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TheNativeAntigenCompany/Mouse Anti-Feline Leukemia Virus P27 Antibody (M453)/100µg/MAB12389-100
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MOUSE ANTI-FELINE LEUKEMIA VIRUS P27 ANTIBODY (M453)

Mouse anti Feline leukemia virus p27 antibody (M453) reacts with the p27 of FeLV (anti gag). The antibody is suitable for Western blot and enzyme immunoassay (EIA) applications (ELISA and Lateral Flow). It can be used for detection in Sandwich ELISA as a matched pair with MAB12388 as a capture antibody.

PRODUCT DETAILS – MOUSE ANTI-FELINE LEUKEMIA VIRUS P27 ANTIBODY (M453)

  • Mouse anti Feline leukemia virus p27 monoclonal antibody (M453).
  • Reacts with FeLV p27 (anti gag).
  • Suitable for use in Western blot, ELISA and Lateral Flow applications.
  • Purified by Protein G Sepharose chromatography. Greater than 90% pure.
  • Presented in phosphate buffered saline, pH 7.2, 0.09% sodium azide.

BACKGROUND

Feline leukemia virus (FeLV) is a widespread pathogen of the domestic cat and (Cornell University, 2016) and was first described in 1964. FeLV is an RNA virus belonging to the family Retroviridae and its genome contains three genes: envelope (env) coding for the glycoprotein 70 (SU) and the transmembrane protein p15 (E) (TM); the polymerase (pol) gene coding for reverse transcriptase, protease and integrase; and the group specific antigen (gag) gene coding for the structural proteins of the virus. FeLV exists in four immunologically closely-related subtypes: A, B, C, and T. As well as the so-called exogenous FeLV, two forms of endogenous (enFeLV) gamma retroviruses are also known in the domestic cat: the endogenous feline leukaemia virus and the RD114 virus. The enFeLV are not pathogenic and not of veterinary importance (Lutz et al., 2010). FeLV assembles at the plasma membrane. The precursor of the viral structural proteins Pr65Gag is thought to attach to the underside of the membrane. Once bound, the Pr65Gag proteins multimerise, triggering the membrane to bend around the forming core. Env proteins associate with the nascent particle through their co-localisation on the membrane until an immature particle is formed. A scission event then takes place, releasing the immature virion, at which time the viral protease cleaves Pr65Gag into distinct matrix (MA), capsid (CA) and nucleocapsid (NC) proteins. As they bud from the infected cell, nascent virions acquire the envelope glycoprotein Env, comprising the surface (SU) glycoprotein gp70 and transmembrane (TM) protein p15E. Gp70 is the target for neutralising antibodies in recovered cats and is an essential component of FeLV vaccines (Willett and Hosie, 2013).

FeLV is transmitted mostly by direct contact via saliva, nasal secretions, and milk by mutual grooming or occasionally by bites. It can also be transmitted indirectly via contact with faeces from FeLV-viremic shedders. Transmission from mother to offspring also occurs occasionally. Young kittens are especially susceptible to FeLV infection while with increasing age cats become more resistant to infection. The pathogenesis of FeLV infection varies according to the host immune response. The main host outcomes following infection are complete elimination of FeLV following an effective immune response, an abortive infection from a partially effective immune response that clears the viraemia but does not prevent proviral integration (regressive infection), and persistent viraemia with proviral integration (progressive infection). Persistently FeLV viremic cats suffer from three major disease complexes, namely immune suppression, anaemia, and lymphoma. FeLV infection is usually diagnosed by the detection of the FeLV core protein p27 in the peripheral blood by double-sandwich antibody ELISA or by Immunochromatography. The presence of p27 is a marker of infection but not always of viremia as in many cats soluble p27 occurs in the absence of infectious virus (Lutz et al., 2010). The prevalence of FeLV in cats has decreased significantly in the past 25 years since the development of an effective vaccine and more accurate testing procedures (Cornell University, 2016).

REFERENCES

  • Coffin JM (1979). Structure, replication, and recombination of retrovirus genomes: some unifying hypotheses. J Gen Virol 42, 1-26.
  • Feline leukemia virus factsheet. Cornell University College of Veterinary Medicine, May 2016.
  • Feline leukaemia virus factsheet. Small Animal Veterinary Surveillance Network (SAVSNET), University of Liverpool, September 2019.
  • Lutz et al. (1980c): Quantitation of p27 in the serum of cats during natural infection with feline leukemia virus. In: Feline Leukemia Virus, Hardy WD, Essex M, McClelland A, (eds); Development in Cancer Res 4 , 497505, Elsevier/North Holland.
  • Regina Hofmann-Lehmann et al. (2018). Feline Leukaemia Virus Infection. Advisory Board on Cat Diseases (ABCD).
  • Willett and Hosie (2013). Feline leukaemia virus: half a century since its discovery. Vet J. 195(1):16-23.

