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| Versatility | Isolation of RNA, DNA, and protein from the same sample |
|---|---|
| Capability | facilitates immediate and effective inhibition of RNase activity, while lysing cells and eliminating other cellular components |
| Application | RNA Isolation |
PureXtract RNAsol is a complete and ready -to-use
reagent for the isolation of total RNA or the
simultaneousisolation of RNA, DNA and proteins from
samples ofhuman, animal, plant, yeast , bacteria, and
viral origin.
PureXtract RNASol combines phenol and guanidine
thiocyanate in a mono-phase solution to facilitate
the imediate and most effective method of RNA
isolation.
It isolates a whole spectrum of RNA molecules rarely
observed in RNA isolated by other methods may
artificially change the mRNA composition.
The entire procedure cab be completed in 1 hr and
the recovery of undegraded mRNAs is 30-150% greater
than with other methods of RNA isolation. PureXtract
RNAsol isolates high quality RNA from diverse
biological material, including animal and plant tissues
rich in polysaccharides and proteoglycans.
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2021-07-28
书中对RNA 干扰的理论系统、技术体系及应用研究进行整体的构思，以该领域最新的研究成果为基础，除了双链RNA干扰之外，重点突出了对新发现的微小RNA(miR NA)进展的描述，从而全面系统地描述了RNA干扰；结合作者实验中的研究经验，系统地介绍了当今RNA干扰在多种生物体系中研究的实用技术方法。... 查看更多
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2021-09-11
RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默，主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内... 查看更多
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服务名称：RNA干扰 查看更多
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2017-01-23
RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂是由吉满生物科技（上海）有限公司代理或销售的Genomeditech品牌的试剂，产品来源于Genomeditech。吉满生物科技（上海）有限公司是中国最权威的RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂试剂销售服务商之一，在上海等地方销售RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂产品 查看更多
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2017-12-26
上海吉凯基因化学技术有限公司在发布的定制RNAi质粒载体产品供应信息，浏览与定制RNAi质粒载体产品相关的产品或在搜索更多与定制RNAi质粒载体产品相关的内容。 查看更多
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2017-03-31
威斯腾生物在发布的慢病毒与 RNAi（RNA干扰）(慢病毒包装纯化、过表达慢病毒、干扰慢病毒、miRNA病毒包装、腺病毒包装纯化、过表达腺病毒、干扰腺病毒、腺相关病毒包装、逆转录病毒包装 ) 威斯腾生物，让科研更简单！供应信息，浏览与慢病毒与 RNAi（RNA干扰）(慢病毒包装纯化、过表达慢病毒、干扰慢病毒、miRNA病毒包装、腺病毒包装纯化、过表达腺病毒、干扰腺病毒、腺相关病毒包装、逆转录病毒包装 ) 威斯腾生物，让科研更简单！相关的产品或在搜索更多与慢病毒与 RNAi（RNA干扰）(慢病毒包装 查看更多
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2021-07-18
★服务描述 以载体为基础的shRNA干扰，由于其易于转入细胞以及能够实现持续表达的特性，越来越受到RNA干扰研究者的青睐。RNA干扰的成功很大程度上取决于构建的shRNA质粒是否有效。因此，干扰靶点的选择和shRNA表达质粒的构建是RNA干扰实验最重要的一个环节。汉尹生物用丰富的经验为您提供优质的shRNA质粒构建服务。★服务内容 1：shRNA干扰靶点的设计； 2：shRNA质粒的构建；★服务说明 1：我们的RNA干扰服... 查看更多
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2018-02-05
南京恩晶生物科技有限公司在发布的INSR-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector供应信息，浏览与INSR-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector相关的产品或在搜索更多与INSR-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector相关的内容。 查看更多
