产品信息

产品描述

ER-Tracker探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC₆(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

本品为ER-TrackerRed(BODIPY^® TRGlibenclamide)，由红色荧光染料BODIPY^® TR和 Glibenclamide 偶联而成，其Ex=587nm，Em=615nm。格列本脲（Glibenclamide,glyburide），一种常用降血糖药物，在胰岛β细胞、胰岛素的分泌、心肌衰竭细胞功能以及心律不齐的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度结合ATP-敏感型K⁺通道的磺脲受体，且本受体富集存在内质网上，因此适合用作内质网荧光探针。

本品为溶于DMSO的1mM ER-TrackerRed(BODIPY^® TRGlibenclamide)储存液，推荐工作浓度为～1μM。

产品性质

分子式（Formula）	C44H42BClF2N6O7S2
分子量（MolecularWeight）	915.23
外观（Appearance）	液体
Ex/Em	587/615nm
滤片（Filter）	TRITC
结构式（Structure）

运输和保存方法

冰袋运输。≤-20℃避干燥保存，至少六个月有效。避免反复冻融。

注意事项

1）   避免反复冻融，可根据单次用量分装保存。避免将本品储存于无霜冰箱。

2）   DMSO有毒，请小心操作。

3）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。

1.        试剂准备

使用前将ER-TrackerRed(BODIPY^® TRGlibenclamide)回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。

2.  细胞样品处理及染色

2.1 将1mM ER-TrackerRed(BODIPY^® TRGlibenclamide)储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度为～1μM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。

注：使用含Ca²⁺、Mg²⁺ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。

2.2 染色

对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。

细胞如需固定，请参考以下步骤。

3．细胞固定

3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2min。

【注】：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-TrackerRed(BODIPY^® TRGlibenclamide)留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。

3.2 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。

【注】：不建议对细胞进行透化处理，因为经TritonX-100透化后，无信号保留。

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