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实验材料 | DNA 试剂、试剂盒 | SSCNaClNaOHTris·Cl 仪器、耗材 | 紫外透射仪电泳仪多样抽滤加样器 实验步骤 | 1. 裁一张与多样过滤加样器一样大小的尼龙膜,将膜置于6×SSC的表面让其自然浸没。放置10min。 2. 裁一张与多样过滤加样器一样大小的Whatman3MM滤纸,用6×SSC浸湿。 3. 将Whatman3MM滤纸置于多样抽滤加样器上,将膜放置于其上。将多样抽滤加样器按厂商说明书安装好,确保装置中不漏气。 4. 在DNA中加入20×SSC使其终浓度为6×SSC,体积为200~400μl,在100℃变性10min,然后置于冰中。 5. 连接吸液装置与多样抽滤加样器,每孔中加入500μl6×SSC。 6. 将DNA样品离心5s,将样品加于各孔中,小心勿让吸头触及膜,让样品滤过。 7. 拆开多样过滤加样器装置,将膜置于一张浸过变性液的Whatman3MM 滤纸上,放置10min。 8. 将膜转至一张浸过中和液的的Whatman3MM 滤纸上。放置5min。 9. 将膜置于一张Whatman3MM 滤纸上,晾干。 10. 将尼龙膜置于可透过紫外线的塑料夹层中,将有DNA的一面朝下置于紫外透射仪上照射适当的时间以固定DNA。 11. 将晾干的膜夹于Whatman3MM 滤纸之间,室温下可保存数月。 |
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发布于 : 2021-09-21
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