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Signosis/Single Cell Real-Time RT-PCR Assay Kit/CL-0003/1 Ea
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Signosis/Single Cell Real-Time RT-PCR Assay Kit/CL-0003/1 Ea
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Signosis
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CL-0003
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Geneexpressionisregulatedbyindividualcells,sowhynotstudygeneexpressioninasinglecellsuchasstemcells,neurons,developmentaltissues,andlasercapturemicrosections?ToallowresearcherstheABIlitytotakeonsinglecellstudies,SignosishasdevelopedasinglecellSYBRGreenbasedreal-timeRT-PCRAssaykitwhichallowsyoutodirectlyassaygeneexpressionlevelsinasinglecellusingcelllysatewithoutanyRNApreparation.Thiskitprovidesasimple,sensitive,quantitativeandcost-effectivemethodtomonitorPCRreactionsinrealtime.ThereagentsforCDNAsynthesisandPCRamplificationinadditiontoDirectcDNAcelllysisbufferarealsoincludedinthekit.

Principle:

Thebuffersareoptimizedforcelllysatepreparationandreal-timeRT-PCR.

 

Data:


SingleCellRT-PCRAssayKit.A:TheindicatedcellswerelysedwithDirectcDNAcelllysisbufferfromSignosisandcompetitorrespectively,andsubjectedtoRT-PCRforß-actinwith30cycles.B:TestingforgenomicDNAcontamination.Lane1.ß-actinwasamplifiedwith36PCRcyclesdirectlyfromcelllysatewithoutreversetranscription(RT).Lane2.ß-actinwasamplifiedwith36PCRcyclesdirectlyfromcDNAtranscribedfromcelllysate.

 

