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Diagenode/HighCell# ChIP kit  protein G x48/C01010063
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Diagenode/HighCell# ChIP kit protein G x48/C01010063
品牌 / 
Diagenode
货号 / 
C01010063
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Materials Blot Cell BA 83 0.2 µ m pore nitrocellulose sheets Buffer, PBS-Tween 20 Antigenic proteins, antibodies, and horseradish peroxidase labeled anti 查看更多>
Immunoprecipitation and Immune Complex kinase assay--according to Tamara Hurley 1) Wash cells with cold "Tris" (from Margie"s shelf).Spin down the cells if you 查看更多>
一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点: (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去 。 (2 查看更多>
Grow a 2 ml culture, 24 hr. at 30oC in selective media When culture is ready, use it to inoculate about 55 ml (50 ml plus 5 for O.D.600 readings) of selective 查看更多>
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1 石蜡切片脱蜡和水化后,用PBS(PH7.4)冲洗三次,每次5分钟。PBS配制 (2000ml)PH7.4氯化钠: 17g磷酸二氢钠:0.4g磷酸氢二钠:6.3g2 根据每一种抗体的要求,对组织抗原进行相应的修复。我科采用压力锅进行抗原修复,取一定量的修复液于压力锅中,加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或 查看更多>
1. Wash adherent cells twice in the dish or flask with ice-cold PBS and drain off PBS. Wash non-adherent cells in PBS and centrifuge at 800 to 1000 rpm in a ta 查看更多>
确定肿瘤的类型时,检测肿瘤细胞的增殖活性时,在某些肿瘤的组织病理诊断中,借助于检测肿瘤细胞表面或细胞内的一些特定的分子,称为肿瘤免疫组织化学标记物。确定肿瘤的类型,除了依靠其临床表现、影像学和形态学特点,还借助于检测肿瘤细胞表面或细胞内的一些特定的分子,例如通过免疫... 查看更多>
该软件可用于常规的影像分析,免疫荧光和免疫组化中组织细胞和染色的组织切片中的生物形态分析,组织培养和具有与流式细胞相似的工作台的细胞培养。该软件可以显示单个细胞,多细胞结构和宏观生物形态的特点的多种测量参数通过散点图上的蜂窝数据。以阴性对照为基础的不同分析背景上的 cut-off 值可以被设定以确定阴阳细胞比例,结构等。圈选功能可以确定感兴 查看更多>
个人经验,仅供参考:1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA差,不过我们试过几种奶粉,有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉,多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大,不太容 查看更多>
一、设备和试剂1.设备① 电泳电源Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply (BIO-RAD,Catalog#165-3323)② 电泳仪及附件Mini-PROTEAN 3 El 查看更多>
Preparation of Nuclear Extracts for Gel Shifts and Westerns BlotsThe following protocol is optimized for about 107 cells (near confluent 10 cm plate). NOTE: AL 查看更多>
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在确诊乳腺癌的检查中,对穿刺活检和手术活检取得的组织,都要做常规病理检查。免疫组化是对取下的人体组织做进一步的处理,进行特殊的染色,这对于明确是不是癌症、是什么类型的乳腺癌有很大的帮助。如果常规病理尚不能确定肿块的性质,则需要进行免疫组化染色,以进一步明确疾病的性质。
免疫组化和免疫荧光的区别 123
╭⌒°1285____2017-10-02
免疫组化和免疫荧光都是蛋白定位的检测(也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜)。
免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜的现像和放大作用,在细胞,亚细胞水平检测各种抗原物质,并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学技术现已有:免疫荧光组织(细胞)化学技术、免疫酶组织(细胞)化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。免疫荧光组织(细胞)化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物上带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光素发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以达到对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。
免疫组化中,所染色的蛋白的位置与该蛋白的特性有关系。在现有所研究的蛋白中,不少蛋白存在核转位的情况, 也就是说当细胞培养的环境或者刺激的因素不同,该蛋白会出现从胞浆到细胞核的表达位置的改变。有时候表达不变仅仅是从胞浆转位到细胞核,有时候还伴有表达的上调,比如nf-kb。
有条件就分开没条件不分开关系也不大吧

