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NEB/SNAP-Surface® 649/S9159S/50 nmol
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NEB/SNAP-Surface® 649/S9159S/50 nmol
品牌 / 
纽英伦
货号 / 
S9159S-50nmol
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Description:

SNAP-Surface649isaphotostablefluorescentsubstratethatcanbeusedtolabelSNAP-tag®fusionproteinsoncellsurfacesandinsolution.Thissubstrate(BG-649)isbasedontheDyomicsdyeDY-649P1andissuitableforexcitationwitha650nmdiodelaserorusewithCy5filtersets.Ithasanexcitationmaximumat655nmandemissionmaximumat676nm.Thispackageincludes50nmolofSNAP-Surface649substrate,sufficienttomake10mlofa5μMSNAP-tagfusionproteinlabelingsolution.

TheSNAP-tagisanoveltoolforproteinresearch,allowingthespecific,covalentattachmentofvirtuallyanymoleculetoaproteinofinterest.TheSNAP-tagisbasedonmammalianO6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase(AGT).SNAP-tagsubstratesarederivativesofbenzylguaninesandbenzylchloropyrimidines.Inthelabelingreaction,thesubstitutedbenzylgroupofthesubstrateiscovalentlyattachedtotheSNAP-tag.

Therearetwostepstousingthissystem:subcloningandexpressionoftheproteinofinterestasaSNAP-tagfusion,andlabelingofthefusionwiththeSNAP-tagsubstrateofchoice.ExpressionofSNAP-tagfusionproteinsisdescribedinthedocumentationsuppliedwithSNAP-tagplasmids.ThelabelingofthefusionproteinswiththeSNAPtagsubstrateisdescribedbelow.

Excitation(dottedline)andemissionspectra ofSNAP-Surface649coupledtoSNAP-taginbufferat pH7.5Excitation (dotted line) and emission spectra of SNAP-Surface 649 coupled to SNAP-tag in buffer at pH 7.5
S9159a
StructureofSNAP-Surface649(MW1221.3g/mol).

Notes:

Storage:SNAP-Surface649shouldbestoredat–20°C(longterm)orat4°Cinthedark(shortterm,lessthan4weeks).Protectthesubstratefromlightandmoisture.Withproperstorageat–20°Cthesubstrateshouldbestableforatleastthreeyearsdryor3monthsdissolvedinDMSO.
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我手上有用于RT-PCR的引物和探针(上海合成的,20bp),做培养细胞成功得到结果。现在做体内实验,不知道是否可以用这个探针来作FISH。
有的老师告诉我用甲醛固定的石蜡切片标本,因为石蜡和甲醛本身会激发荧光,作FISH效果不好,而且不容易成功。
这样的话,
1.是否需要重新设计探针做ISH?
2.检测目的mRNA只需要确定位置和在实验条件下发生的量的改变。使用FISH是否大材小用(本来我是希望能节省费用,用以前的引物探针的)?
核心探针发射器和延伸探针发射器的区别是什么?
关键是你稀释后的还是稀释前的,如果没稀释,只要不是在太阳下晒就没事。如果稀释过,建议试用一下。
肯定是tagman探针做出来的结果好,但是贵啊。
引物设计略有不一样,但都可用Primer5设计。
此数据库内有各种已经应用过的探针、引物,省大家费神
http://medgen.ugent.be/rtprimerdb/
我是一个新手,最近在做多重定量PCR,要设计引物和探针。看到很多地方将探针要尽量靠近上游引物,想请教一下大家探针可不可以在下游引物所在的链上?如果可以,探针位置还是靠近上游引物吗?请各位有经验的帮忙指教一下了,非常感谢!
两者间用的引物有什么区别,可以用一样的序列去设计吗
prR的引物一般是RNA(单链),而探针是已知碱基序列的dna或rna
本人在上海基康合成了一个病毒检测的引物和Taqman探针,第一次合成的引物、探针已经用完了,体系也已经都是优化好的,但用第二批合成的引物、探针时发现问题很多,首先是之前的平台都是在60W的荧光增量,而现在变成了20W,引物、探针还是按照合成单上给的信息溶解的。测了引物、探针的核酸浓度后发现,第二次合成后溶解到10μM的探针和第一次溶解成10μM的探针的核酸浓度差异较大,引物也是如此。我就按照浓度差异,换算成相同的用量进行配制,结果仍然很差,不知道怎么解释。
哪位站友遇到过这类问题,还请给个答案呐!!在此先谢了!
prR的引物一般是RNA(单链),而探针是已知碱基序列的dna或rna
主要看你的产物大小,如果你的PCR产物在80-250bp之间,且用的是SYBR法或有合适的探针,那还是通用的
实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了
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