，含有四个螺旋区、三个环和一个附加叉。四个螺旋区构成四个臂，其中含有3′末端的螺旋区称为氨基酸臂，因为此臂的3′-末端都是C-C-A-OH序列，可与氨基酸连接。三个环分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示。环Ⅰ含有5，6二氢尿嘧啶，称为二氢尿嘧啶环（DHU环）。环Ⅱ顶端含有由三个碱基组成的反密码子，称为反密码环；反密码子可识别mRNA分子上的密码子，在蛋白质生物合成中起重要的翻译作用。环Ⅲ含有胸苷（T）、假尿苷（ψ）、胞苷（C），称为TψC环；此环可能与结合核糖体有关。tRNA在二级结构的基础上进一步折叠成为倒“L”字母形的三级结构（图3-2-6）。
tRNA分子中稀有碱基的数量是所有核酸分子中比例最高的，这些稀有碱基的来源是转录之后经过加工修饰形成的。
tRNA共有61种，对应61种氨基酸的密码子（64种密码子中，2个是起始密码子，且对应一定氨基酸；3个是终止密码子，不对应氨基酸）

各位大哥大姐，我要构建文库，要分离mRNA，因为是第一次做，所以很多都不清楚，请问哪种从总RNA中分离mRNA的试剂盒比较好用一点？能否推荐一下？:?)

各位大侠好，我想做有关CDNA文库构建的东西，但是不知道改用何种方法提取mRNA，现在好像流行用trazol提RNA，但是不知道提取出来的RNA质量如何，能不能保证其中的没有剪切之前的mRNA的内含子不被降解？如果不行，那用什么办法好？多谢了。
另外还有，提完RNA后用RNase-freeDNase处理RNA会不会影响RNA的质量？

不管是扫描的图片或文本格式，只要简明且扼要

Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit是一套用于以RNA为模板高效合成第一链cDNA的完整系统，可合成长达13kb的cDNA。试剂盒配套提供的RiboLockRNase Inhibitor，可有效防止RNA模板的降解。试剂盒配套提供oligo(dT)18引物和随机六聚体引物。oligo(dT)18引物可以选择性地 与mRNA中的poly (A)尾结合。随机六聚体引物无需poly (A)尾，因此可转录mRNA 5’-端区域，也可以无poly (A)尾的RNA (如micoRNA)为模板合成cDNA。该试剂盒也可使用基因特异性引物。Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明优点：• 合成全长的第一链cDNA，最长可合成13kb的cDNA• 最佳反应温度为42℃• 完全一提供RT反应所需的所有组分应用:• 第一链cDNA合成，作为RT-PCR和实时RT-qPCR的模板• 构建全长cDNA文库• 反义RNA合成Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit合成全长cDNA1 μg小鼠心脏总RNA作为模板，用oligo(dT)18 引物进行逆转录反应。由此合成的cDNA，再作为Taq DNA Polymerase后续PCR扩增的模板。末端2024 bp片段的成功扩增，表明长度为13.8 kb的全长RN***段得到成功的逆转录。

天跟试剂盒提取多糖多酚植物总rna浓度一直很低是什么原因
用醌指纹法描述微生物群落的参数[7]有：(1)醌的类型和不同类型的醌的数目；(2)占优势的醌及其摩尔分数含量；(3)总的泛醌和总的甲基萘醌的摩尔分数之比；(4)醌的多样性和均匀性；(5)醌的总量等。对两个不同的群落，由上述分析所得数据可以计算出另一个参数____非相似性指数(D)，用于定量比较两个群落结构的差异。
醌指纹法具有简单快速的特点，近几年来广泛用于各种环境微生物样品(如土壤，活性污泥和其它水生环境群落)的分析。