
6q21FISHProbe
EmpireGenomicshasdevelopeda6q21FISHProbewhichcanbeusedtodetect6q21regionaneusomy.Theprobecomeslabeledinorange,andyoumayalsochoosetocustomizetheprobetomeetyourneeds.
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一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引 物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因 的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用MasterMix,模板和引物的不同进行优化,达到一个最佳反应体系。在反应体 系配置过程中,有下面几点需要注意:
1. MasterMix不要反复冻融,如果经常使用,最好溶解后放在4度。
2. 更多的配制Mix进行,减少加样误差。最好能在冰上操作。
3. 每管或每孔都要换新枪头!不要连续用同一个枪头加样!
4. 所有成分加完后,离心去除气泡。
5. 每个样品至少3个平行孔。
在分子生物学中,探针是根据碱基互补的原理,用来与特定的DNA片段做杂交以对特定的DNA片段进行检测,如Southern杂交
引物是用来扩增DNA序列的,因为核苷酸必须要连接在3-OH上才能够合成延伸,引物就是用来提供3-OH的。
只要是符合要求的DNA片段都可以用来做探针和引物,引物是用来扩增DNA序列,探针用来与特定的DNA片段做分子杂交的

