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Tebu-Bio/BPS/5 DUMONT INOX Standard Tip/12each/07907379-12
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Tebu-Bio/BPS/5 DUMONT INOX Standard Tip/12each/07907379-12
品牌 / 
Tebu
货号 / 
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Product name
5 DUMONT INOX Standard Tip
Catalog number
07379-12 (12each)
Description
Source
Polysciences Europe
Product category
Lab Consumables
Product sub category
Plastics & Accessories
Shipment info
Room Temperature
Nacres Codification
NA.83
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蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台, 该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁 淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、 运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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METHOD 1:Formaldehyde preservative – 2% formaldehyde solution in protein-free phosphate-buffered saline (PBS).Prepare as follows:Add 2 g paraformaldehyde powde 查看更多>
一、原理 1949年Barr等发现,在雌性体细胞中的两条X染色体有一条(或这条的大部分)处于凝集不活动状态,从而形成X-小体(或称X-染色质、性染色质、Barr小体)。进而发现,所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体,当在个用雌或雄体中,有多于2条X染色体时,在间期细胞内除一条外,其余均 查看更多>
DAPI Staining To visualize DNA, incubate fixed samples with 100 ng/ml 4",6"-diamidino-2-phenylindole hydrochloride (DAPI) in PBS for 30 min. Rinse 3x with PBTw 查看更多>
Yeast IF with Methanol/Acetone DehydrationDavid AmbergNote this protocol is a modified version of the protocol from Mark Rose in the CSH Yeast Genetics Course 查看更多>
Sepharose 4B-CL Chromatography BAC DNA Purification for Transgenic ProductionThis method was contributed by Wes Dunnick at the University of Michigan Medical S 查看更多>
contributed by Patricia TsaoThis protocol will visualize both internalized receptors that were once on the plasma membrane and receptors in the biosynthetic pa 查看更多>
Purification of Gene Targeting Vector DNA for Electroporation1. Purify plasmid from bacteria.We recommend the Qiagen EndoFree Plasmid Maxi kit for the purifica 查看更多>
Steve HahnLast Modified December 1997This method works well when transforming with a plasmid and is rapid. (for highest efficiency transformation, see DMSO tra 查看更多>
一、非特异性染色的主要因素  组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点:  (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。  (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。  (3)除去检查的抗原 查看更多>
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮 查看更多>
Double dye filling (using DiO and di-4 ANEPPS)(Krista Williams) Dye Filling Label 15 ml centrifuge (c/f) tubes with strain name. Squirt ~1-2 ml M9 onto plate w 查看更多>
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做荧光定量PCR的TAKARA的SYBR荧光染料保存于-20摄氏度了,说明书上说要放于4摄氏度保存,放-20的话会影响SYBR荧光染料的效果。

现在已经保存于-20度了,而且经过了很多次的反复冻融,这样对实验结果的影响有多大?
想问一下各位大侠提质粒时用的是那个公司的试剂盒呀?我的扩增荧光增量一直不是很高,而且作为被动参比的ROX信号比FAM的基线部分高很多,不知是不是质粒的质量不好造成的。
所以想请大家给推荐一个效果好的最好是国产的质粒提取试剂盒。
多谢!
各位同盟,有谁在做甲基化的荧光定量PCR吗?小女子有诸多问题求救~~~~

甲基化的荧光定量pcr的标准品是不是用完全甲基化的DNA和完全非甲基化的DNA,具体应该怎么操作啊?

我打算用sybrgreen作为荧光染料

用相对荧光定量还是用绝对荧光定量呢.......恳请各位指教!
各位好!
附件中是我的标准曲线结果,标准品按照10x稀释,荧光染料是SYBR,可是在荧光强度与CT值的关系图中,曲线间的行距还可以接受,但是在LOG荧光值与CT值的关系曲线中,曲线怎么那么难看呢?为什么他们之间的行距不是相等的呢?我以前做的曲线很漂亮的,这是什么原因呢?影响定量的结果吗?并且在样品中也出现这么难看的曲线,就是指数增长期曲线不平滑,是什么原因呢?

