DESCRIPTION:Oligonucleosomes purified from HeLa cells (primarily oligomers of 3-6 units, 600-1200 bp DNA). These are core nucleosomes comprising histone octamers (two copies each of histones H3, H4, H2A, H2B), each wrapped with ~146 bp of DNA with ~50 additional bp of internucleosomal DNA. The purified oligonucleosomes are then biotinylated with an amine-reactive reagent, before dialysis into the final storage buffer. The biotinylation conditions have been optimized to achieve the highest level of modification possible while still retaining most or all of the activity normally observed with a panel of three methyltransferases (Dot1L, NSD2 and MLL1 Complex) when assayed with unmodified nucleosomes (see Data Sheet). Useful for the assay of various histone methyltransferases by radiolabeled/scintillation proximity techniques with streptavidin-coated reagents or by methods employing a combination of site-specific anti-methyllysine antibodies and streptavidin-conjugated detection reagents.
NOTE: Each vial contains 50 µg nucleosomal DNA, determined by A260nm. At ~200 bp/nucleosome, the total weight, DNA + protein, is thus ~91 µg.
A 50ug vial of RBC nucleosomes contains over 80% more product than those from vendors that sell by total weight.
SOURCE: HeLa S3 cells
SUPPLIED AS: Purified biotinylated HeLa oligonucleosomes in 20 mM HEPES pH 7.5, 1 mM EDTA, 0.5 mM PMSF, 1 mM ß-mercaptoethanol, 20% glycerol (w/v).
STORAGE: -80°C, aliquot and snap-freeze after first use.
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eactionBIOLOGy公司成立于2001年，是专门从事早期药物发现化验服务的公司，提供广泛的服务，包括用于激酶和表观遗传生物化学以及基于细胞的高通量筛选（HTS）和选择性化合物分析的稳定测定技术。我们还提供相关的HTS检测试剂，包括高度纯化和特征化的表观遗传蛋白。平均每年进行数百万次HTS和性能分析。在全球有超过750家公司（包括制药，生物技术，学术和非营利实验室）购买我们的产品。
MedicalDeviceDepot，Inc.（MDD）的成立基于一个简单的想法：改变全球医疗保健专业人员购买其医疗设备的方式。许多医疗设备供应商的员工常常缺乏充分满足客户需求并回答所有问题所需的培训和知识。对于繁忙的医师和其他寻求购买优质医疗设备的医疗保健专业人员而言，结果通常是一个缓慢，麻烦且令人沮丧的过程。医疗器械仓库有所不同。我们经验丰富的销售和服务代表经过全面培训，可以回答您有关我们广泛目录中产品的所有问题。我们的首要任务是确保您对每次购买都充满信心。我们致力于为您提供无忧的愉快体验。使用医疗设备仓库时，您可以期望得到以下结果：来自礼貌，知识渊博的代表的个性化服务-您将永远不会使用机器。如果您的代表在呼叫时与另一个客户一起工作，则在一个小时内返回的呼叫。每次互动中的诚实和透明。我们珍惜您的时间，并了解购买医疗设备时您有很多选择。医疗器械仓库保证了响应，高效，周到的服务，这是我们对您的承诺。我们期待着帮助您满足所有医疗设备需求。
