【求助】有用过罗氏的DIGPCR探针标记试剂盒的吗？有问题请教！
2021-07-31
问题描述：
用DIG-PCR探针标记试剂盒标记探针，质粒PCR扩增后胶回收产物做模板，待标记探针片断长约600bp，反应体系如下：
探针
ddH2O36.25ul
buffer(瓶3)5ul
核苷酸混合液（含DIG-dUTP）(瓶2)2.5ul
dNTPStockSolution(瓶4)2.5ul
引物F1ul(10pmol/ul)
R1ul(10pmol/ul)
酶（瓶1）0.75ul
DNA1ul（100pg）
程序：35个循环，退火温度55度。
第一次通过探针标记得到了相应的PCR标记产物，亮度和对照相当，片段大小比标记的探针模板大，证明整个过程应该没有问题。
但一个月后重新用相同的体系，相同的程序，只是探针模板的量不同却什么都扩不出来。不知道问题出在哪了！
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malilian
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不好意思，反应体系总是排版不好，请大家忍耐看一下，多谢了！
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