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人造纤维的一个类别,指由从牛奶、大豆、花生、玉米等自然物中提取到的蛋白质为原料,溶解于适当溶剂中所制得的纤维。该纤维在20世纪30年代开始实现工业化生产,随着众多合成纤维的问世,相继停止生产。由于该纤维手感柔软,穿着舒适;进入90年代以来,又有生产者开始从牛奶中提取乳酪蛋白... 查看更多>
Preparation of Brain Cytosol1. Chill a glass plate on ice. 2. Place brain tissue on the chilled glass plate and cut slices of brain into small pieces. 3. Resus 查看更多>
制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础,抗体质量的高低将直接影响试验的成败。 通过不同方法制备的抗体往往与多种杂蛋白混杂在一起,为了获得成分相对单一的抗体或将抗体用于特定的用途,就需要进行抗体纯化。从成分的角度分析, 抗体分子是一类蛋白质分子,与其他蛋白质一样... 查看更多>
糖化血清蛋白(GSP)与糖化血红蛋白相似,反映的是过去1~3周平均血糖浓度,由于所有糖化血清蛋白都是果糖胺,故认为测定果糖胺主要是测定糖化血清蛋白。由于血清蛋白合成比血红蛋白快(清蛋白半衰期约20天),所以糖化血清蛋白的浓度反映的是近1~3周血糖的情况,在反映控制血糖效果上比糖... 查看更多>
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血清蛋白质是各种蛋白的复杂混合物。可利用不同的方法将其分离。血浆中的白蛋白、a1、a2、β球蛋白,纤维蛋白原,凝血酶原和其它凝血因子等均由肝细胞合成。γ球蛋白主要来自浆细胞。当肝脏发生病变时,肝细胞合成蛋白质的功能减退,血浆中蛋白质即会发生质和量的变化。临床上用各种方法检... 查看更多>
丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸铵沉淀法;(低温)有机溶剂沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超滤法;透析法;离子交换层析和冷冻干燥法……1,丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单,但是常常导致蛋白质变性。2,免疫沉淀法:得有特异性抗体!3,硫酸铵沉淀法:利用高浓度 查看更多>
表1 Common problems for electrophoresis and western bloting 问 题可能原因建议解决方法推荐电压条件下电泳时间过长。电泳缓冲液过稀。配制新鲜缓冲液,使用1X稀释液。推荐电压条件下电流过高,热量过大。电泳缓冲液过稀。配制新鲜缓冲液,使用1X稀释液。推荐电压条件下电 查看更多>
到目前为止,蛋白质结构解析的方法主要是两种,x射线衍射和NMR。近年来还出现了一种新的方法,叫做Electron Microscopy。其中X射线的方法产生的更早,也更加的成熟,解析的数量也更多,我们知道,第一个解析的蛋白的结构,就是用x晶体衍射的方法解析的。而NMR方法则是在90年代才成熟并发展起来的。这 查看更多>
解离/非解离native缓冲液系统很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳(zone electrophoresis)的研究使用一种缓冲液系统,该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠(SDS),一种离子型去污剂,它通过包围在多肽骨架的周围变性蛋白质。在包含有过量的SDS和巯基 查看更多>
肽的溶解性及储存肽的疏水性 氨基酸可以根据其其侧链的性质归类如下: 非极性氨基酸(疏水性) 小的:Cys、Pro、Ala、Thr 大的:Val、Ile、Leu、Met、Phe 中性氨基酸 大的:Trp、Tyr、His 极性氨基酸(亲水性) 小的:Ser、Gly、Asp、Asn 大的:Glu、Gln、Lys、Arg 可 查看更多>
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蛋白质的分离纯化方法123
哲宇丶01962021-08-16
一.血清ǐ-球蛋白的初步提取
1. 血细胞与血清分离:
取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞,上部为血清).
2. 乳糜粒分离:4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心
梯度液配置:离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积加0.5MnaCl+0.3MEDTA,PH7.4 乳糜粒上浮,将乳糜粒吸出,留其余液体备用.
3. 血清蛋白分离:除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白质.
我有些问题向各位请教:
①在用超滤白蛋白,IgG中硫酸铵盐时,膜包该如何选择?选择几个?
②如用凝胶过滤来分级纯化血清中65%硫酸铵盐析出的白蛋白和纯化33%硫酸铵盐析出的IgG,其填充介质应选择什么?其洗脱缓冲液应用什么好?