ReactionBiology详细产品列表：货号产品价格（美元）HMT-11-376ASH1L(His)Methyltransferase325DMT-21-124DNMT1450DMT-21-125DNMT3aMethyltransferase450DMT-21-126 DNMT3b450HMT-11-101DOT1LMethyltransferase395HMT-25-115 EZH1Complex450HMT-25-114EZH2Complex799HMT-25-173EZH2-Y641FComplex799HMT-11-102G9aMethyltransferase(GST)(aa786-1210)299HMT-11-245G9aMethyltransferase(His)(aa913-1193)299HMT-12-104G9a/GLPComplexMethyltransferase325HMT-11-103GLPMethyltransferaseProtein299HMT-15-105MLL1Complex499HMT-15-106 MLL2Complex499HMT-15-107MLL3Complex499HMT-15-108 MLL4Complex499MT-11-359NNMT(GST)(NicotinamideN-Methyltransferase)299MT-11-358NNMT(His)(NicotinamideN-Methyltransferase)299HMT-11-319NRMT1(GST)325HMT-21-139NSD1Methyltransferase450HMT-21-1380NSD2(His)Methyltransferase450HMT-21-122 NSD2Methyltransferase550HMT-11-377NSD2SET(His)325HMT-21-159NSD2-E1099KMethyltransferase599HMT-11-378NSD2-E1099K-SET(His)325HMT-21-181NSD2-T1150AMethyltransferase450HMT-11-379NSD2-T1150A-SET(His)325HMT-11-132 NSD3Methyltransferase325HMT-21-348PRDM2Methyltransferase325HMT-21-152PRDM9Methyltransferase450HMT-11-119PRMT1Methyltransferase325HMT-11-113PRMT3Methyltransferase325HMT-11-120PRMT4Methyltransferase399HMT-21-172PRMT5Methyltransferase450HMT-22-434PRMT5(C449S)/MEP50799HMT-22-148PRMT5/MEP50Complex799HMT-11-121PRMT6Methyltransferase(GST)325HMT-21-380PRMT6Methyltransferase(His)325HMT-21-382PRMT7(His)450HMT-11-135PRMT8Methyltransferase325MT-11-356s-COMT(His)(SolubleCatechol-O-Methyltransferase)299MT-11-357s-COMT(V108M)(His)(SolubleCatechol-O-Methyltransferase）299HMT-15-116 SET1AComplex(5-subunits)499HMT-15-117SET1BComplex(5-subunits)499HMT-11-133SET7/9Methyltransferase299HMT-11-476SET8(GST)299HMT-11-118 SET8Methyltransferase299HMT-11-128 SETD2(GST)Methyltransferase299HMT-11-129SETD2(His)Methyltransferase299HMT-11-110SMYD2Methyltransferase325HMT-11-111SUV39H1Methyltransferase299HMT-11-418SUV39H2(GST)Methyltransferase299HMT-11-112SUV39H2(His)Methyltransferase299HMT-21-149SUV420H1-tv1Methyltransferase450HMT-21-150SUV420H1-tv2Methyltransferase450HMT-21-349SUV420H2Methyltransferase325HMT-14-109WRAD2375HMT-14-438(H3.3-H4)2Tetramer325HMT-35-435CoreHistones(Chicken)250HMT-11-184Fibrillarin(GST)325HMT-11-183Fibrillarin(His)325HMT-11-137GST-GAR299HMT-12-316H2A/H2Bdimers325HMT-11-180HistoneH1.050HMT-11-146HistoneH2A50HMT-11-147HistoneH2B50HMT-11-134 HistoneH3.350HMT-35-179Nucleosomes(ChickenMono/Di)280HMT-35-182Nucleosomes(ChickenOligo/PolyH5Enriched)280
