RNA干扰技术原理及应用
| 实验材料 | 模板DNA或质粒 试剂、试剂盒 | TETE饱和酚氯仿异内醇3molLNaAc无水乙醇5X转录缓冲液lOOmmoLLDTTRNasinrATPrGTPrUTPrCTPSF6T3或T7RNA聚合酶异戊醇DNase7.5molL乙酸铵无水乙醇乙醇 实验步骤 | 一材料与设备 1)模板DNA或质粒 2)TE 3)TE饱和酚：氯仿 4)氯仿：异内醇(24:1) 5)3mol/LNaAc(pH5.2) 6)无水乙醇 7)5X转录缓冲液：200mmol/LTris-HCl(pH7.9),30mmol/LMgCl2，10mmol/L亚精胺,50mmol/LNaCl 8)lOOmmoL/LDTT 9)RNasin 10)rATP，rGTP,rUTP,rCTP，各2.5mmoI/L 11)SF6,T3或T7RNA聚合酶 12)TE-饱和的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1,PH4.5) 13)DNase 14)7.5mol/L乙酸铵 15)无水乙醇 16)70%乙醇 二操作方法 1)在室温条件下按顺序加入以下组分： 5X转录缓冲液 2ul DTT，100mmol/L 10ul RNasin100U rATP,rGTPT,rCTP,rUTP(各2.5mmol/L) 20ul 线状模板DNA(1〜2.5mg/ml) 2ul SP6,T3或T7RNA聚合酶 40U 加无RNA酶的水至终体积为 l00ul 2)于37〜40℃反应1h 3)按RNA标准转录反应所述的方法除去DNA模,纯化RNA转录物。 |
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发布于 ： 2018-08-05
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