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细菌引起许多严重疾病,如食物中毒和肺炎。科学家们面临的挑战是,引起疾病的细菌是非常有弹性的。比如,当诸如大肠杆菌之类的细菌经历饥饿时,它们会大规模地重新组装它们的DNA,从而使得它们能够在应激条件下存活下来。 为了实现这一壮举及提高存活机会,大肠杆菌菌株显著增加一种被称作Dps的蛋白的数量。这种蛋白将细菌DNA压缩成致密的水晶状复合物并保护其免受损伤。虽然之前的研究已表明Dps保护细菌免受饥饿和其他的应激因素,但是科学家们并不知道这种... 查看更多>
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大约15亿年前,小小的游客来到细胞内,后来演变成所有的植物和动物 - 包括人类。.这些访客是线粒体,小细胞器,其突出的作用是产生90%的化学能细胞需要存活。从进化的角度来说,人类,动物和植物因此是两种生物的组合。线粒体有自己的DNA,但人类线粒体中的13个基因 - 以及tRNA,rRNA和一些小肽的DNA序列 - 大大超过人类核中的20,000个基因。然而,根据伯明翰阿拉巴马大学病理学教授斯科特巴林格博士的初步研究,这些细小的线粒体可能对细胞代谢和对心力衰竭或肥胖等代谢性疾病的易感性产生强烈影响 查看更多>
让基因表达分析实现高通量之原理&性能优势 一次性检测84个基因、372个基因不再是问题; 想快速找到差异样本间的差异表达基因,只要会操作qPCR,就会做这个试剂盒; 查看更多>
eIF-4F and p70 S6 kinase play critical roles in translational regulation. eIF-4F is a complex whose functions include the recognition of the mRNA 5" cap struct 查看更多>
为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出. 1、样品准备区这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施:1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。2)组织培养物、组织标本和血 查看更多>
【摘要】目的:探讨BAI1mRNA表达水平与不同级别胶质瘤间的关系。方法:选取病理分级为WHOⅡ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤标本依次为12例、12例、14例,正常脑组织标本6例;提取总RNA,用半定量RT-PCR法检测BAI1基因的转录表达情况。结果:BAI1mRNA在所有正常脑组织和26例(68.4%)胶质瘤中表达。正常脑组织的BAI1基因转录表达水平高于胶质瘤组,P<0.05;各级胶质瘤间BAI1基因转录表达水平差异没有统计学意义。结论:BA... 查看更多>
国家人类基因组研究所(NHGRI)研究人员参加了与丹佛科罗拉多大学,加拿大蒙特利尔麦吉尔大学和瑞士苏黎世大学儿童医院同事的国际研究,他们描述了一种涉及身体缺陷的新疾病。处理维生素B12或维生素B12的能力。这种罕见的遗传性疾病仅在男孩身上发现,可引起严重的神经症状,包括发育迟缓,癫痫和脑畸形。对新生儿的钴胺素代谢缺陷进行了筛选,但新的疾病以前没有被区分为相关病症,即钴胺素C缺乏症或cblC。随着他们的发现,2013年9月5日发表在美国人类遗传学杂志 [cell.com]上,研究人员在X 查看更多>
化 学 调 控 靶 基 因 转 录 的 方 法 有 很 多 种 ,最 常 见 的 是 利 用 影 响 转 录 因 子 活 性 的 别 构 调节 物 进 行 调 控 。其 中 的 一 个 方 法 是 运 用 二 聚 化 的 诱 导 剂 或 者 二 聚 体 在 无 活 性 的 融 合 蛋 白上 重 组 有 活 性 的 转 录 因 子 。最 常 用 的 体 系 是 将 天 然 产 物 雷 帕 霉 素 (r a p a m y d n ) 或 者 无生物 活 性 的 类 似 物 作 为 二 聚 化 的 药 物 。 查看更多>
低温电子显微镜技术 - 本月早些时候MRC科学家Richard Henderson博士获得诺贝尔奖 - 现已被用于解决对基因表达至关重要的蛋白质复合物的结构。在新窗口发表于Scienceopens的论文中,研究人员表示,该结构指出人类流感病毒如何能够破坏细胞的基因表达机制。该研究由Lori Passmoreopens博士在MRC分子生物学实验室的新窗口中领导,是第一个揭示蛋白质重要部分结构的研究,称为裂解和聚腺苷酸化因子(CPF)。CPF是由许多亚基组成的复合酶。冷冻电子显微镜已经彻底 查看更多>
近日,一项刊登在国际杂志Genome Medicine上的研究报告中,来自斯坦福大学医学院的研究人员通过研究发现,免疫细胞的基因表达或许能够有效预测机体对流感的易感性,文章中,研究者表示,表达KLRD1的自然杀伤细胞或许能作为机体对流感易感性的特殊生物标志物。 查看更多>
让基因表达分析实现高通量之操作流程&结果分析 RT2 Profiler PCR Array操作流程 查看更多>
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我想研究转录因子A对B物质表达有无影响,先构建转录因子A的真核表达载体和含B物质全长启动子区的荧光素酶报告质粒,那么转染时细胞是否加1.A表达载体 2.B荧光素酶报告质粒 3.作为reference的内参质粒?请教有哪位高手做过?可以这么做吗?

最近导师要求做一个关于PARP家族蛋白在肝癌和癌旁组织中转录以及表达情况的初步研究,以确定目前的课题是否有很大价值。我之前一直在做湿实验,没有生信背景,所以对这个工作比较头疼。我不会编程,所以直接上网查找有没有可以在网上直接进行分析的网站。我一开始是上cbioportal上对肝癌的mRNA转录谱进行分析,但网站里面提供的对照是一个所谓的标准正常人。我没查到这个所谓的标准正常人是什么,而且导师说肝癌可能存在个体差异,所以要求用肝癌及其对应的癌旁组织的转录谱和表达谱进行分析。我上GEO搜索癌旁组织(paracanceroustissue),根本什么想要的结果都没有。我现在完全是一头雾水,无从下手,希望有做相关领域工作的前辈们或是做与之类似的工作的前辈们提供指导,非常感谢!