石蜡切片组织茜素红钙染色试剂盒产品说明书(中文版)

主要用途

石蜡切片组织茜素红(ALIZARINREDS)钙染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和鳌和技术,使钙离子和茜素红S产生复合物,来分析存档中的石蜡包埋的组织切片中橘红色钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,显色清晰。

技术背景

茜素红(ALIZARINREDS)是一种蒽醌(anthraquinone)衍生物:9,10-二氢-3,4-二羟基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸单钠盐(9,10-Dihydro-3,4-dihydroxy-9,10-dioxo-2-anthracenesulfonicacidsodiumsalt),又称媒介红3(MordantRed3)或茜素磺酸钠(Sodiumalizarinesulfonate)。其分子式为C14H7NaO7S,分子量为342.25。茜素红和钙离子以鳌和方式形成复合物,用以识别组织细胞的钙盐成分。钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过茜素红染色,产生桔红色沉积,但会受到其它金属元素的干扰。

产品内容

脱蜡液(ReagentA)自备

补水液A(ReagentB)100毫升

补水液B(ReagentC)100毫升

补水液C(ReagentD)100毫升

补水液D(ReagentE)100毫升

清理液(ReagentF)30毫升

染色液(ReagentG)10毫升

产品说明书1份

保存方式

保存在4℃冰箱里;染色液(ReagentG),避免光照;试剂具有腐蚀性,注意操作安全。有效保证3月

用户自备

小型染色缸:用于石蜡切片的脱蜡操作

光学显微镜:用于组织细胞染色后观察分析

实验步骤

一、脱蜡处理

1.取出10片待测的石蜡包埋的组织切片(注意:石蜡包埋前,组织切片须用10%甲醛4℃条件下,固定16小时,此步很重要)

2.(选择步骤)放进80℃烘箱,孵育30分钟

3.(选择步骤)室温下静置15分钟

4.按下表依次放进小染色缸里孵育


染色缸

孵育时间



50毫升脱蜡液(ReagentA)

15分钟



50毫升脱蜡液(ReagentA)

15分钟



50毫升脱蜡液(ReagentA)

15分钟



50毫升补水液A(ReagentB)

3分钟



50毫升补水液B(ReagentC)

3分钟



50毫升补水液C(ReagentD)

3分钟



50毫升补水液D(ReagentE)

3分钟


5.小心移去切片上的补水液D(ReagentE)

6.小心加上200微升清理液(ReagentF)在切片上,铺满整个切片样品表面

7.室温下孵育5分钟

8.小心移去切片上的清理液(ReagentF)

二、样本染色处理

1.小心加上200微升染色液(ReagentG),铺满整个切片样品表面

2.室温下孵育2分钟(注意:可以延长至20分钟);或直至可见桔红色

3.小心移去切片上的染色液(ReagentG)

4.空气中晾干

三、样本澄清处理

1.小心加上200微升补水液B(ReagentC)在切片上,铺满整个切片样品表面

2.小心移去切片上的补水液B(ReagentC)

3.重复实验步骤1和2二次

4.小心加上200微升补水液A(ReagentB)在切片上,铺满整个切片样品表面

5.小心移去切片上的补水液A(ReagentB)

6.重复实验步骤4和5二次

7.小心加上200微升脱蜡液(ReagentA)在切片上,铺满整个切片样品表面

8.小心移去切片上的脱蜡液(ReagentA)

