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Enzymatics/Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-)/3,000 U/P7090L
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Enzymatics/Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-)/3,000 U/P7090L
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酶科技公司
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P7090L
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Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) catalyzes the extension of a primed DNA template in the 5′→3′ direction. This enzyme lacks any inherent 3′→ 5′ and 5′→ 3′ exonuclease activities and exhibits no measurable strand displacement function.

Source of ProteinPurified from a strain of E. coli that expresses the recombinant Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) gene.

Supplied in:100 mM KPO41.0 mM DTT0.1 mM EDTA50% GlycerolpH 6.5 @ 25°C

Supplied With:B0110 (10X Blue Buffer)

10X Blue Buffer (B0110)500 mM NaCl100 mM Tris-HCl100 mM MgCl210 mM DTTpH 7.9 @ 25°C

Unit DefinitionOne unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10 nmol of dNTP into acid-precipitable material in 30 minutes at 37°C.

Enzymatics专注于于酶产品的研发,为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商,使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括:试剂、供应链解决方案,应用科学,其测序产品市场占有率达80%。


酶科技公司产品包括八类:超纯连接酶如T4连接酶、超纯poly酶、ArcherTM系列测序工具(ArcherProducts)、连接蛋白、DNA修饰酶、NGS文库制备(NGSLibraryConstruction)、核酸和RNA酶。


Enzymatics是分子生物学试剂和制造服务的L先供应商,提供了无与伦比的质量,*性和价值的商业基因组科学界。该公司在美国制造商在ISO13485认证,专注于建立长期合作伙伴关系,并利用内部和外部创新的突破性技术商业化。


Enzymatics专注于于酶产品的研发,为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商,使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括:试剂、供应链解决方案,应用科学。目前市场上80%测序产品来自Enzymatics(“Todayourproductsunderpinover80%ofthesequencingreactionsthatarerunaroundtheglobe”)。Enzymatics产品的好处之一--能提高效率:NatureMethods中提到“使用Enzymatics超纯连接酶,连接步骤的效率得以提高,连接片段的产量增加了20-30%”。好处之二--有效降低测序成本:遗传学界的泰斗GeorgeChurch更是认为Enzymatics是"apowerfulcatalystinthedemocratizationofsequencing"。合作伙伴包括:BGI,BerryGenomics,Illumina,454LifeSciences和IonTorrentSyst,皆对Enzymatics的出品赞不绝口。


Enzymatics--核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix--N2050L,N2050F

核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix

摘要:四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)

产品描述

Anequimolar(25mM)mixtureofthefournaturaldeoxynucleotides.

四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)

SuppliedAs:25mMeachdNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)atpH7.5

产品信息

PartNumberN2050L,N2050F

Concentration25mM

UnitSize100µmol,20µmol

产品特性

StorageTemperature-25to-15°C

Purity≥99%

BasePurity≥99.5%

Pyrophosphate≤0.003pmol/pmolofnucleotide

EnzScript™(MMLV逆转录酶,RNaseH-)

摘要:基于RNA的DNA聚合酶,无核酸内切酶活性

产品描述:

EnzScript™(M-MLV逆转录酶RNaseHminus)属于RNA依赖的DNA聚合酶,该酶无RNaseH活性。EnzScript™被用于从polyAmRNA或总RNA中产生首链CDNA以用于下游的一些用途,如RT-PCR,cDNA克隆或RNA-Seq的文库构建。RNaseH结构域中的点突变能增加酶的热稳定性,相比于野生型M-MLV逆转录酶,它支持全长转录物种产生更高的cDNA产量

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21世纪初期,二代测序(NGS)成为应用日益广泛的商业化技术。在十几年的时间里,数据的大量生成为分子生物学领域带来了巨大的进步。从1964年首个被测序的tRNA分子到如今人类基因组测序的实现,科技以极快的速度在发展。与此同时,引发了对高纯度、高质量的相关产品的需求,如寡核苷酸(oligonucleotides)的合成。 在文库构建过程中由于DNA接头(barcodes)的使用而造就的二代测序的多重分析能力(multiplexing ab... 查看更多>
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我的目的蛋白D2,是膜表达蛋白,构建了三种载体的重组质粒,分别为CMV,pCDNA3.1,pEGFP-N1,三个重组质粒酶切正确、测序正确,也曾表达过,可以砸出相应大小的目的条带。大提过后,有近一个半月没有进行转染表达,突然发现我的质粒不能砸出目的条带了,甚至外源性的anti-Flag都砸不到(pEGFP重组质粒转染可以观察到微弱荧光,比以前较少),已经重修小提过,也重新进行了酶切,进行测序,都没有问题,现在就是砸不到条带(阳性对照的Flag每次都可以),请各位大神帮忙!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

