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ACROBiosystems/Human HGF R / c-MET Protein, His Tag/1mg/MET
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ACROBiosystems/Human HGF R / c-MET Protein, His Tag/1mg/MET
品牌 / 
ACROBiosystems
货号 / 
MET
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  • Synonym
    MET,AUTS9,HGFR,RCCP2,c-Met
  • Source
    Human HGF R, His Tag (MET-H5227) is expressed from human 293 cells (HEK293). It contains AA Glu 25 - Thr 932 (Accession # AAI30421.1).
    Predicted N-terminus: Glu 25
    Request for sequence
  • Molecular Characterization
    Online(Glu 25 - Thr 932) AAI30421.1

    This protein carries a polyhistidine tag at the C-terminus. The mature form of HGFR is a disulfide-linked heterodimer composed of proteolytically cleaved α and β chain. Each α and β chain has a calculated MW of 32.5 kDa and 70.2 kDa. The protein migrates as 40-45 kDa and 85-90 kDa under reducing (R) condition (SDS-PAGE) due to glycosylation.

  • Endotoxin
    Less than 1.0 EU per μg by the LAL method.
  • Purity

    >92% as determined by SDS-PAGE.

  • Formulation

    Lyophilized from 0.22 μm filtered solution in PBS, pH7.4. Normally trehalose is added as protectant before lyophilization.

    Contact us for customized product form or formulation.

  • Reconstitution

    Please see Certificate of Analysis for specific instructions.

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  • Storage

    For long term storage, the product should be stored at lyophilized state at -20°C or lower.

    Please avoid repeated freeze-thaw cycles.

    This product is stable after storage at:

    1. -20°C to -70°C for 12 months in lyophilized state;
    2. -70°C for 3 months under sterile conditions after reconstitution.
SDS-PAGE
Human HGF R, His Tag (Cat. No. MET-H5227) SDS-PAGE gel

Human HGF R, His Tag on SDS-PAGE under reducing (R) condition. The gel was stained overnight with Coomassie Blue. The purity of the protein is greater than 92%.

Bioactivity-ELISA
Human HGF R, His TagHuman HGF R, His Tag (Cat. No. MET-H5227) ELISA bioactivity

Immobilized Human HGF/Hepatocyte Growth Factor at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human HGF R, His Tag (Cat. No. MET-H5227) with a linear range of 0.039-0.313 μg/mL (Routinely tested).

Protocol
  • Background
    Hepatocyte growth factor receptor (HGFR) is also known as mesenchymal-epithelial transition factor (MET), c-Met, andis a glycosylated receptor tyrosine kinase that plays a central role in epithelial morphogenesis and cancer development. HGFR protein possesses tyrosine-kinase activity. The primary single chain precursor protein is post-translationally cleaved to produce the alpha and beta subunits, which are disulfide linked to form the mature receptor. HGFR is normally expressed by cells of epithelial origin, while expression of HGF is restricted to cells of mesenchymal origin. Upon HGF stimulation, HGFR induces several biological responses that collectively give rise to a program known as invasive growth. Abnormal HGFR activation in cancer correlates with poor prognosis, where aberrantly active HGFR triggers tumor growth, formation of new blood vessels (angiogenesis) that supply the tumor with nutrients, and cancer spread to other organs (metastasis). HGFR is deregulated in many types of human malignancies, including cancers of kidney, liver, stomach, breast, and brain. Normally, only stem cells and progenitor cells express HGFR, However, cancer stem cells are thought to hijack the ability of normal stem cells to express HGFR, and thus become the cause of cancer persistence and spread to other sites in the body. Various mutations in the HGFR gene are associated with papillary renal carcinoma. HGFR mediates a complex program known as invasive growth. Activation of HGFR triggers mitogenesis, and morphogenesis.
  • References
      
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2016年12月19日,美国食品和药物管理局(FDA)批准了Foundation Medicine公司的FoundationFocus CDxBRCA产品,成为市场上第一个基于二代测序的伴随诊断试剂盒。 查看更多>
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 近年来,二代测序(NGS)以其快速、高准确率和低成本的优势逐渐替代了一代测序,不断蓬勃发展。市场中上主流的 NGS 平台包括 IlluminaSolexa、Roche 454、ABI SOLID 和 Life Ion Torrent。NGS 使基因检测产业化成为了可能,现已广泛应用于产前诊断、肿瘤及多种遗传病的预防与治疗。为了得到良好准确的测序结果,减少测序过程中不必要的尝试,降低测序成本,上机测序前要求必须了解测序文库样品的大小... 查看更多>
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高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变,一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定,因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing)足见其划时代的改变,同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能,所以又被称为深度测序(deep sequencing)。自从2005年454LifeSciences公司(2007年该公司被Roche正式收购)推出了454FLX焦磷... 查看更多>
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利用NheI和HindIII双酶切插入目的片段,为什么双酶切有目的片段和切开的质粒,测序却没有?