9.重复实验步骤7和8一次

10.放上盖玻片或封片

11.即刻在一般光学显微镜下观察:钙沉积阳性细胞呈现桔红色

注意事项

1.本产品为50次操作

2.操作时,须带手套

3.试剂具有腐蚀性,注意操作安全

4.石蜡包埋前,组织样品须用10%甲醛4℃条件下,固定16小时,否则造成样品支离破碎

5.所有操作在室温下进行

6.试剂溶液在样品表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满样品表面

7.样品染色避免过度,肉眼可见桔红色即可终止染色

8.组织细胞染色完成后,即刻进行光学显微镜观察

9.本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品

质量标准

1.本产品经鉴定性能稳定

2.本产品经鉴定显色清晰


我打算从中山公司定SANTACRUZ公司的mmp-9抗体,但是听师姐说这个公司
的抗体不容易染色,哪为同仁有这方面的经验?另外基因公司卖的cellsignalingtechnology的抗体要1875元,而中山公司卖的这个抗体只有800多,其中差距在哪里?请赐教
一·第二代聚合酶两步法( PV,En Vision) PV-9000是2001年投入美国市场的,它是将二抗抗体分子的单价Fab段与酶聚合在一起,与一抗结合后,直接用底物进行显色的方法。此方法由于简单、快速、敏感性强且避免了内源性生物素所造成的背景染色,以有逐渐取代其他免疫酶组织化学检测方法的趋势。 PV法操作流程 1石蜡切片脱蜡至PBS。 2 0.3%H2O2甲醇液或3%H2O2室温孵育20min。 3 抗原修复。 4滴加适当稀释的一抗370C 60min或40C过夜。 5 PBS洗涤。 6 酶标记二抗370C 30min或室温60min。 7 DAB(0.04%)显色(镜检控制),水洗、复染、封片二·sp法是一抗+生物素化二抗+HRP标记的链霉卵白素(HRP标记的亲和素) 一般的sp法步骤啊,具体如下: 1.烤片,68℃,20分钟, 2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min 3.阻断 灭活内源性过氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min; 4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min。 5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗. 6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照); 滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min; 7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min; 8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后, 苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片。三·检测试剂盒 灵敏度高而极易控制背景的检测系统试剂盒是最为理想也是免疫组化染色优劣的关键,根据免疫组化技术发展至今PV系列及SP试剂盒更优于其它试剂盒。检测系统应与一抗来源相匹配,否则检不出目的物。如一抗是鼠单或多抗的,二抗就应该是羊或兔抗鼠的。四·建议选SP,亦可根据实验室习惯及在组织中的表达情况来定
那要看你检测什么了,通常检测GAG用阿新蓝染色或甲苯胺蓝,检测胶原当然是免疫组化染色最好,如果没条件就用MASSON三色吧!
请问有内有大神使用ABC法或SABC法进行蜡块免疫组化染色的,有ABC法的国产二抗试剂盒没,使用过的留个试剂公司名称和货号好吗?

我是做肝细胞肝癌和胆管细胞癌的免疫组化

这是之前的抗体做出来的效果,EDTA修复,1:400的浓度(抗体100微升,0.1mg/ml,价格3000多),效果很好。




后来过期了,就又买了一支(抗体100微升,0.2mg/ml,价格7000多,贵很多),过程一样,EDTA、高压、酶修复,浓度1:200300350400500都试过,4度过夜、封闭等,都试过,就是做不粗来。

现在就是淋巴细胞强阳,肿瘤不阳,谁能帮我看看什么原因。我已经找不到什么理由了




有没有朋友使用碧云天的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒做过细胞衰老,本人小白,求相关细胞处理的过程及数据分析方法。贴壁细胞六孔板需要接种多少,染色后怎样计数进行数据处理。谢谢啦!

最近开始做TUNEL染色,第一次按罗氏protocol做的,阴性对照是没有显色的。没做阳性对照。第二次、第三次做出来背景都很深,肾小管每个细胞核上都染上了棕黄色,DAB染色很快,几秒就变一片黄。具体步骤是:1烤片脱蜡至水2.蛋白酶K20ug/ML37℃10分钟3.tunel液冰上配置后加组织上,37度1h。4.pod液37℃30min5.DAB显色。在蚂蚁淘中检索后,优化了实验条件,在蛋白酶K前加了3%H2O2封闭10min,缩短了tunel液至40min。这是第三次的结果大家帮我看看

这是对照组

这是模型组

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