Human CD18 (beta integrin) forms a heterodimer with either alpha L, alpha M, or alpha X integrins (CD11a, b or c). CD11/CD18 heterodimeric molecules are involved with cell/cell and cell/extracellular adhesion in immune and inflammatory responses.
Isotype: Murine IgG2a
Immunogen: Human peripheral blood monocytes
Specificity: Antibody IB4 recognizes the beta 2 integrin subunit (CD18) adhesion molecule of about 95 kd (1, 6).
Functional Application: Antibody IB4 blocks binding of ICAM-1 and ICAM-3 to LFA-1 (2, 5).
References:
1. S.D. Wright, et al, (1983) Proc Natl Acad Sci USA 80: 5699-5703.
2. R.C. Landis, et al, (1994) J Cell Biol 126: 529-537.
3. M. Kaneko, et al, (1995) J Immunol 155: 2631-2641.
4. A. Mazzone & G. Ricevuti, (1995) Haematologica 80: 161-175.
5. M.E. Berman, et al, (1996) J Immunol 156: 1515-1524.
6. K Welzenbach, G Weitz-Scmidt, et al (2002) J Biol Chem 277(12): 10590 - 10598. PMID: 11781316
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简单来说，Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径，其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
本是小菜鸟，目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响，需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况，但是无论如何夜找不到抑制剂，做RNA干扰的话经费就超出预算了！急求各位大神，帮忙出个解决方案吧！非常感谢！
近期，北京大学基础医学院鲁凤民教授课题组与许中伟、夏宁邵教授等合作，在《Theranostics》杂志上在线发表了题为“ThegRNA-miRNA-gRNAternarycassettecombiningCRISPR/Cas9withRNAiapproachstronglyinhibitshepatitisBvirusreplication”的研究论文。该研究通过模拟microRNA（miRNA）的生成过程，整合双gRNA导向的CRISPR/Cas9和RNA干扰技术，高效破坏乙型肝炎病毒（HBV）的复制模板-共价闭合环状DNA（ccCDNA），探索病毒清除新路径。北医王杰讲师、陈然和张瑞阳博士研究生为该论文的共同第一作者。
目前，我国仍有慢性HBV感染者约7800万人，慢乙肝患者约2800万人。HBV感染仍是我国病毒性肝炎、肝硬化及肝癌的重要致病因素。作为HBV复制模板的cccDNA，由于其半衰期相对较长，加上cccDNA池的不断补充，使得细胞核内的cccDNA持续存在、感染慢性化。目前，临床上治疗慢乙肝的常用药物为核苷（酸）类似物和长效干扰素，二者均不直接作用于cccDNA，难以有效清除病毒实现临床治愈。因此，研发直接靶向cccDNA的药物，寻找清除cccDNA的新方法和新策略，是当前慢乙肝治疗药物研发的热点。
该研究以miRNA-31为基本骨架，通过模拟其核心序列的二级结构设计HBV特异的miRNA（miR-HBV），miRNA两侧侧翼序列为特异性靶向cccDNA不同位点的引导RNA（gRNA）。如图所示，该gRNA-(miR-HBV)-gRNA三联体表达体系导入细胞后，在细胞核内转录形成gRNA-(miR-HBV)-gRNA长转录本，经内源的Drosha/DGCR8复合体剪切，形成2个gRNA和1个miR-HBV前体（pre-miR-HBV）。进入细胞质后，pre-miR-HBV进一步经Dicer酶剪切，形成成熟的miR-HBV。一方面双gRNA导向的CRISPR/Cas9系统通过切割并去除cccDNA的关键调控和编码序列直接破坏cccDNA，另一方面通过miR-HBV在转录后水平抑制HBV复制，进而抑制cccDNA池的补充，协同促进HBVcccDNA的清除。此外，本研究还发现，当pri-miRNA-31的侧翼序列长度为38bp时与双gRNA组成的三联体对HBV复制的抑制效率最高。
