- Overview
- Data/Specifications
- Literature/Support
- How To Use
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Overview
Isotype controls are most commonly used in flow cytometry and immunohistochemistry experiments as negative controls that measure the level of non-specific background signal caused by primary antibodies. Background signal is due to Igs binding to non-specifcally to Fc receptors present on a cell surface (ex. mice antibodies binding to human leukocytes non-specifically in which investigators would want to use a mouse isotype control when working with human cells or tissues).
Data/Specifications
Ig Isotype: Mouse IgG1k
Specifcity:T-2 mycotoxin
Form:The biotin conjugate is supplied as 0.5 mg in 1.0 mL of PBS/NaN3.
Storage:Store at 2 – 8 °C
Literature/Support
PDF Insert
How To Use
Applications:
- Used for Flow cytometry: working dilution of ≤1 ug/106 cells
Note: Since applications vary, each investigator should determine the optimum working dilutions of the product that is appropriate for their specific needs
Related Products
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上次课程有句话让楼主印象深刻，Exosomesaresecretedbyallmammaliancelltypesinculture.
那如何去选择我们的实验样本？取样的时候需注意些什么？外泌体又如何保存呢？
上周四刚好赶上中秋，GCBI公众号也放了个小假，小编回来后赶忙补上上周高老师讲的外泌体样本收集与保存的课程，视频详情请戳：
外泌体的分离方法介绍
你研究的是哪种样本，需要特别注意哪些方面呢？一起来看看高老师的建议吧。
1细胞培养上清
2血液
受限于样本，血样一般取2ml。
那血浆or血清？
血浆=血液-血细胞
血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子
血清是血液凝固之后收集的液体，所以其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。
在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。
背后有啥解释呢？高老师在视频中有一一解答。
除了常见的细胞培养上清，血样，其他诸如唾液、鼻涕、尿液、乳汁及脑脊液如何收集呢？详情请戳视频。
课堂问答
1、微粒体和外泌体有什么区别？
微粒体是细胞破碎后，内膜系统的残体自发融合形成的小囊泡。外泌体是细胞分泌到胞外的直径为40-100nm的小囊泡，起源于内吞作用形成的内体。这两种小囊泡的起源和形成过程都不一样。
2、之前提取的外泌体忘记用PBS再洗一次，-80冻后1个月后再用PBS洗可以吗？
可以
3、采血后立即分离有没有文献支持？
有
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有没有前辈从事外泌体的研究，想从细胞上清中提取外泌体，但是因为实验室条件的因素，无法超离血清，想请教一下培养细胞的话还有没有什么别的方法？万分感激！！！！！！！！！！！！！！！！
癌细胞通过血液由起源部位传播扩散到远处器官是癌症相关死亡的主要原因。这个过程并不随机；相反，一些种类的癌症细胞会通过一系列分子程序，优先寻找特定器官，并在该处筑巢。这种寻找目的地的行为涉及到逃避原发肿瘤的癌细胞（有时也被称为“种子”）和目的器官处的微环境（或叫“土壤”）的互动。而Hoshino等人的研究发现，种子在到达之前，能通过名为外泌体的胞外囊泡来影响“土壤”，从而为肿瘤转移做好准备。
越来越多证据显示，原发肿瘤转移之前会有一系列的系统性反应，这些反应甚至促使了癌症的转移。这些反应可能包括：机体血管的复杂变化、凝血和炎症——例如，癌症相关的变化包括细胞种类、可溶性蛋白和血液中外泌体的变化。
Hoshino等人把外泌体定义为小小的，把蛋白质、脂质和核酸由一个细胞运输到另一个细胞的，可以随着血液传播到远端的胞外囊泡。外泌体在癌症研究领域引起了很多人的关注——因为一些细胞外囊泡携带致癌基因，促进癌症的形成和疾病进展。