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产品：RNAi 查看更多
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2017-06-27
亚诺法生技股份有限公司（Abnova）在发布的CANX Pre-design Chimera RNAi供应信息，浏览与CANX Pre-design Chimera RNAi相关的产品或在搜索更多与CANX Pre-design Chimera RNAi相关的内容。 查看更多
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RNA干扰技术原理及应用123
2018-01-20
请说出其要点。谢谢。急着要啊！周四要考试了啊！呵呵！
RNA干扰技术的特点123
中国之星01912018-01-14
RNA干扰（RNA interferenceRNAi）通抑制转录水平基表达诱导功能缺失表型力工具由dsRNA（double-stranded RNA）引发特定基表达受抑制现象称RNA干扰作用
dsRNA（double-stranded RNA）介导基沉默作用dsRNA基点研究基沉默机制热点dsRNA指于30碱基RNA哺乳物细胞至少2条路径竞争双链RNA(dsRNA)其特异性路径：特殊dsRNA序列用于RNAi起始阶段dsRNA切siRNA（small interfering RNA 或short interfering RNAs）siRNARNA干扰作用赖发重要间效应能提供定信息允许特定mRNA降解siRNA义链与反义链各21碱基其19碱基配再每条链3’端都2配碱基
另条非特异性路径：要dsRNA存降解所RNA抑制所蛋白质合dsRNA激蛋白激酶PKR激PKR通系列磷酸化关闭翻译起始导致翻译抑制通激2’－5’AS 合激RNase L导致非特异RNA降解
关于特异性RNA作用机制模型包括起始阶段效应阶段起始阶段dsRNADicer酶（RNaseIII家族特异识别双链RNA员属内切核酸酶）作用加工裂解21－23核甘酸干扰RNA片断（siRNA）Dicer含解旋酶性及dsRNA结合域PAZ结构
RNAi 效应阶段siRNA双链结构解旋并形性蛋白/RNA复合物（RNA－induced silencing complex or RISC）siRNA 解双链即RISC激程需ATP由RISCsiRNA反义链与mRNA互补区域结合随切割mRNA达RNA水平干扰基表达RISC由种蛋白组包括核酸酶解旋酶同源RNA链搜索性等
dsRNA（double-stranded RNA）介导基沉默作用dsRNA基点研究基沉默机制热点dsRNA指于30碱基RNA哺乳物细胞至少2条路径竞争双链RNA(dsRNA)其特异性路径：特殊dsRNA序列用于RNAi起始阶段dsRNA切siRNA（small interfering RNA 或short interfering RNAs）siRNARNA干扰作用赖发重要间效应能提供定信息允许特定mRNA降解siRNA义链与反义链各21碱基其19碱基配再每条链3’端都2配碱基
另条非特异性路径：要dsRNA存降解所RNA抑制所蛋白质合dsRNA激蛋白激酶PKR激PKR通系列磷酸化关闭翻译起始导致翻译抑制通激2’－5’AS 合激RNase L导致非特异RNA降解
关于特异性RNA作用机制模型包括起始阶段效应阶段起始阶段dsRNADicer酶（RNaseIII家族特异识别双链RNA员属内切核酸酶）作用加工裂解21－23核甘酸干扰RNA片断（siRNA）Dicer含解旋酶性及dsRNA结合域PAZ结构
RNAi 效应阶段siRNA双链结构解旋并形性蛋白/RNA复合物（RNA－induced silencing complex or RISC）siRNA 解双链即RISC激程需ATP由RISCsiRNA反义链与mRNA互补区域结合随切割mRNA达RNA水平干扰基表达RISC由种蛋白组包括核酸酶解旋酶同源RNA链搜索性等
RNA干扰与基因敲除 123
泽速浪02652021-07-21
基因敲除是指利用各种手段使某个基因不再表达，常见的方法是在基因的转录区插入一段外源DNA序列，从而破坏该基因的表达；RNA干扰是指一类小RNA可以与目的基因配对结合，从而使正常的基因表达受到干扰；基因沉默是指位于有些基因座的基因其表达不活跃甚至不表达的现象。
RNA干扰特点是什?RNA干扰特点是什么 123
七七系列18C2018-01-20
1.高效性：Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的，只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大，只有当浓度降低到0.05 nmol/L时，沉默的效果才消失。Holen等也证实1～100 nmol/L的双链RNA浓度对基因沉默的效果是一致的。这说明双链RNA介导的基因沉默效率是相当高的。需要ATP：Zamore等认为RNAi过程中至少有2个步骤需要能量的供给：一是长的双链RNA被 Dicer所酶切产生双链RNA；二是在双链RNA与RISC结合解链后形成有活性的RISC。
⒉特异性：Elbashir等和Brummel kamp等发现在21～23个碱基对中有1～2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。
⒊位置效应：Holen等根据人TF(tissue factor）不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中，hTF167i和hTF372i能够抑制85%～90%的基因活性，hTF562i只能抑制部分基因活性，而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA，有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基，但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性，相对而言，GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。
