
His-SDF-1αPDF
Catalog Number:
E13-005-1Amount:
10μgBackground:
SDF-1 (stromal cell-derived factor-1), also called CXCL12, is small cytokine belonging to the chemokine family. The two forms, SDF-1 α/CXCL12a and SDF-1 β/CXCL12b, are produced in cells by alternate splicing of the same gene. SDF-1 signal through its receptor CXCR4, and have been shown tochemoattract B and T cells, induce migration of CD34+ stem cells. Additionally, SDF-1 and its receptor CXCR4 are involved in human disease states (e.g. HIV/AIDS) and cancer metastasis.Gene ID:
NP_954637Amino acid sequence:
MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMENLYFQGKPVSLSYRCPCRFFESHVARANVKHLKILNTPNCALQIVARLKNNNRQVCIDPKLKWIQEYLEKALNKActivity:
ELISA to measure SDF-1 binding activity (Figure B). SDF-1 was immobilized on the plate and was detected by anti SDF-1 antibody(Santacruz sc-6193).Form of Antibody:
Lyophilized from a 0.22μm filtered solution at a concentration of 1mg/ml in PBS.Reconstitution:
We recommend that this vial be briefly centrifuged prior to opening to bring the contents to the bottom. Reconstitute in sterile distilled water to a concentration of 1.0 mg/ml.Shipping&Stablity:
The Product is shipped at ambient temperature. Upon reconstitution, the preparation is stable for up to 1 month at 2-8°C. For long term storage, apportion the reconstituted preparation into working aliquots and store at -20°C to -70°C. Avoid repeated freeze/thaw cycles.Price:
125$Research Area:
Stem Cells Cancer Cardiovascular Cell Biology Epigenetics & Nuclear Signaling Developmental Biologys Immunology Drug Discovery Products Metabolism Neuroscience Signal Transduction
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两个基因大小分别230kb和450kb,酶切后,450kb的有目的条带,但很弱,230kb的质粒条带亮,其下方有一很微弱条带,用的酶分别是:Ncol和Spel体系是(Takara,两个酶切体系不同,用的官网推荐体系):
NcoI1μl
Spel1μl
10×KBuffer2μl
0.1%BSA2μl
DNA3ul
灭菌水upto20μl37℃4h电泳1h
根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等,主要有以下几种:大规模平行签名测序(Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆(Polony Sequencing)、454焦磷酸测序(454 pyrosequencing)、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序(Ion semiconductor sequencing)、DNA 纳米球测序 (DNA nanoball sequencing)等。 基因分析仪(即DNA测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法),因此通过单引物PCR测序反应,生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物,使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳,从而避免了泳道间迁移率差异的影响,大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同,在毛细管电泳中的迁移率也不同,当其通过毛细管读数窗口段时,激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测,激发的荧光经光栅分光,以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光,并在CCD摄影机上同步成像,分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列,从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。
利用NheI和HindIII双酶切插入目的片段,为什么双酶切有目的片段和切开的质粒,测序却没有?
并且测序后在NheI位点后的序列变成了-GGCTAGGTAC-Kpn位点(CGTTTAAACTTAAGCTTG消失。之前和之后的序列都相符),之间的怎么都没了?
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
3.HRM法 高分辨率熔解曲线分析(HRM)是近几年兴起的SNP研究工具,它通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况,来判断是否存在SNP,而且不同SNP位点、是否是杂合子等都会影响熔解曲线的峰形,因此HRM分析能够有效区分不同SNP位点与不同基因型。这种检测方法不受突变碱基位点与类型的局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨率熔解,即可完成对样品基因型的分析。该方法无需设计探针,操作简便、快速,成本低,结果准确,并且实现了真正的闭管操作。
4.Mass Array法 MassARRAY分子量阵列技术是Sequenom公司推出的世界上领先的基因分析工具,通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF-MS技术相结合,实现基因分型检测。基于MassARRAY平台的iPLEX GOLD技术可以设计最高达40重的PCR反应和基因型检测,实验设计灵活,分型结果准确性高。根据应用需要,对数十到数百个SNP位点进行数百至数千份样本检测时,MassARRAY具有最佳的性价比,特别适合于对全基因组研究发现的结果进行验证,或者是有限数量的研究位点已经确定的情况。
5.Illumina BeadXpress法 采用Illumina公司的BeadXpress系统进行批量SNP位点检测,可以同时检测1-384个SNP位点,往往用于基因组芯片结果确认,适合高通量检测。微珠芯片具有高密度、高重复性、高灵敏度、低上样量、定制灵活等特点,极高的集成密度,从而获得极高的检测筛选速度,在高通量筛选时可显著降低成本。向左转|向右转
请教高人,这样的问题怎么解决?
多谢
用takara的in-fusion方法做了个重组质粒,如左图PCR验证,右起第二道是空载质粒为模板的对照。右图是酶切验证,两个图片结合起来觉得除了第四个单克隆外,其他几个应该都可能是阳性克隆。结果送了1,2两个样品后测序的结果都不对。为什么会这样。
2.SNaPshot 该技术由美应用物公司(ABI)发基于荧光标记单碱基延伸原理型技术称测序主要针等通量SNP型项目含测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临态位点5’-端同度延伸引物PCR产物模板反应体系引物延伸碱基即终止经ABI测序仪检测根据峰移位置确定该延伸产物应SNP位点根据峰颜色知掺入碱基种类确定该本基型于PCR产物模板通重PCR反应体系获通用于10-30SNP位点析
期待着高手们的指点,谢谢。
以这些标准看,目前的基因组测序结果,还没有一个是完美的。
人类基因组:缺点在哪里?
首先,人类基因组还不够精确。人是“二倍体”,也就是有一半遗传物质来自父亲,一半遗传物质来自母亲,且在受精卵形成过程中,还会发生基因重组,这是人类遗传多样性的来源之一。科学家们需要更精确的“单倍型”数据,这样基因组才够“完美”,而这种“完美”正是研究者们追求的目标。
其次,人类基因组还不够多元。
按照传统的人种分类,人类按照肤色黑白黄棕,被粗分为四大类:尼格罗人种、高加索人种、蒙古人种、澳大利亚人种。基因组测序数据是从高加索人种开始的,人类基因组计划是人类的标准参考基因组,也是高加索人种的标准参考基因组。文特尔的基因组,测序对象是他自己,同样是高加索人种。
然而,从基因组研究的角度,为了尽可能地包括各种遗传背景,需要为更多族裔建立自己的参考基因组。
资料来源:http://www.mv163.cn/jkgl/news/2015/1224/5227.html
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。

