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Signalchem/MDM4 siRNA Set I/20 nmol/M47-911-20
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Signalchem/MDM4 siRNA Set I/20 nmol/M47-911-20
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Signalchem
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Overview:

MDM4 is a nuclear protein that contains a p53 binding domain at the N-terminus and a RING finger domain at the C-terminus. MDM4 shows structural similarity to p53-binding protein MDM2 and both proteins bind the p53 tumor suppressor protein and inhibit its activity. However, unlike MDM2, MDM4 does not cause nuclear export or degradation of p53. Instead, MDM4 inhibits p53 activity by binding to the transcriptional activation domain of p53. MDM4 is overexpressed in a variety of human cancers (1). Expression level of MDM4 is significantly higher in chronic lymphocytic leukemia. MDM4 is a specific chemotherapeutic target for treating retinoblastoma (2).

Gene Aliases:

DKFZp781B1423; HDMX; MDMX; MGC132766; MRP1

Genbank Number:

NM_002393

References:

1. Parant, J.et.al: Rescue of embryonic lethality in Mdm4-null mice by loss of Trp53 suggests a nonoverlapping pathway with MDM2 to regulate p53. Nature Genet. 29: 92-95, 2001. 2. Laurie, N. A. et.al: Inactivation of the p53 pathway in retinoblastoma. Nature 444: 61-66, 2006.

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2016-10-26
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将EntransterTM-invivo与AmbioninvivosiRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠,2天后,取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见上图,图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg,后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。

根据推荐用量注射EntransterTM-invivo和siRNA(作用于LaminA/C)和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织,分离RNA,用qRT-PCR分析LaminA/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果,图5为各器官分别局部注射结果。

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Argonaute (AGO):一类庞大的蛋白质家族,是组成RISCs复合物的主要成员。AGO蛋白质主要包含两个结构域:PAZ和PIWI两个结构域,但具体功能尚不清楚。的研究表明,PAZ结构
域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端;一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。PAZ和PIWI两个结构域,对于siRNA和目标mRNA相互作用,从而导致目标mRNA的切割或者翻译抑制过程,是必不可少的。同时,不同的AGO蛋白质有着不同的生物学功能。例如,在人当中,AGO2“筹划”了RISCs对于目标mRNA的切割过程;而AGO1 和AGO3则不具备这个功能。
Core RISC:是介导目标mRNA切割过程或者翻译抑制的最小的RNA-蛋白质复合物。在人和果蝇身上发现的分子量少于200kDa的RISCs可能就是core RISC的重要代表。AGO蛋白质和Core RISC密切相关。
Dicer (DCR):是RNAase Ⅲ家族中的一员,主要切割dsRNA或者茎环结构的RNA前体成为小RNAs分子。对应地,我们将这种小RNAs分子命名为siRNAs和miRNA。Dicer有着较多的结构域,最先在果蝇中发现,并且在不同的生物体上表现出很高的保守性。
Holo RISC:是在果蝇中发现的有着RISC活性的最大的RNA-蛋白质复合物(80S)。Holo RISC的生物学活性牵涉到几乎所有的RISC的成员,RLC成员,和一些其他通路上的蛋白质分子。Holo RISC的存在,表明了RISC组装不是孤立的,同时还是一个有序的过程。以RISC为中心的RNAi和miRNA通路与一些其他的通路密切联系,很可能借此调控生物体的生长发育过程。
Microprocessor:一种核内的复合物,主要由Drosha和Pasha两者组成,在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成为miRNA前体。
MicroRNA (miRNA):是含有茎环结构的miRNA前体,经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子(~21-23个核苷酸)。MiRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白质复合物)在动物和植物中广泛表达。因之具有破坏目标特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能,miRNA被认为在调控发育过程中有重要作用。
RISC loading complex (RLC):是一种促使RISC形成的复合物。RLC有方向性地调节小RNA双螺旋,为以后的RISC组装作好铺垫。siRISC loading complexes (siRLCs)在果蝇中研究最多。有研究者认为在果蝇中的siRLCs包含DCR2-R2D2异型二聚体和siRNA双螺旋;R2D2部分是非对称性的感受器,为RISC组装调整好siRNA的方向。miRISC loading complexes (miRLCs)的研究尚未报导,因为它的过程更为复杂,而且体外研究miRLCs的方法还没有建立。
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing (RITS):是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质,通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA-induced silencing complex (RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。研究表明,RISC当中的AGO蛋白质决定了RISC是切割型的还是不切割型的。
Slicer:在切割型RISC中的内切酶的另外一种表述方法。
Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。向左转|向右转
RNA干扰技术的特点123
中国之星01912018-01-14
RNA干扰(RNA interferenceRNAi)通抑制转录水平基表达诱导功能缺失表型力工具由dsRNA(double-stranded RNA)引发特定基表达受抑制现象称RNA干扰作用