外囊泡，包括外泌体，在转移微环境形成及为转移做准备过程的几个关键事件中起了重要作用，研究者们对此也研究了好几年。例如，黑色素瘤的小鼠模型中，外泌体和毛细管壁之间的互动引起血管通透性变化，使肿瘤细胞能从血管中逃逸，进入一个新位点。此外，外泌体能把致癌基因MET受体蛋白转移到循环的骨髓细胞中，从而改变其行为，为癌症转移做准备。胰腺癌模型中，血液中的外泌体把转移抑制因子蛋白转移到肝脏的库普弗免疫细胞（Kupffercell）上，引发一连串事件，促进转移微环境的形成。
虽然这些结果表明外泌体促进肿瘤转移，但外泌体是否和如何参与肿瘤的器官特异性转移方面的研究非常匮乏。为研究这一问题，Hoshino等人提出问题：优先转移至肺、肝、脑或骨的癌症细胞是否可能会在转移之前通过外泌体与这些器官进行互动。实验结果正是如此。把癌细胞的外泌体注射到小鼠体内，这些外泌体会滞留在癌细胞倾向于转移的器官中。此外，这些器官特异性的外泌体能与不同的细胞类型互动。例如，靶向肺的外泌体会粘附在肺内的内皮细胞上，而靶向肝脏的外泌体则会进入库普弗免疫细胞。
Hoshino等人把癌细胞的外泌体注入相同的细胞系中，证明了外泌体促进肿瘤的器官特异性转移。然后他们发现了一个有趣的现象——转移到肺部的乳腺癌细胞的外泌体能把另一类通常会转移到骨头的肿瘤细胞重定向到肺部。这一发现进一步证实肿瘤细胞的转移特征并不是自主的，而是由外部因素影响的。
Hoshino等人针对外泌体如何影响器官特异性转移提供了几点线索。他们发现，针对不同器官的外泌体拥有不同的细胞粘附受体蛋白，即细胞表面的整合素（integrin）。不同类型的外泌体会倾向性地进入拥有大量与其表面整合素对应的配体的器官中。例如，αVβ5整合素把外泌体定向到肝脏，而α6β4则定向到肺（图1）。此外，抑制胞外体的表达或整合素的表达，能抑制癌症转移。最后，Hoshino外泌体侵入目的器官时，会引起S100蛋白的合成，从而促进炎症和细胞迁移，并激活Src蛋白——这些都为癌症细胞的转移奠定基础。
这些重要发现扩大我们对肿瘤器官特异性转移的认识。然而，如何把这一认识转化为临床手段还需要更充分的研究。Hoshino等人证实了整合素的表达可以预测转移，指出外泌体整合素用于癌症诊断的潜能。他们的数据还表明，整合素抑制剂可能会减少特定器官癌症的转移。但在许多情况下，晚期癌症会扩散到多个器官，限制了器官特异性转移疗法的应用前景。
需要注意的是，肿瘤转移的分子通路（无论是外泌体依赖和独立的）可能非常多。因此，它们可能受很多相关因素影响：肿瘤细胞中的不同通路的激活、肿瘤中的一个特定分子亚型的出现，以及干预治疗等。例如，乳腺癌分子亚型之间的脑转移发生率不同，致癌蛋白ERBB2型乳腺癌，即使在ERBB2抑制剂有效治疗后，仍更倾向于转移到脑。科学家们不清楚的是，ERBB2抑制剂治疗是否会影响，以及如何影响器官倾向性的外泌体的释放。他们对这一课题的研究怀有极大兴趣。同样，炎症、凝血功能异常和其它癌症相关的生理变化可能会与外泌体的器官定向机制有关，因此在分析转移路径时，必须充分考虑这些因素。因此，不同类型的癌症中外泌体定向特定器官和影响“土壤”的机制还需要更充分的研究。（生物谷：Bioon.com）
外泌体参与细胞间通讯，目前对外泌体的研究兴趣日益增长，小编整理一些外泌体相关的数据库，供研究者学习使用。
ExosomeDatabase
www.ExosomeData.com
EVpedia--Databaseofexosomalproteome,transcriptome,andlipidome
http://www.evpedia.info/
Apublicdatabaseforextracellularvesiclesresearch.
EVpediaisanintegratedandcomprehensiveproteome,transcriptome,andlipidomedatabaseofEVsderivedfromarchaea,bacteria,andeukarya,includinghuman.
EVpediaprovidesanarrayoftools,suchassearchandbrowsetoolsforvesicularproteins,comparisonofvesiculardatasetsbyorthologidentification,GeneOntologyenrichmentanalysesandnetworkanalysesofvesicularproteins.FurThermore,EVpediaprovidesdatabasesofvesicularmRNAs,miRNAs,andlipids.Thus,EVpediamightserveasausefulcommunityresourcetotriggertheadvancementofsystematicandcomprehensivestudiesofEVsandtounveilthefundamentalrolesofEVs.
ExoCarta--Databaseofexosomalproteins,RNAandlipids.
www.exocarta.org/
ExoCarta:databaseofexosomalproteins,RNAandlipids.
ExoCarta,anexosomedatabase,provideswiththecontentsthatwereidentifiedinexosomesinmultipleorganisms.