⒋竞争效应：Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比，两者的沉默基因效果无差异，但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后，hTF167i产生的抑制效果明显降低。
⒌可传播性：在线虫中，双链RNA可以从起始位置传播到远的地方，甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1，它可以将双链RNA转运出细胞，因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物，因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。向左转|向右转
⒉特异性：Elbashir等和Brummel kamp等发现在21～23个碱基对中有1～2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。
⒊位置效应：Holen等根据人TF(tissue factor）不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中，hTF167i和hTF372i能够抑制85%～90%的基因活性，hTF562i只能抑制部分基因活性，而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA，有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基，但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性，相对而言，GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。
⒋竞争效应：Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比，两者的沉默基因效果无差异，但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后，hTF167i产生的抑制效果明显降低。
⒌可传播性：在线虫中，双链RNA可以从起始位置传播到远的地方，甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1，它可以将双链RNA转运出细胞，因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物，因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。向左转|向右转
基因编辑和RNA干扰技术高效抑制HBV复制获新进展 预防医学讨论版 丁...123
wangyy19902021-08-01
近期，北京大学基础医学院鲁凤民教授课题组与许中伟、夏宁邵教授等合作，在《Theranostics》杂志上在线发表了题为“ThegRNA-miRNA-gRNAternarycassettecombiningCRISPR/Cas9withRNAiapproachstronglyinhibitshepatitisBvirusreplication”的研究论文。该研究通过模拟microRNA（miRNA）的生成过程，整合双gRNA导向的CRISPR/Cas9和RNA干扰技术，高效破坏乙型肝炎病毒（HBV）的复制模板-共价闭合环状DNA（ccCDNA），探索病毒清除新路径。北医王杰讲师、陈然和张瑞阳博士研究生为该论文的共同第一作者。
目前，我国仍有慢性HBV感染者约7800万人，慢乙肝患者约2800万人。HBV感染仍是我国病毒性肝炎、肝硬化及肝癌的重要致病因素。作为HBV复制模板的cccDNA，由于其半衰期相对较长，加上cccDNA池的不断补充，使得细胞核内的cccDNA持续存在、感染慢性化。目前，临床上治疗慢乙肝的常用药物为核苷（酸）类似物和长效干扰素，二者均不直接作用于cccDNA，难以有效清除病毒实现临床治愈。因此，研发直接靶向cccDNA的药物，寻找清除cccDNA的新方法和新策略，是当前慢乙肝治疗药物研发的热点。
该研究以miRNA-31为基本骨架，通过模拟其核心序列的二级结构设计HBV特异的miRNA（miR-HBV），miRNA两侧侧翼序列为特异性靶向cccDNA不同位点的引导RNA（gRNA）。如图所示，该gRNA-(miR-HBV)-gRNA三联体表达体系导入细胞后，在细胞核内转录形成gRNA-(miR-HBV)-gRNA长转录本，经内源的Drosha/DGCR8复合体剪切，形成2个gRNA和1个miR-HBV前体（pre-miR-HBV）。进入细胞质后，pre-miR-HBV进一步经Dicer酶剪切，形成成熟的miR-HBV。一方面双gRNA导向的CRISPR/Cas9系统通过切割并去除cccDNA的关键调控和编码序列直接破坏cccDNA，另一方面通过miR-HBV在转录后水平抑制HBV复制，进而抑制cccDNA池的补充，协同促进HBVcccDNA的清除。此外，本研究还发现，当pri-miRNA-31的侧翼序列长度为38bp时与双gRNA组成的三联体对HBV复制的抑制效率最高。
双gRNA导向的CRISPR/Cas9整合RNAi技术高效抑制HBV复制模式图
当然，该技术离临床应用尚有较远的距离。一方面如何高效和靶向性地将三联体递送到HBV感染的肝细胞内是需要攻克的一大障碍；另一方面，CRISPR/Cas9基因编辑技术的脱靶效应也有安全性之虞。然而，近年来随着Cas核酸酶的不断改造，其脱靶效应得到了有效控制，安全性大为提高。而且，随着金黄色葡萄球菌Cas9的发现，使得CRISPR/Cas9系统可以装入腺相关病毒载体中，致使该技术应用于临床的距离逐渐缩短。
总之，本研究通过gRNA-(miR-HBV)-gRNA三联表达框架联合CRISPR/Cas9和RNA干扰技术高效破坏cccDNA，促进HBV清除，为慢乙肝抗病毒治疗提供了新的思路。该项研究得到国家十二五重大科技专项计划“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”项目和国家自然科学基金的支持。
论文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28839466
【进展】RNA干扰在眼科的应用进展 眼科专业讨论版论坛123
apiao992021-07-27
相关疾病：单纯疱疹病毒感染先天性卵巢发育不全综合征年龄相关性黄斑变性视网膜脱离青光眼白内障RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)介导的特异同源靶基因转录后沉默的过程，是生物进化过程中保留下来的基因表达调控......