并且测序后在NheI位点后的序列变成了-GGCTAGGTAC-Kpn位点(CGTTTAAACTTAAGCTTG消失。之前和之后的序列都相符),之间的怎么都没了?

蛋白质的酶水解过程研究123
℡欠诚灬2017-10-03
●目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶(proteolytic enzyme)或称蛋白酶(proteinase)已有十多种。
●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸,也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转
没有专门的“测序酶”的说法。
你所说的“测序酶”在一般情况下就是“聚合酶”。
因为目前的的测序方法主要就是借助聚合反应。
当然,有些测序方法(比如曾经的SOLiD系统)是利用连接反应,那么它用的“测序酶”肯定是连接酶。
估计,也就是这个原因有人把它。

1、目的基因与质粒载体(pET21b)双酶切连接,转DH5a感受态细胞,挑取单菌落,菌落PCR可以P出目的条带(引物是pET21b载体上设计的),扩大培养,提取质粒,但是双酶切只有一条带,测序显示目的基因已连在载体上,双酶切了很多次,都切不出来目的条带,也不是酶切体系(20-100ul都尝试过)和酶切时间(3-4h,过夜都试过)的问题。

求高手指点,到底哪里出问题了!!!

1.TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
3.HRM法 高分辨率熔解曲线分析(HRM)是近几年兴起的SNP研究工具,它通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况,来判断是否存在SNP,而且不同SNP位点、是否是杂合子等都会影响熔解曲线的峰形,因此HRM分析能够有效区分不同SNP位点与不同基因型。这种检测方法不受突变碱基位点与类型的局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨率熔解,即可完成对样品基因型的分析。该方法无需设计探针,操作简便、快速,成本低,结果准确,并且实现了真正的闭管操作。
4.Mass Array法 MassARRAY分子量阵列技术是Sequenom公司推出的世界上领先的基因分析工具,通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF-MS技术相结合,实现基因分型检测。基于MassARRAY平台的iPLEX GOLD技术可以设计最高达40重的PCR反应和基因型检测,实验设计灵活,分型结果准确性高。根据应用需要,对数十到数百个SNP位点进行数百至数千份样本检测时,MassARRAY具有最佳的性价比,特别适合于对全基因组研究发现的结果进行验证,或者是有限数量的研究位点已经确定的情况。
5.Illumina BeadXpress法 采用Illumina公司的BeadXpress系统进行批量SNP位点检测,可以同时检测1-384个SNP位点,往往用于基因组芯片结果确认,适合高通量检测。微珠芯片具有高密度、高重复性、高灵敏度、低上样量、定制灵活等特点,极高的集成密度,从而获得极高的检测筛选速度,在高通量筛选时可显著降低成本。向左转|向右转
构建重组质粒,在pSET4S质粒上插入一段基因的上下游同源臂,双酶切验证正确,同时以重组质粒为模板PCR扩增插入的片段,均与阳性对照一致,但测序结果进行NCBI比对,发现插入的一段序列不正确。而且这个重组质粒曾经构建出来过,因其中一个碱基突变所以重新构建,使用了primestar重新构建却总是测序不正确或者酶切不正确

目的片段用kpn1和xho1双酶切,然后连接到PGL4.10上,结果用RPV3测序出来目的序列是反向互补的,这是什么原因导致的?

SNP数据构建系统进化树123
爆儿███2b揯2017-10-02
1.TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
1.TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
我在做基因敲除实验(CRISPR/Cas9),实验室一直都是直接送测序验证的,又看到资料说,有用T7E1酶的,也有用SURVEYOR的。
不是很相信网上的商家,遂求助各位路过的大虾们,有用过的吗?这些酶特异性怎样啊?贵不贵,跟我直接测序相比,有优势吗?

我的目的蛋白D2,是膜表达蛋白,构建了三种载体的重组质粒,分别为CMV,pCDNA3.1,pEGFP-N1,三个重组质粒酶切正确、测序正确,也曾表达过,可以砸出相应大小的目的条带。大提过后,有近一个半月没有进行转染表达,突然发现我的质粒不能砸出目的条带了,甚至外源性的anti-Flag都砸不到(pEGFP重组质粒转染可以观察到微弱荧光,比以前较少),已经重修小提过,也重新进行了酶切,进行测序,都没有问题,现在就是砸不到条带(阳性对照的Flag每次都可以),请各位大神帮忙!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!