Vesiclepedia--Databaseofexosomalproteins,RNAandlipids
http://www.microvesicles.org/
Acommunitycompendiumforextracellularvesicles
Vesiclepedia,amanuallycuratedcompendiumofmoleculardata(lipid,RNAandprotein)identifiedindifferentclassesofEVs.Currently,Vesiclepediacomprises35,264protein,18,718mRNA,1,772miRNAand342lipidentriesencompassedfrom341independentstudiesthatwerepublishedoverthepastseveralyears.
ExosomeGeneOntologyAnnotationInitiative
http://www.ebi.ac.uk/GOA/exosome
Thisinitiative,undertakenbytheUniProtcuratorsattheEBI,involvesthemanualassignmentofGOannotationstohumanexosomalproteinsbycuratorsreADIngthescientificliteratureandassigningtotheproteinsGOtermsthatdescribetheirBIOLOGicalroles.CuratorsworkingonthisprojectarerequestingnewGOtermsspecifictoexosomeproteinbiologytofullycaptureliteraturefindings.
exoRBase--DatabaseofexosomalcircRNA、LncRNAandmRNA
http://www.exorbase.org/
exoRBaseisarepositoryofcircularRNA(circRNA),longnon-codingRNA(lncRNA)andmessengerRNA(mRNA)derivedfromRNA-seqdataanalysesofhumanbloodexosomes.Experimentalvalidationsfrompublishedliteraturearealsoincluded.
exoRBasefeaturestheintegrationandvisualizationofRNAexpressionprofilesbasedonnormalizedRNA-seqdataspanningbothnormalindividualsandpatientswithdifferentdiseases.
UrinaryExosomeProteinDatabase
https://hpcwebapps.cit.nih.gov/ESBL/Database/Exosome/
ThisdatabaseofurinaryexosomeproteinsisbasedonpublishedproteinmassspectrometrydatafromtheNHLBIEpithelialSystemsBiologyLaboratory(ESBL).Alldataarefromurinaryexosomesisolatedfromhealthyhumanvolunteers.
Thiscurrentdatabasecontainsproteinidentificationofhumanurinaryexosomesusingtwodifferentmassspectrometeranalyzers.
exRNAAtlas--DatabaseofexosomalRNA
http://exrna-atlas.org/
TheexRNAAtlasisthedatarepositoryoftheExtracellularRNACommunicationConsortium(ERCC),whichincludessmallRNAsequencingandRT-qPCR-derivedexRNAprofilesfromhumanandmousebiofluids.AllRNA-seqdatasetsareprocessedusingversion4oftheexceRptsmallRNA-seqpipelineandERCC-developedqualitymetricsareuniformlyappliedtothesedatasets.
editedbyAlexfromUmibio(Shanghai)Co.Ltd
外泌体提取试剂盒试用装，免费申请请邮件至umibio@umibio.cn
exosome，外泌体，是由细胞分泌到外周体液进行细胞间以及细胞与远程组织、器官之间进行信息交流的一种媒介。当前逐渐成为国际研究热点。目前国内刚刚起步，虽然研究成果较国外研究机构尚有不少差距，但已有迎头赶上之势。
外泌体只是胞外囊泡的一种，目前尚未有明确定论胞外囊泡中其它成分的功能。
为了跟随时代科学研究进步的步伐，我建议开通“胞外囊泡及外泌体”讨论区，以促进该领域的充分讨论和合作，弥补当前该领域讨论内容分散，资料不容易汇集等缺点。同时也为广大胞外囊泡及外泌体医学研究者提供一个更好的交流空间。
小胶质细胞(microglia)是神经胶质细胞的一种，相当于脑和脊髓中的巨噬细胞，是中枢神经系统(CNS)中的第一道也是最主要的一道免疫防线。小胶质细胞大约占大脑中的神经胶质细胞的20%。小胶质细胞不停地清除着中枢神经系统中的损坏的神经，斑块及感染性物质。无数临床上和神经病理学研究表明激活的小胶质细胞在神经退化类疾病的发病机理中起到十分重要的作用，如帕金森病，多发性硬化和阿兹海默症等。但是过多激活或失控的小胶质细胞会引起神经毒性。他们是促炎因子和氧化应激的重要来源，如肿瘤坏死因子（TNF），一氧化氮，白介素等有神经毒性的物质
此贴是外泌体学习、相关答疑、战友互助、资源交换的专题帖，欢迎各位道友加入，互相交流学习，如有外泌体相关问题请留言，楼主会做解答。
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写了外泌体RNA的中文综述，想投核心期刊，最好是容易接收，审稿费便宜的，求推荐一下，谢谢……
