DNA分子量标准
| 实验方法原理 | 用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶，用氯化锂选择沉淀RNA，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高，小RNA片断丢失的缺陷。 | ||||||
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| 实验材料 | 微生物动物细胞植物组织 试剂、试剂盒 | 氯化锂尿素Tris-HCLEDTASDS 仪器、耗材 | 恒温水浴冷冻高速离心机紫外分光光度计取液器电泳仪电泳槽 实验步骤 | 一、组织或细胞匀浆 1. 对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5~10ml氯化锂-尿素溶液，匀浆器高速匀浆2分钟。 2. 对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5ml氯化锂—尿素溶液手工匀浆，并转移至Eppendof管中。 二、纯化 1. 匀桨液在0~4℃放置4小时后，12000g离心30分钟。 2. 取沉淀，加入原匀桨液1/2体积的氯化锂—尿素溶液，重复步骤1。 3. 沉淀用原匀浆液1/2体积的氯化锂—尿素溶液复溶后，加入等体积酚/氯仿/异戊醇在室温放置15~30分钟并不时摇动混匀，4000g离心5分钟。 4. 取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，-20℃放置1小时，5000g离心。 5. 70%乙醇洗沉淀一次，真空干燥。 6. RNA溶解液溶解沉淀，得RNA。 三、保存 分装，于-70℃保存。 |
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发布于 ： 2021-07-24
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