RNAiRNA 干扰技术的原理与应用(上)123
wangjinsheng2003-03-11
RNAi（RNA干扰）技术：生物的遗传信息从脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）传到作为“信使”的核糖核酸（ＲＮＡ），再传到蛋白质，特定的基因控制细胞制造特定的蛋白质。如果ＲＮＡ被干扰，基因就会“沉默”，不起作用。科学家在这次实验中的做法是：设计一段微小的ＲＮＡ分子，与需要干扰的基因的某个片段吻合。这些称为“小干扰ＲＮＡ”的分子会打开细胞抵抗入侵病毒的一个天然防御系统，制造化学物质攻击这个基因释放出的信使ＲＮＡ，使之无法正常传递遗传信息。
这种技术，以前曾被用来研究植物和蠕虫等，但直到现在才发现它对哺乳动物细胞也有效。
如果把这个思路用于医疗，使致病的基因“沉默”下来，不就可以治好许多疾病吗？而哈佛医学院的研究人员首次用ＲＮＡ干扰使活体动物的致病基因“沉默”。美国哈佛医学院的科学家在最新一期英国《自然医学》杂志上报告说，他们已经成功地利用这种核糖核酸干扰技术治愈了实验鼠的肝炎。如果进一步证实这种技术在人体内有效，将为许多疾病和感染提供新疗法。
在研究中，科学家干扰的目标是“凋亡相关蛋白质（ＦＡｓ）基因”。这种蛋白质存在于细胞表面，它能够启动细胞的自杀程序，据认为，许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了ＦＡｓ基因所导致的。
研究人员给实验鼠尾部的血管注入旨在“沉默”ＦＡｓ基因的小干扰ＲＮＡ，发现有９０％的肝细胞接收到了这种ＲＮＡ分子，ＦＡｓ蛋白质的产量变成原先的十分之一。随后，科学家给实验鼠注入大量ＦＡｓ抗体，激活细胞自杀程序，模拟实验鼠患有严重肝炎的情形。
结果，未接受ＲＮＡ干扰治疗的实验鼠有４０％在３天内死亡。而４０只接受过治疗的实验鼠有３３只活了下来，１０天后研究人员检查这些实验鼠的肝部，发现完全正常。
对于人来说，身体比老鼠大得多，血液循环系统也庞大。科学家目前正在寻找把小干扰ＲＮＡ送到人体特定部位的方法，以便验证ＲＮＡ干扰技术在人体中的效果。
在此，我只是抛砖引玉，向大家简单介绍一种新的技术，希望对其感兴趣的同仁多多发表，也希望版主给予支持。
这种技术，以前曾被用来研究植物和蠕虫等，但直到现在才发现它对哺乳动物细胞也有效。
如果把这个思路用于医疗，使致病的基因“沉默”下来，不就可以治好许多疾病吗？而哈佛医学院的研究人员首次用ＲＮＡ干扰使活体动物的致病基因“沉默”。美国哈佛医学院的科学家在最新一期英国《自然医学》杂志上报告说，他们已经成功地利用这种核糖核酸干扰技术治愈了实验鼠的肝炎。如果进一步证实这种技术在人体内有效，将为许多疾病和感染提供新疗法。
在研究中，科学家干扰的目标是“凋亡相关蛋白质（ＦＡｓ）基因”。这种蛋白质存在于细胞表面，它能够启动细胞的自杀程序，据认为，许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了ＦＡｓ基因所导致的。
研究人员给实验鼠尾部的血管注入旨在“沉默”ＦＡｓ基因的小干扰ＲＮＡ，发现有９０％的肝细胞接收到了这种ＲＮＡ分子，ＦＡｓ蛋白质的产量变成原先的十分之一。随后，科学家给实验鼠注入大量ＦＡｓ抗体，激活细胞自杀程序，模拟实验鼠患有严重肝炎的情形。
结果，未接受ＲＮＡ干扰治疗的实验鼠有４０％在３天内死亡。而４０只接受过治疗的实验鼠有３３只活了下来，１０天后研究人员检查这些实验鼠的肝部，发现完全正常。
对于人来说，身体比老鼠大得多，血液循环系统也庞大。科学家目前正在寻找把小干扰ＲＮＡ送到人体特定部位的方法，以便验证ＲＮＡ干扰技术在人体中的效果。
在此，我只是抛砖引玉，向大家简单介绍一种新的技术，希望对其感兴趣的同仁多多发表，也希望版主给予支持。
RNA干扰的详细实验步骤 实验方法 123
玩世3102018-01-20
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。 Off-target effects（脱靶效应）最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出（Fedorov,Y.,et al. Off-targeting By siRNA Can Induce Toxic Phenotype. RNA Accepted (2006).）他们给细胞转染特定基因的单条siRNA后运用全基因组芯片检测技术鉴定表达上调/下调1.5到3倍的靶基因数量。研究人员发现在这种情况下有大量的基因被非特异性的调控着。siRNA正义链和反义链与脱靶基因的互补水平有高有低，并且每条siRNA所引发的脱靶基因表达谱也不尽相同，反映了序列依靠性的脱靶效应。
简单来说，Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径，其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
简单来说，Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径，其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
酶标仪法测蛋白浓度123
狼恋莫_1x22018-01-14
RNA干扰的分子抑制机制的三种方式及原理
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
RNA干扰的相关知识有哪些? 懂得123
晨曦Hoo¨005462018-01-20