切盼高手指点!!!

standardcurve.doc(49.0k)
一般情况,不管荧光染料还是其他染料,只要不是活性染料和还原染料,基本上都不存在失效问题。
你的荧光染料具体是哪一种?你可以通过染色试验来决定是否有效啊?一般荧光染料染色后,都会呈现明亮的颜色,比一般同样颜色要亮的多。只要能染上、只要有亮度,就是没失效。
我是一个新手。做了两次real-timePCR(SYBRGREENI)标准曲线都很差劲,请好心的大侠们帮忙指点迷津。

标准品是用质粒DNA做了。第一个图是按10倍梯度进行稀释,以10^3~10^9copy/μl7个浓度的标准模板系列作为标准品;第二个图是按10倍梯度进行稀释,以50~0.0005ng/ul6个浓度的标准模板系列作为标准品,得到的标准曲线的参数值分别是R^2=0.87998694<0.99,Slope=-1.403786(图一);R^2=0.9702126<0.99,slope=-1.5033078.

我应该从哪些方面来改进我的实验?紧急求助!
fcm常用的荧光染料有哪些
背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间,定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度,信号收集的温度为60°C。随后,SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值,提取结果并保存到校正文件中。软件在今后的分析中将自动调用此校正文件,从实验数据中扣除背景信号。
  什么是纯荧光校正,多长时间校正一次:
  纯荧光校正是测定各种纯荧光染料标准品的波长和信号强度,通俗地说是让仪器“认识”各种荧光染料。软件收集并储存各种纯荧光染料标准品的荧光信息。以后每次定量实验运行过程中,SDS软件收集样品的原始光谱信号,并将此原始光谱与纯荧光文件中的数据进行比较,精确扣除不同染料的信号重叠部分,从而确定样品中的荧光染料种类和信号强度。
  推荐每半年进行一次纯荧光校正。在运行光谱校正之前,请先进行背景校正和ROI校正。
因外用杀精避孕药机理研究的需要,求助目前较新的有关精子流式细胞检测的实验资料,请各位大侠不吝赐教!
快到年关,才准备要做实时定量,但因从没做过,万一设计有误,那损失不堪设想,恳请各位高手帮我看看有没有什么问题:
我要检测的是一个巢氏PCR的终产物,那我能否用首次PCR的产物纯化,稀释后来作标准品?好象一般都认为用质粒作更好,但我想质粒片段与我样品首次PCR产物的长度不同,扩增效率是不是也有差异?而且用质粒扩增前,是不是要先把质粒酶切成线性后,才能扩?(这个问题好象有点菜)
另外,如果用荧光染料,那是用预混型试剂好,还是各配各的好?因为据说镁离子浓度对实验影响较大,如果用预混型,不是就不能调离子浓度了吗?

先谢谢各位了。
理想情况下毫无疑问应该是PCR扩增的指数期。
1.无Ct值出现
  检测荧光信号的步骤有误:一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
  引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性。
  模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
  模板降解:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
  2.Ct值出现过晚(Ct>38)
  扩增效率低:反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;改用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。
  PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。
  PCR产物太长:一般采用80-150bp的产物长度。
  3.标准曲线线性关系不佳
  加样存在误差:使得标准品不呈梯度。
  标准品出现降解:应避免标准品反复冻融,或重新制备并稀释标准品。
  引物或探针不佳:重新设计更好的引物和探针。
  模板中存在抑制物,或模板浓度过高
  4.负对照有信号
  引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
  引物浓度不佳:重庆新桥医院网上预约挂号www.cqxqyy.net适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。
  镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度,或选择更合适的mix试剂盒
  模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。
  5.溶解曲线不止一个主峰
  引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
  引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。
  镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度,或选择更合适的mix试剂盒。
  模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。
  6.扩增效率低
  反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。
  反应条件不够优化:可适当降低退火温度或改为三步扩增法。
  反应体系中有PCR反应抑制物:一般是加入模板时所引入,应先把模板适度稀释,再加入反应体系中,减少抑制物的影响。
  7.同一试剂在不同仪器上产生不同的曲线,如何判断?
  判断标准:扩增效率,灵敏度,特异性
  如果扩增效率在90%-110%,都是特异性扩增,都可以把数据用于分析。
  8.扩增曲线的异常?比如“S”型曲线?
  参比染料设定不正确(MasterMix不加参比染料时,选NONE)
  模板的浓度太高或者降解
  荧光染料的降解
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