GlucosestarvationcausestranslocationofAMPKβ2tothelysosomeinHEK-293cellsthatisdependentonN-myristoylation.Theexperimentwasperformedinβ2KOcellsasinFig.1c,exceptthatthelysosomalMarkerLAMP1(taggedwithRFP)wasco-expressedwiththewild-typeormutantAMPKβ2.Upperpanelsshowmergedimagesstainedblue(4′,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI),nuclei),red(LAMP1,lysosomes)andgreen(AMPKβ2,detectedusingantibodyvalidatedine),incellsincubatedwithorwithoutglucosefor20 min.Lowersmallpanelsaremagnificationsoftheareasindicatedbydashedboxesintheupperpanels,showing(LtoR)redandgreenchannelsandmergedimages.

下面的这段话是图注，图注的意思我明白，但是我想知道merge后的图看什么颜色的荧光，蓝色是细胞核，红色是lysosome(位于胞质），绿色是AMPKβ2，该实验是想观察AMPKβ2是否转位到lysosome上了，如果确实发生了AMPKβ2转位到lysosome上，那么merge后是红色与绿色融合在一起，是吗？融合在一起发什么颜色的光了？

我是做肝细胞肝癌和胆管细胞癌的免疫组化。

这是之前的抗体做出来的效果，EDTA修复，1:400的浓度（抗体100微升，0.1mg/ml，价格3000多），效果很好。

后来过期了，就又买了一支（抗体100微升，0.2mg/ml，价格7000多，贵很多），过程一样，EDTA、高压、酶修复，浓度1:200300350400500都试过，4度过夜、封闭等，都试过，就是做不粗来。

现在就是淋巴细胞强阳，肿瘤不阳，谁能帮我看看什么原因。我已经找不到什么理由了

我是做肝细胞肝癌和胆管细胞癌的免疫组化。

这是之前的抗体做出来的效果，EDTA修复，1:400的浓度（抗体100微升，0.1mg/ml，价格3000多），效果很好。

后来过期了，就又买了一支（抗体100微升，0.2mg/ml，价格7000多，贵很多），过程一样，EDTA、高压、酶修复，浓度1:200300350400500都试过，4度过夜、封闭等，都试过，就是做不粗来。

现在就是淋巴细胞强阳，肿瘤不阳，谁能帮我看看什么原因。我已经找不到什么理由了

有没有朋友使用碧云天的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒做过细胞衰老，本人小白，求相关细胞处理的过程及数据分析方法。贴壁细胞六孔板需要接种多少，染色后怎样计数进行数据处理。谢谢啦！

石蜡切片组织茜素红钙染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

石蜡切片组织茜素红（ALIZARINREDS）钙染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和鳌和技术，使钙离子和茜素红S产生复合物，来分析存档中的石蜡包埋的组织切片中橘红色钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

茜素红（ALIZARINREDS）是一种蒽醌（anthraquinone）衍生物：9,10-二氢-3,4-二羟基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸单钠盐（9,10-Dihydro-3,4-dihydroxy-9,10-dioxo-2-anthracenesulfonicacidsodiumsalt），又称媒介红3（MordantRed3）或茜素磺酸钠（Sodiumalizarinesulfonate）。其分子式为C14H7NaO7S，分子量为342.25。茜素红和钙离子以鳌和方式形成复合物，用以识别组织细胞的钙盐成分。钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过茜素红染色，产生桔红色沉积，但会受到其它金属元素的干扰。

产品内容

脱蜡液（ReagentA）自备

补水液A（ReagentB）100毫升

补水液B（ReagentC）100毫升

补水液C（ReagentD）100毫升

补水液D（ReagentE）100毫升

清理液（ReagentF）30毫升

染色液（ReagentG）10毫升

产品说明书1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（ReagentG），避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全。有效保证3月

用户自备

小型染色缸：用于石蜡切片的脱蜡操作

光学显微镜：用于组织细胞染色后观察分析

实验步骤

一、脱蜡处理

1．取出10片待测的石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）

2．（选择步骤）放进80℃烘箱，孵育30分钟

3．（选择步骤）室温下静置15分钟

4．按下表依次放进小染色缸里孵育

染色缸

孵育时间

50毫升脱蜡液（ReagentA）

15分钟

50毫升脱蜡液（ReagentA）

15分钟

50毫升脱蜡液（ReagentA）

15分钟

50毫升补水液A（ReagentB）

3分钟

50毫升补水液B（ReagentC）

3分钟

50毫升补水液C（ReagentD）

3分钟

50毫升补水液D（ReagentE）

3分钟

5．小心移去切片上的补水液D（ReagentE）

6．小心加上200微升清理液（ReagentF）在切片上，铺满整个切片样品表面

7．室温下孵育5分钟

8．小心移去切片上的清理液（ReagentF）

二、样本染色处理

1．小心加上200微升染色液（ReagentG），铺满整个切片样品表面

2．室温下孵育2分钟（注意：可以延长至20分钟）；或直至可见桔红色

3．小心移去切片上的染色液（ReagentG）

4．空气中晾干

三、样本澄清处理

1．小心加上200微升补水液B（ReagentC）在切片上，铺满整个切片样品表面

2．小心移去切片上的补水液B（ReagentC）

3．重复实验步骤1和2二次

4．小心加上200微升补水液A（ReagentB）在切片上，铺满整个切片样品表面

5．小心移去切片上的补水液A（ReagentB）

6．重复实验步骤4和5二次

7．小心加上200微升脱蜡液（ReagentA）在切片上，铺满整个切片样品表面

8．小心移去切片上的脱蜡液（ReagentA）

9．重复实验步骤7和8一次

10．放上盖玻片或封片

11．即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现桔红色

注意事项

1．本产品为50次操作

2．操作时，须带手套

3．试剂具有腐蚀性，注意操作安全

4．石蜡包埋前，组织样品须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎

5．所有操作在室温下进行

6．试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

7．样品染色避免过度，肉眼可见桔红色即可终止染色

8．组织细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

9．本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定显色清晰