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这篇题为“晶体结构揭示TET蛋白介导的氧化反应底物偏好性机制”的研究论文，首次报道了TET蛋白对三种DNA甲基化衍生物不同催化活性的分子机制，为基因组中5-羟甲基胞嘧啶相对稳定存在提供了分子水平的解释。该论文是徐彦辉课题组在DNA甲基化领域作出的又一突破性成果。组长徐彦辉为复旦大学生物医学研究院研究员，复旦大学附属肿瘤医院兼职教授。该课题组曾于2013年在《细胞》杂志报道TET蛋白的三维结构，于2015年初在《自然》杂志报道DNA甲基化建立的机制研究（参考徐彦辉课题组网站，http://xtal.fudan.edu.cn/index-ch.html）。
据悉，人体基因组DNA是生命遗传信息的基本载体，生命延续和繁衍需要DNA上的一种“甲基化修饰”。“甲基化修饰”具有调控人体内特定基因的表达和决定细胞命运的作用，可使细胞发生程序化的改变。哺乳动物基因组的胞嘧啶上会产生甲基化修饰，称为5-甲基胞嘧啶(5mC，即第5种碱基)。而TET蛋白是哺乳动物细胞中的一种氧化酶，可以执行DNA去甲基化功能。近期研究发现，TET蛋白在去甲基化过程中，将5mC氧化为5hmC(5-羟甲基胞嘧啶，第6种碱基)后，可继续催化5-hmC转化为5-fC（5-醛基胞嘧啶，第7种碱基）和5-caC（5-羧基胞嘧啶，第8种碱基)。其中，5hmC在细胞内相对稳定存在，且其含量远远高于5fC和5caC。但这一现象一直没有合理的生物学解释。徐彦辉课题组综合利用结构生物学，生物化学和计算生物学等研究方法，揭开了这一谜底。
徐彦辉课题组的生化实验表明，TET蛋白对5mC具备很高活性(产生5hmC)，而对5hmC(产生5fC)和5fC(产生5caC)的活性很低。TET蛋白就如同连续的三个扶梯，在转化不同碱基的情况下，其转化速度明显不同，导致产生较多的5hmC和少量的5fC及5caC。结构研究发现，5mC在TET蛋白催化口袋中的取向使得它很容易被催化活性中心俘获并被氧化为5hmC。5hmC和5fC由于已经有氧的存在，其在催化口袋中被限制住，不容易发生进一步的氧化反应，导致TET蛋白对这两种碱基活性降低。在这样的催化能力差异下，TET会很顺利将5mC产生5hmC，一旦5hmC产生，TET将不容易使其进一步氧化为5fC和5caC，导致细胞内5hmC相对稳定，并且其含量远远高于5fC和5caC。在特定的基因中区域，TET蛋白可能被特定的调控因子激活，会跨越能垒阻碍产生高活性的TET，连续氧化为5fC和5caC。这使得5mC在TET蛋白催化下更容易被氧化为5hmC。这一发现解决了困扰表观遗传学领域的一个难题，也为揭示其他蛋白质逐步催化反应的分子机制提供了新思路和新方法。
据悉，该项工作是由复旦大学徐彦辉课题组与中国科学院上海药物所罗成课题组合作完成的，徐彦辉课题组的胡璐璐博士和程净东博士，以及罗成课题组的卢俊彦博士是该项工作的主要完成人。该项研究的结构数据是在中科院上海光源BL-17U，国家蛋白质科学中心BL-19U等线站上采集。
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我是新手，来到丁香园看到有这么多的热心人，感到很高兴！！我也有很多问题需要大家的帮助！！实验已经作了一年了可是毫无进展，心里很是着急！！
我的课题是以外消旋的苯基乙二醇为底物，用假丝酵母催化生成手性纯的S-型苯基乙二醇，由于是老课题，所以目标是提高转化反应的底物浓度和菌体的使用批次（目前菌体使用一批后便不能再使用）。
我曾试过很多种方法，但均效果不大！我试着在转化过程中添加醛类，酮类，醇类作为辅助底物，增加菌体的使用批次。可效果不好，特别是添加了醇类后还有的起了反作用，因为我的这个转化过程中涉及到NAD和NADPH的再生。（其转化过程是酵母先催化将外消旋的苯基乙二醇变为酮，再将酮还原为醇，经过这一过程就将外消旋的苯基乙二醇变为手性纯的S-型了）
我还试过用固定化的方法，海藻酸钙包埋法，可是这样底物浓度就更低了！！
我现在不知道下一步该如何做了，很着急，请大家帮帮忙。谢谢了！！谢谢
不同的酶Km值不同，同一种酶与不同底物反应Km值也不同，Km值可近似的反应酶与底物的亲和力大小：Km值大，表明亲和力小；Km值小，表明亲合力大。
Km最小的那个底物，就是酶的最适底物。
1，底物DNA上没有该限制酶的识别、切断位点。特别是一些经过重组等处理的DNA，碱基易发生缺失、变化等。
2，限制酶识别位点上的A或C被甲基化。部分限制酶对识别位点中的碱基是否被甲基化比较敏感，从而无法切断该位点。
3，底物不纯。如果底物DNA中有限制酶阻害物质，回影响限制酶的酶切作用。在此种情况下，底物DNA须重新进行精制。
4，限制酶的识别、切断位点在底物DNA的高级构造中所处的位置，对酶切反应也有一定的影响，例如,限制酶NaeI在切断pBR322DNA时,就有着非常难以切断的部位。
5，限制性内切酶本身无活性或低活性
决定酶促反应最大速度Vm的因素是什么？是同一底物，尽管加不同种酶，其Vmax都相同吗?可以画曲线图解释一下吗？可是根据米曼氏方程来看又有点矛盾，Km变大，Vmax也需变大，才可使v变大。所以题目所述到底应该怎么理解呢
反应底物——葡萄糖
反应产物——ATP、乙醇、CO2或ATP、乳酸
有氧呼吸：
反应底物——葡萄糖
反应产物——ATP、CO2、H2O