双gRNA导向的CRISPR/Cas9整合RNAi技术高效抑制HBV复制模式图
当然，该技术离临床应用尚有较远的距离。一方面如何高效和靶向性地将三联体递送到HBV感染的肝细胞内是需要攻克的一大障碍；另一方面，CRISPR/Cas9基因编辑技术的脱靶效应也有安全性之虞。然而，近年来随着Cas核酸酶的不断改造，其脱靶效应得到了有效控制，安全性大为提高。而且，随着金黄色葡萄球菌Cas9的发现，使得CRISPR/Cas9系统可以装入腺相关病毒载体中，致使该技术应用于临床的距离逐渐缩短。
总之，本研究通过gRNA-(miR-HBV)-gRNA三联表达框架联合CRISPR/Cas9和RNA干扰技术高效破坏cccDNA，促进HBV清除，为慢乙肝抗病毒治疗提供了新的思路。该项研究得到国家十二五重大科技专项计划“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”项目和国家自然科学基金的支持。
论文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28839466
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
这种技术，以前曾被用来研究植物和蠕虫等，但直到现在才发现它对哺乳动物细胞也有效。
如果把这个思路用于医疗，使致病的基因“沉默”下来，不就可以治好许多疾病吗？而哈佛医学院的研究人员首次用ＲＮＡ干扰使活体动物的致病基因“沉默”。美国哈佛医学院的科学家在最新一期英国《自然医学》杂志上报告说，他们已经成功地利用这种核糖核酸干扰技术治愈了实验鼠的肝炎。如果进一步证实这种技术在人体内有效，将为许多疾病和感染提供新疗法。
在研究中，科学家干扰的目标是“凋亡相关蛋白质（ＦＡｓ）基因”。这种蛋白质存在于细胞表面，它能够启动细胞的自杀程序，据认为，许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了ＦＡｓ基因所导致的。
研究人员给实验鼠尾部的血管注入旨在“沉默”ＦＡｓ基因的小干扰ＲＮＡ，发现有９０％的肝细胞接收到了这种ＲＮＡ分子，ＦＡｓ蛋白质的产量变成原先的十分之一。随后，科学家给实验鼠注入大量ＦＡｓ抗体，激活细胞自杀程序，模拟实验鼠患有严重肝炎的情形。
结果，未接受ＲＮＡ干扰治疗的实验鼠有４０％在３天内死亡。而４０只接受过治疗的实验鼠有３３只活了下来，１０天后研究人员检查这些实验鼠的肝部，发现完全正常。
对于人来说，身体比老鼠大得多，血液循环系统也庞大。科学家目前正在寻找把小干扰ＲＮＡ送到人体特定部位的方法，以便验证ＲＮＡ干扰技术在人体中的效果。
在此，我只是抛砖引玉，向大家简单介绍一种新的技术，希望对其感兴趣的同仁多多发表，也希望版主给予支持。
两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关
① 发现蠕虫mut-7 基因参与RNAi 并且与转座子的转座抑制有关;
② 在果蝇中, 参与RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失, 同时提高了反转录转座子活性。 RNAi抵御病毒感染
在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现, sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性 。 RNAi参与异染色质的形成和维持
Hall 等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi 组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核；Vople 等在敲除裂殖酵母( S. pombe) 的RNAi 途径基因( 如Argonaute 、Dicer 、RDRP) 时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi 途径的参与下, 加工成si RNA,si RNA 募集异染色质蛋白1( HP1) , 然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 RNAi参与机体的发育调控及生理代谢
RNAi 只抑制转录后的基因, 所以RNAi 在生物体发育学研究中具有优势。Chuang 等用RNAi 技术进一步证实了AG、CLV3 、AP1 、PAN 等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi 过程中形成的RISC 复合物可根据不同情况分别利用si RNA 或stRNA 行使不同的功能, 但最终均导致特定基因沉默。向左转|向右转