下面有些关于这方面的数据,供参考:
①牛血清白蛋白:分子量:66210;分子形状:椭圆形;分子大小:
40Å*140Å;等电点:4.7;血浆中的含量:52.0g/L。
②IgG:分子量:15300;分子形状:球状;等电点:5.8—7.3;血浆中含量:2.0g/L。
③另外,我从书上看到说:凝胶过滤在分级方法中分辨率为中等,但对脱盐效果优良;流速较低,对分级每周期约≥8小时,对脱盐仅30分钟;适用于大规模纯化的最后步骤,在纯化过程的任何阶段均可进行脱盐处理,尤其适用于两种缓冲液交替时。
期待您的帮助,谢谢您。
只要求定性它在蛋白中存在,已经知道kda,但是提纯比较困难。
55KDa与24KDa目的条带处的目的条带为什么成“小草”一样,旁边没有mark的话就没有条带,有mark就出现“小草”样的条带,请各位大神答疑解难?感激不尽
his-tag的蛋白,40多kD,提的包涵体,溶解后有不少杂带,大小条带都有,相对量倒是不大。现在兔子已经四免了,得到了抗血清。该如何纯化血清,得到较多的针对目的蛋白的抗体呢。
可以先用柱子提纯包涵体里的his-tag蛋白,然后再IP么?
谢谢
芯片生化反应概述.pdf123
晚安8642021-07-31
一般认为血清白蛋白的正常值为40-55g/L,血清球蛋白为20-30g/L,血清总蛋白的正常值为60-80g/L,白球比的正常值为1.5-2.5。向左转|向右转
根据什么来确定它是清蛋白还是γ-球蛋白?判定它们纯度的依据是什么?
就是血清里面的蛋白A高出了正常的比例。也就是说原本那个东西100才对的而你那个已经是110了。
我目前正在做一种牛血清培养CHO细胞外泌表达的蛋白纯化,可是,再上了离子交换柱后,再上亲和层析,发现目的蛋白与杂蛋白都吸附上了,通过电泳结果,杂蛋白主要来自于培养用的牛血清中,如此复杂的工作如何进行?如果用无血清培养细胞,表达方面是否受到影响?请高手指点。
清蛋白分子量小,电泳移动的最快,所以在最前面。
保存方法如下:
  1.以沉淀形式保存在高浓度的硫酸铵中。
  2.添加50%甘油冷冻,尤其适用于酶类。
  3.如果样品要用于生物学检测,避免使用防腐剂。在体内实验中不能添加防腐剂,而应当将样品分装成小份冷冻。
  4.可使用无菌滤器以延长保存时间。
  5.添加稳定剂,如甘油(5-20%)、血清白蛋白(10mg/ml)、配基(浓度取决于活性蛋白的浓度)以帮助维持生物活性。
  6.避免反复冻融或冻干重溶解过程,这样很可能会降低生物活性。
  7.一些冷沉淀蛋白会在4度沉淀出来,包括一些小鼠IgG3亚族的抗体,不能保存在4度冰箱中,可添加防腐剂保存在室温中。
动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,具有不同基因的B淋巴细胞合成不同的抗体.当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞.被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞(浆细胞)和记忆B细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中.如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆.单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体. 简介 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上,创建立杂交瘤技术,他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细胞融合,成为杂交细胞系,既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性,又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点.将这种杂交瘤作单个细胞培养,可形成单细胞系,即单克隆.利用培养或小鼠腹腔接种的方法,便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体,其结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的,而且在培养过程中,只要没有变异,不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能.这种单克隆抗体是用其他方法所不能得到的. 这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题,可用于探讨①蛋白质的精细结构;②淋巴细胞亚群的表面新抗原;③组织相容性抗原;④激素和药物的放射免疫(或酶免疫)分析;⑤肿瘤的定位和分类;⑥纯化微生物和寄生虫抗原;⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合,将药物带至病灶部位.因此,单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究,为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景. 2制备过程 1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程. 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射. 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞. 2、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液. 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇.在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞. 3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基.在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡. 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡. 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖. 4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化.通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养.采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增.经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存. 5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法. (1)体内诱生法 取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理.1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞.杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体.约1-2周,可见小鼠腹部膨大.用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体. (2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养.在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体.但这种方法产生的抗体量有限.各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗体的生产量.
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