转录组学的研究对象包括mRNA和非编码RNA等。新一代高通量测序技术可以全面快速地获得特定细胞或组织在某一个状态下几乎所有转录本的序列信息和表达信息,从而准确地分析基因表达差异、基因结构变异、筛选分子标记(SNPs或SSR)等生命科学的重要问题。

基因表达谱测序是直接对某一物种或特定细胞在某一功能状态下产生的mRNA进行高通量测序,可以用来研究基因的表达差异情况。该技术结合了转录组测序建库的实验方法,与转录组测序相比,基因表达谱测序要求的读长更短,测序通量更小,但仅可用于基因表达差异的研究。

转录组测序是RNA水平测序,相当于DNA水平的基因组测序,是一个框架。表达谱主要研究的是基因表达量的变化,上调或下降。先要有转录组或是基因组才可以做表达谱,否则没有Ref做参考。

转录组测序和表达谱测序其实都是通过高通量测序技术进行的,转录组测序主要是针对没有参考基因组(即基因组未完成测序)的物种,侧重于获得你材料的全部转录组信息;而表达谱则侧重于检测各个基因的表达量。
翻译,基因表达调控123
爪机粉丝008B22021-07-30
这句话翻译成英文是:Genes are expressed by transcription and translation, and what controls transcription
是的,必须,rna病毒需要逆转录成DNA之后进行这个步骤,朊病毒需要逆转两次之后进行。但是注意这是必须的两步,不是只有两步。
如何在转录水平 检测某基因的表达
1.基因丢失:体细胞分化过程必须将某些基因永久性的关闭,最简单有效的方式就是将其丢失.2.基因扩增:发育分化、环境条件的改变,对某些产物的需要量急剧增加--增加该基因的拷贝数.3、基因重排:某些基因片段改变原来的书顺序重新排列.4、甲基化修饰,脊椎动物,DNA上特定的CpG序列的C处可发生甲基化修饰.5、染色质结构的修饰.
检测目的基因是否转录通常采用分子杂交的方法。 基因表达分为转录及翻译两阶段,转录是以DNA(基因)为模板生成mRNA的过程,翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程,检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。
蛋白质在细胞中的丰度变化很大程度上决定了不同组织如脑和肌肉,以及健康和不健康人类细胞之间的差异。长期以来人们都认为转录,这一控制遗传信息从DNA流向RNA的过程,对决定细胞内蛋白质的数量起主导作用。但在过去的十年里,有许多的研究则提出RNA翻译为蛋白质的速度差异是一个更为重要的因素。
近期发表在《科学》(Science)以及其他杂志上的一些新研究证实,转录实际上是决定蛋白质丰度中最具影响力的步骤。
例如,近期来自哈佛-麻省理工Broad研究所的Marko Jovanovic等在Science杂志上发表文章,称检测了处于稳定状态和响应细菌脂多糖(LPS)时的小鼠骨髓树突细胞。他们发现在稳定状态时,mRNA水平、翻译速度和蛋白质降解速度可分别解释68%、26%和8%的蛋白质表达差异。当用LPS刺激细胞时,mRNA水平似乎可以解释90%的蛋白质表达差异,而翻译和蛋白质降解只能解释4%和6%的差异。Jovanovic等发现,在LPS处理的情况下,核糖体、线粒体以及其他一些高表达管家蛋白的翻译和蛋白质降解速度发生了更多改变,表明这两个步骤在控制一些过程中发挥了重要的作用。
来自加州大学洛杉矶分校统计学和人类遗传学助理教授Jingyi Jessica Li,和劳伦斯伯克利国家实验室的Mark Biggin,则在PeerJ杂志的一篇论文中用两种方法重新分析了2011年一项Nature研究的数据,说明了一些检测错误。他们证实采用第一种方法结果表明mRNA水平差异可以解释最小56%的蛋白质水平差异,而第二种方法表明mRNA水平可以解释84%的蛋白质表达差异,其中转录占73%,RNA降解占11%,而翻译和蛋白质降解各自仅占8%。
