Description
Product Highlights
- Fast - streamlined protocol for simple recovery of PCR products in 10 minutes and DNA from gel slices in 20 minutes
- Efficient - column matrix developed for recovery rates of between 70% and 95%
- High-performance - extraction of consistently high-quality DNA fragments, ideal for use in all downstream applications
- Versatile - single buffer promotes effective DNA recovery from both TAE and TBE agarose gels
- Safe - no hazardous phenol/chloroform extraction
Product Description
ISOLATE II PCR and Gel Kit is the simplest option for the purification of PCR products and for the isolation of DNA fragments from TAE and TBE agarose gel slices. A fast and easy-to-follow protocol is given for each application.
PCR products can be purified in 10 minutes using simple binding and elution steps. Concentrated PCR products ranging between 60 bp and 15 kb can be eluted, removing primers, nucleotides, enzymes, mineral oil, salts and other impurities.
DNA fragments between 50 bp and 20 kb can be extracted from agarose gel slices in 20 minutes using a color indicator to help maintain optimal pH and identify undissolved agarose.
ISOLATE II PCR and Gel Kit has been designed to deliver optimal performance in downstream applications, including transformations, cloning, sequencing and restriction analysis.
Applications
- Cloning
- Ligation
- Restriction digestion
- Fluorescence sequencing
- Labeling
- PCR
- Transfection
- In vitro transcription

Nucleic Acid Isolation Guide
Download the ISOLATE II Guide with detailed product descriptions and performance data to help you choose the best product for your researchISOLATE II Selection Chart
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在弱碱性(pH 8~9)、暗处、室温或40℃条件下,氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯(缩写为FDNB或DNFB)反应,生成黄色的2,4-二硝基苯氨基酸(dinitrophenyl amino acid,简称DNP-氨基酸)。多肽或蛋白质的N-末端氨基酸的α-氨基也能与FDNB反应,生成一种二硝基苯肽(DNP-肽)。由于硝基苯与氨基结合牢固,不易被水解,因此当DNP-多肽被酸水解时,所有肽键均被水解,只有N-末端氨基酸仍连在DNP上,所以产物为黄色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯,所以可以用乙酸乙酯抽提并将抽提液进行色谱分析,再以标准的DNP-氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种类。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。
荧光标记物常用的有几十种,比如FITC, PE等等,各个生产厂家还有自己的专利产品
其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
操作步骤:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
探针
ddH2O36.25ul
buffer(瓶3)5ul
核苷酸混合液(含DIG-dUTP)(瓶2)2.5ul
dNTPStockSolution(瓶4)2.5ul
引物F1ul(10pmol/ul)
R1ul(10pmol/ul)
酶(瓶1)0.75ul
DNA1ul(100pg)
程序:35个循环,退火温度55度。
第一次通过探针标记得到了相应的PCR标记产物,亮度和对照相当,片段大小比标记的探针模板大,证明整个过程应该没有问题。
但一个月后重新用相同的体系,相同的程序,只是探针模板的量不同却什么都扩不出来。不知道问题出在哪了!
按照药品管理的用于血源筛查的体外诊断试剂和采用放射性核素标记的体外诊断试剂,不属于本办法管理范围。
第十七条 根据产品风险程度由低到高,体外诊断试剂分为第一类、第二类、第三类产品。
(一)第一类产品
1.微生物培养基(不用于微生物鉴别和药敏试验);
2.样本处理用产品,如溶血剂、稀释液、染色液等。
(二)第二类产品
除已明确为第一类、第三类的产品,其他为第二类产品,主要包括:
1.用于蛋白质检测的试剂;
2.用于糖类检测的试剂;
3.用于激素检测的试剂;
4.用于酶类检测的试剂;
5.用于酯类检测的试剂;
6.用于维生素检测的试剂;
7.用于无机离子检测的试剂;
8.用于药物及药物代谢物检测的试剂;
9.用于自身抗体检测的试剂;
10.用于微生物鉴别或者药敏试验的试剂;
11.用于其他生理、生化或者免疫功能指标检测的试剂。
(三)第三类产品
1.与致病性病原体抗原、抗体以及核酸等检测相关的试剂;
2.与血型、组织配型相关的试剂;
3.与人类基因检测相关的试剂;
4.与遗传性疾病相关的试剂;
5.与麻醉药品、精神药品、医疗用毒性药品检测相关的试剂;
6.与治疗药物作用靶点检测相关的试剂;
7.与肿瘤标志物检测相关的试剂;
8.与变态反应(过敏原)相关的试剂。