Argonaute (AGO）：一类庞大的蛋白质家族，是组成RISCs复合物的主要成员。AGO蛋白质主要包含两个结构域：PAZ和PIWI两个结构域，但具体功能尚不清楚。的研究表明，PAZ结构
域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端；一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。PAZ和PIWI两个结构域，对于siRNA和目标mRNA相互作用，从而导致目标mRNA的切割或者翻译抑制过程，是必不可少的。同时，不同的AGO蛋白质有着不同的生物学功能。例如，在人当中，AGO2“筹划”了RISCs对于目标mRNA的切割过程；而AGO1 和AGO3则不具备这个功能。
Core RISC：是介导目标mRNA切割过程或者翻译抑制的最小的RNA-蛋白质复合物。在人和果蝇身上发现的分子量少于200kDa的RISCs可能就是core RISC的重要代表。AGO蛋白质和Core RISC密切相关。
Dicer (DCR）：是RNAase Ⅲ家族中的一员，主要切割dsRNA或者茎环结构的RNA前体成为小RNAs分子。对应地，我们将这种小RNAs分子命名为siRNAs和miRNA。Dicer有着较多的结构域，最先在果蝇中发现，并且在不同的生物体上表现出很高的保守性。
Holo RISC：是在果蝇中发现的有着RISC活性的最大的RNA-蛋白质复合物（80S）。Holo RISC的生物学活性牵涉到几乎所有的RISC的成员，RLC成员，和一些其他通路上的蛋白质分子。Holo RISC的存在，表明了RISC组装不是孤立的，同时还是一个有序的过程。以RISC为中心的RNAi和miRNA通路与一些其他的通路密切联系，很可能借此调控生物体的生长发育过程。
Microprocessor：一种核内的复合物，主要由Drosha和Pasha两者组成，在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成为miRNA前体。
MicroRNA (miRNA）：是含有茎环结构的miRNA前体，经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子（~21-23个核苷酸）。MiRNA，以及miRISCs（RNA-蛋白质复合物）在动物和植物中广泛表达。因之具有破坏目标特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能，miRNA被认为在调控发育过程中有重要作用。
RISC loading complex (RLC）：是一种促使RISC形成的复合物。RLC有方向性地调节小RNA双螺旋，为以后的RISC组装作好铺垫。siRISC loading complexes （siRLCs）在果蝇中研究最多。有研究者认为在果蝇中的siRLCs包含DCR2-R2D2异型二聚体和siRNA双螺旋；R2D2部分是非对称性的感受器，为RISC组装调整好siRNA的方向。miRISC loading complexes （miRLCs）的研究尚未报导，因为它的过程更为复杂，而且体外研究miRLCs的方法还没有建立。
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing (RITS）：是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质，通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA-induced silencing complex (RISC）：一种RNA-蛋白质复合物，通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC，miRNA组装miRISC。RISCs（无论siRISC还是miRISC）包括两种类型：切割型和不切割型。研究表明，RISC当中的AGO蛋白质决定了RISC是切割型的还是不切割型的。
Slicer：在切割型RISC中的内切酶的另外一种表述方法。
Small interfering RNA (siRNA）：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。向左转|向右转
域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端；一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。PAZ和PIWI两个结构域，对于siRNA和目标mRNA相互作用，从而导致目标mRNA的切割或者翻译抑制过程，是必不可少的。同时，不同的AGO蛋白质有着不同的生物学功能。例如，在人当中，AGO2“筹划”了RISCs对于目标mRNA的切割过程；而AGO1 和AGO3则不具备这个功能。
Core RISC：是介导目标mRNA切割过程或者翻译抑制的最小的RNA-蛋白质复合物。在人和果蝇身上发现的分子量少于200kDa的RISCs可能就是core RISC的重要代表。AGO蛋白质和Core RISC密切相关。
Dicer (DCR）：是RNAase Ⅲ家族中的一员，主要切割dsRNA或者茎环结构的RNA前体成为小RNAs分子。对应地，我们将这种小RNAs分子命名为siRNAs和miRNA。Dicer有着较多的结构域，最先在果蝇中发现，并且在不同的生物体上表现出很高的保守性。
