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多孔结构密度计 Biochrom WPA C08000 Biochrom
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1石蜡切片脱蜡和水化后,用PBS(PH7.4)冲洗三次,每次5分钟。PBS配制(2000ml)PH7.4氯化钠:17g磷酸二氢钠:0.4g磷酸氢二钠:6.3g2根据每一种抗体的要求,对组织抗原进行相应的修复。我科采用压力锅进行抗原修复,取一定量的修复液于压力锅中,加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,盖上锅盖,扣上压力阀,继续加热至喷气,从喷气开始计时,2分钟后,压力锅离开热源,冷却至室温(也可以稍冷后,在自来水龙头下加速冷却)。取出玻片,先用蒸馏水冲洗两遍(用蜡在组织周围划圈,防止抗体跑散,但圈要大一点),之后用PBS(PH7.4)冲洗三遍。每次5分钟。柠檬酸缓冲液的配制(PH6.0)0.1M柠檬酸:(4.2g+200ml蒸馏水)0.1M柠檬酸三钠(14.7g+500ml蒸馏水)取柠檬酸三钠41ml+柠檬酸9ml加入450ml蒸馏水中,总量为500ml即可。3配制3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶,孵育十分钟。PBS90ml+30%过氧化氢10ml,现用现配并摇匀,盖上盖子,防止见氧分解挥发。4PBS冲洗三次,每次5分钟。5滴加4%羊血清封闭,室温30分钟,以减少非特异性染色。PBS10ml+正常羊血清400ul6甩去羊血清,根据不同的项目配制并滴加不同的一抗,浓缩型的抗体一定要在购买后先用已知的阳性片做梯度实验,根据结果情况找出最佳稀释浓度再用到临床诊断。工作液也应该在购买后先用已知的阳性片检测抗体的染色效果,直接滴加即可。每次还应带上阳性对照和阴性对照,以保证结果的可靠性。每张切片滴加足够量的一抗并放入湿盒,防止切片干燥影响结果,室温孵育2小时。抗体稀释液的配制牛血清白蛋白:2mg叠氮钠:10~20ml双蒸水:10ml7PBS冲洗三次,每次5分钟。8滴加二步法EnVisionTM孵育30分钟。9PBS冲洗三次,每次5分钟。10甩去PBS液,每张切片滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,阳性信号为棕黄色或棕褐色。一般显色时间为5分钟左右,终止反应,自来水充分冲洗。11苏木素复染,0.1%盐酸酒精分化,氨水返兰或自来水返兰(自来水返兰时间要稍长些,应该在显微镜下看以下苏木素复染情况),自来水冲洗。12梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,阅片并总结染色结果。

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