dsRNA(double-stranded RNA)介导基沉默作用dsRNA基点研究基沉默机制热点dsRNA指于30碱基RNA哺乳物细胞至少2条路径竞争双链RNA(dsRNA)其特异性路径:特殊dsRNA序列用于RNAi起始阶段dsRNA切siRNA(small interfering RNA 或short interfering RNAs)siRNARNA干扰作用赖发重要间效应能提供定信息允许特定mRNA降解siRNA义链与反义链各21碱基其19碱基配再每条链3’端都2配碱基
另条非特异性路径:要dsRNA存降解所RNA抑制所蛋白质合dsRNA激蛋白激酶PKR激PKR通系列磷酸化关闭翻译起始导致翻译抑制通激2’-5’AS 合激RNase L导致非特异RNA降解
关于特异性RNA作用机制模型包括起始阶段效应阶段起始阶段dsRNADicer酶(RNaseIII家族特异识别双链RNA员属内切核酸酶)作用加工裂解21-23核甘酸干扰RNA片断(siRNA)Dicer含解旋酶性及dsRNA结合域PAZ结构
RNAi 效应阶段siRNA双链结构解旋并形性蛋白/RNA复合物(RNA-induced silencing complex or RISC)siRNA 解双链即RISC激程需ATP由RISCsiRNA反义链与mRNA互补区域结合随切割mRNA达RNA水平干扰基表达RISC由种蛋白组包括核酸酶解旋酶同源RNA链搜索性等
求大神解惑,RNA干扰回复实验是怎么做的?我的实验需要设计一个RNArescue组,不知道怎么操作。

找公司设计了重组慢病毒载体,共设计3条干扰序列,转染靶细胞测干扰效率。发现mRNA表达水平下降不明显,而蛋白水平明显下降。请问该如何解释,有相关文献吗?可以用抑制了靶蛋白翻译来解释吗?