Holo RISC：是在果蝇中发现的有着RISC活性的最大的RNA-蛋白质复合物（80S）。Holo RISC的生物学活性牵涉到几乎所有的RISC的成员，RLC成员，和一些其他通路上的蛋白质分子。Holo RISC的存在，表明了RISC组装不是孤立的，同时还是一个有序的过程。以RISC为中心的RNAi和miRNA通路与一些其他的通路密切联系，很可能借此调控生物体的生长发育过程。
Microprocessor：一种核内的复合物，主要由Drosha和Pasha两者组成，在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成为miRNA前体。
MicroRNA (miRNA）：是含有茎环结构的miRNA前体，经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子（~21-23个核苷酸）。MiRNA，以及miRISCs（RNA-蛋白质复合物）在动物和植物中广泛表达。因之具有破坏目标特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能，miRNA被认为在调控发育过程中有重要作用。
RISC loading complex (RLC）：是一种促使RISC形成的复合物。RLC有方向性地调节小RNA双螺旋，为以后的RISC组装作好铺垫。siRISC loading complexes （siRLCs）在果蝇中研究最多。有研究者认为在果蝇中的siRLCs包含DCR2-R2D2异型二聚体和siRNA双螺旋；R2D2部分是非对称性的感受器，为RISC组装调整好siRNA的方向。miRISC loading complexes （miRLCs）的研究尚未报导，因为它的过程更为复杂，而且体外研究miRLCs的方法还没有建立。
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing (RITS）：是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质，通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA-induced silencing complex (RISC）：一种RNA-蛋白质复合物，通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC，miRNA组装miRISC。RISCs（无论siRISC还是miRISC）包括两种类型：切割型和不切割型。研究表明，RISC当中的AGO蛋白质决定了RISC是切割型的还是不切割型的。
Slicer：在切割型RISC中的内切酶的另外一种表述方法。
Small interfering RNA (siRNA）：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。向左转|向右转
动物体内RNA转染,RNA干扰,基因沉默实验的创举 123
ding2000yj2021-07-30
将EntransterTM-invivo与AmbioninvivosiRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠，2天后，取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见上图，图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg，后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。
根据推荐用量注射EntransterTM-invivo和siRNA（作用于LaminA/C）和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织，分离RNA，用qRT-PCR分析LaminA/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果，图5为各器官分别局部注射结果。
英格恩生物体内转染试剂，3天可完成动物体内转染实验，让动物干扰，基因敲除实验变得简单、快速有效！
RNA干扰原理图解 实验方法 123
xiaoxia61952018-01-20
您好！（RNA干扰的原理附图有六张，但是这里只能粘贴插入一张图片，你把邮箱给我，我发给你全的原理图）短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNAinterference，RNAi）。siRNA（smallinterferingRNAs）就是这种短片断双链RNA分子，能够以序列同源互补的mRNA为靶目标，降解特定的mRNA。首先外源导入的dsRNA被切割为19~23nt的小分子干扰RNA（siRNA）。Dicer作为特异性RNA酶家族的一个成员，切割dsRNA为19~23ntsiRNA，这是一个依赖ATP的耗能过程.切割后的siRNA具有3’两个核苷酸TT突出末端。然后siRNA结合到RNA酶复合物上形成RNA诱导的基因沉默复合体（RISC，RNA-inducedsilencingcomplex）。该复合体依赖ATP释能而解siRNA双链成单链以激活RISC。活化的RISC通过由siRNA决定的碱基互补配对原理切割具有同源序列的基因转录本，最终导致基因沉默效应。向左转|向右转
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