1.TaqMan探针 针染色体同SNP位点别设计PCR引物TaqMan探针进行实荧光PCR扩增探针5’-端3’-端别标记报告荧光基团淬灭荧光基团溶液存PCR产物该探针与模板退火即产适合于核酸外切酶性底物探针5’-端连接荧光探针切割破坏两荧光间PRET发荧光通用于少量SNP位点析
2.SNaPshot 该技术由美应用物公司(ABI)发基于荧光标记单碱基延伸原理型技术称测序主要针等通量SNP型项目含测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临态位点5’-端同度延伸引物PCR产物模板反应体系引物延伸碱基即终止经ABI测序仪检测根据峰移位置确定该延伸产物应SNP位点根据峰颜色知掺入碱基种类确定该本基型于PCR产物模板通重PCR反应体系获通用于10-30SNP位点析
没有专门的“测序酶”的说法。
你所说的“测序酶”在一般情况下就是“聚合酶”。
因为目前的的测序方法主要就是借助聚合反应。
当然,有些测序方法(比如曾经的SOLiD系统)是利用连接反应,那么它用的“测序酶”肯定是连接酶。
估计,也就是这个原因有人把它。
蛋白质的酶水解过程研究123
℡欠诚灬2017-10-03
●目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶(proteolytic enzyme)或称蛋白酶(proteinase)已有十多种。
●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸,也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转
PCR程延伸阶段温度升72摄氏度左右高温度所溶液四种脱氧核苷酸需要耐高温Taq DNA聚合酶作用据碱基互补配原则合新DNA链
我在做基因敲除实验(CRISPR/Cas9),实验室一直都是直接送测序验证的,又看到资料说,有用T7E1酶的,也有用SURVEYOR的。
不是很相信网上的商家,遂求助各位路过的大虾们,有用过的吗?这些酶特异性怎样啊?贵不贵,跟我直接测序相比,有优势吗?
1.TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。

1、目的基因与质粒载体(pET21b)双酶切连接,转DH5a感受态细胞,挑取单菌落,菌落PCR可以P出目的条带(引物是pET21b载体上设计的),扩大培养,提取质粒,但是双酶切只有一条带,测序显示目的基因已连在载体上,双酶切了很多次,都切不出来目的条带,也不是酶切体系(20-100ul都尝试过)和酶切时间(3-4h,过夜都试过)的问题。

求高手指点,到底哪里出问题了!!!

高通量测序技术(High-throughput sequencing)又称“下一代”测序技术(Next-generation sequencing technology),以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。
根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等,主要有以下几种:大规模平行签名测序(Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆(Polony Sequencing)、454焦磷酸测序(454 pyrosequencing)、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序(Ion semiconductor sequencing)、DNA 纳米球测序 (DNA nanoball sequencing)等。 基因分析仪(即DNA测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法),因此通过单引物PCR测序反应,生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物,使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳,从而避免了泳道间迁移率差异的影响,大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同,在毛细管电泳中的迁移率也不同,当其通过毛细管读数窗口段时,激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测,激发的荧光经光栅分光,以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光,并在CCD摄影机上同步成像,分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列,从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。

利用NheI和HindIII双酶切插入目的片段,为什么双酶切有目的片段和切开的质粒,测序却没有?

并且测序后在NheI位点后的序列变成了-GGCTAGGTAC-Kpn位点(CGTTTAAACTTAAGCTTG消失。之前和之后的序列都相符),之间的怎么都没了?

片段长度143bp,酶切位点kpn1和Hind3,连入pGL3b载体,测序引物公司用的pGL3-,第一次反向测序不成功,原因是质粒出现重叠峰,正向加测后成功,对比发现下游引物的酶切位点(Hind3)少了一个碱基(aagtcc变成aagct),重组质粒酶切切不出插入片段;之后将测序成功的质粒重新转化DH5α,再提质粒酶切还是切不出来。质粒小提试剂盒Qiagen的,提取菌液1.5mL,浓度608.2ng/uL,酶切质粒2ug。
【之前构建的4个重组质粒里也有两个出现这样的问题(aagtcc变成agtcc),但是酶切能切出插入的片段】
目前问测序公司得到的答复是样品可能不是单克隆,测序结果是不准确的,建议重新挑取单克隆测序。
不知道还有没有别的方法?