RNA干扰不能称之为基因敲出,只出算是KNOCK-DOWN,使表达降低。基因敲出是KNOCKOUT,是把基因的一段序列在DNA层面上去掉。
RNAi(RNA干扰)技术:生物的遗传信息从脱氧核糖核酸(DNA)传到作为“信使”的核糖核酸(RNA),再传到蛋白质,特定的基因控制细胞制造特定的蛋白质。如果RNA被干扰,基因就会“沉默”,不起作用。科学家在这次实验中的做法是:设计一段微小的RNA分子,与需要干扰的基因的某个片段吻合。这些称为“小干扰RNA”的分子会打开细胞抵抗入侵病毒的一个天然防御系统,制造化学物质攻击这个基因释放出的信使RNA,使之无法正常传递遗传信息。
这种技术,以前曾被用来研究植物和蠕虫等,但直到现在才发现它对哺乳动物细胞也有效。
如果把这个思路用于医疗,使致病的基因“沉默”下来,不就可以治好许多疾病吗?而哈佛医学院的研究人员首次用RNA干扰使活体动物的致病基因“沉默”。美国哈佛医学院的科学家在最新一期英国《自然医学》杂志上报告说,他们已经成功地利用这种核糖核酸干扰技术治愈了实验鼠的肝炎。如果进一步证实这种技术在人体内有效,将为许多疾病和感染提供新疗法。
在研究中,科学家干扰的目标是“凋亡相关蛋白质(FAs)基因”。这种蛋白质存在于细胞表面,它能够启动细胞的自杀程序,据认为,许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了FAs基因所导致的。
研究人员给实验鼠尾部的血管注入旨在“沉默”FAs基因的小干扰RNA,发现有90%的肝细胞接收到了这种RNA分子,FAs蛋白质的产量变成原先的十分之一。随后,科学家给实验鼠注入大量FAs抗体,激活细胞自杀程序,模拟实验鼠患有严重肝炎的情形。
结果,未接受RNA干扰治疗的实验鼠有40%在3天内死亡。而40只接受过治疗的实验鼠有33只活了下来,10天后研究人员检查这些实验鼠的肝部,发现完全正常。
对于人来说,身体比老鼠大得多,血液循环系统也庞大。科学家目前正在寻找把小干扰RNA送到人体特定部位的方法,以便验证RNA干扰技术在人体中的效果。
在此,我只是抛砖引玉,向大家简单介绍一种新的技术,希望对其感兴趣的同仁多多发表,也希望版主给予支持。
新手上路,请大家多多关照,我是一名研究生,现在正在做RNA干扰方面的实验,可是却不知道RNA干扰的具体步骤,需要什么试剂,在网上查了半天也查不到,所以到这里来求助各位前辈,希望各位以前做过或者现在正在做这方面研究的前辈们能给指点一下迷津,在此谢谢了。
您好!(RNA干扰的原理附图有六张,但是这里只能粘贴插入一张图片,你把邮箱给我,我发给你全的原理图)短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNAinterference,RNAi)。siRNA(smallinterferingRNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA。首先外源导入的dsRNA被切割为19~23nt的小分子干扰RNA(siRNA)。Dicer作为特异性RNA酶家族的一个成员,切割dsRNA为19~23ntsiRNA,这是一个依赖ATP的耗能过程.切割后的siRNA具有3’两个核苷酸TT突出末端。然后siRNA结合到RNA酶复合物上形成RNA诱导的基因沉默复合体(RISC,RNA-inducedsilencingcomplex)。该复合体依赖ATP释能而解siRNA双链成单链以激活RISC。活化的RISC通过由siRNA决定的碱基互补配对原理切割具有同源序列的基因转录本,最终导致基因沉默效应。向左转|向右转
如题...如果可以遗传,遗传下去的物质是什么?谢谢
RNA干扰的机理及特点123
你大爷FqJi2021-07-26
RNAi抑制转座子活性
两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关
① 发现蠕虫mut-7 基因参与RNAi 并且与转座子的转座抑制有关;
② 在果蝇中, 参与RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失, 同时提高了反转录转座子活性。 RNAi抵御病毒感染
在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现, sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性 。 RNAi参与异染色质的形成和维持
Hall 等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi 组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople 等在敲除裂殖酵母( S. pombe) 的RNAi 途径基因( 如Argonaute 、Dicer 、RDRP) 时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi 途径的参与下, 加工成si RNA,si RNA 募集异染色质蛋白1( HP1) , 然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 RNAi参与机体的发育调控及生理代谢
RNAi 只抑制转录后的基因, 所以RNAi 在生物体发育学研究中具有优势。Chuang 等用RNAi 技术进一步证实了AG、CLV3 、AP1 、PAN 等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi 过程中形成的RISC 复合物可根据不同情况分别利用si RNA 或stRNA 行使不同的功能, 但最终均导致特定基因沉默。向左转|向右转
相关疾病:单纯疱疹病毒感染先天性卵巢发育不全综合征年龄相关性黄斑变性视网膜脱离青光眼白内障RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)介导的特异同源靶基因转录后沉默的过程,是生物进化过程中保留下来的基因表达调控......