在3月6日,发表在Science杂志上的一篇题为“Statistics requantitates the central dogma”的文章中,Li和Biggin综述了上述这些近期的研究,得出了转录是蛋白质丰度最大贡献者这一结论。他们认为,他们自身以及近期其他一些研究工作都采用了更细致的统计学方法,来评估或是减少了实验性检测错误。Li和Biggin认为,早期的一些研究得到的有关翻译影响的结果实际上是由于实验错误所导致。
研究人员提出,科学家们精确地模拟基因表达需要采用更准确的测量和分析方法。他们的研究对于鉴别出可以有效治疗各种疾病的药物具有重要的影响。
原文链接:Statistics requantitates the central dogma
Dynamic profiling of the protein life cycle in response to pathogens
转录组分析概述123
杀生丸EIO2018-02-26
转录组是指某个物种或特定细胞在某一生理功能状态下,细胞内所有转录的mRNA产物的集合,包含了时间和空间的限定,是连接基因组遗传信息与生物功能的蛋白质组的必然纽带。转录水平的调控是目前研究最多的,也是生物体最重要的调控方式。
  应用高通量技术进行转录组测序是一种快捷可靠的获取转录组信息的方法。mRNA的转录本表达分析,通过获得研究对象基因组转录区域的信息,鉴定转录发生位点,可变剪切等,其精确的计数方法更可对基因进行精确的定量分析。
下列有关基因表达的叙述正确的是(  )A.基因表达包括转录和翻译两个过程,均发生在细胞核中B.转录的模板是基因的一条链,翻译的模板是tRNAC.转录和翻译的原料都是氨基酸,都需要消耗能量D.转录和翻译都需要酶的催化,但酶的种类和功能不同
生命活动丰富多彩、千变万化。但是万变不离其宗,不管如何变化都围绕着中心法则展开。核酸作为遗传物质指导蛋白质的表达,表达产生的一些特殊蛋白(如转录因子、调控蛋白)反过来又对DNA指导合成蛋白质的过程进行调控。对基因表达调控的研究一直是生物学研究热点,涉及到生命活动的各个过程,也是各类信号通路研究无法绕过的部分。
当面对某个基因表达调控研究时,第一个想到的研究对象是什么?没错,就是基因的启动子。通过启动子区域对基因表达进行调控是最直接有效的手段,所以也是研究基因表达调控的重点。现在的基因数据库信息丰富,拿到基因及其启动子序列非常简单。那么问题又来了,拿到启动子序列以后,下一步怎么找相关的调控蛋白/转录因子呢?生物信息学方法预测?你会得到很多可能的目标调控蛋白/转录因子,还要做实验一个一个验证。凝胶迁移(EMSA),染色质免疫共沉淀(ChIP)?只能针对已知能与启动子结合的调控蛋白/转录因子,而且还需要相应探针/抗体,对于大量筛选无能为力。
美国Signosis的转录因子(结合启动子)微孔板芯片检测试剂可以方便、高效地解决这一问题。该方法专门用于筛查与特定DNA序列(通常是含有转录因子结合位点的启动子序列)相互作用的调控蛋白/转录因子,获得目的基因的启动子序列后,使用该方法可以筛查48/96种常见的调控蛋白/转录因子与启动子序列结合情况。该方法利用转录因子与特定DNA序列结合的特点,针对每一种转录因子设计相应的生物素标记探针;当混合探针与核蛋白样本共同孵育时,探针与相应的转录因子结合形成转录因子/探针复合物;除去游离的探针,收集转录因子/探针复合物;分离复合物中的DNA探针,探针的量与探针的量与转录因子含量呈正相关。在探针混合物中同时加入启动子片段,如果DNA序列中含有转录因子结合位点,就会与生物素标记的探针竞争性结合转录因子,转录因子与相应探针形成的复合物减少。通过比较有无目的基因启动子片段中转录因子探针检测差异,可以分析出与无目的基因启动子片段相互作用的转录因子种类。
这种方法可以简单、快速地在48/96种常见转录因子筛选出与目的启动子片段相互作用的调控蛋白/转录因子,从而进一步探索目的基因的表达调控。待筛选的调控蛋白/转录因子都是在生命活动中起重要通的调控蛋白/转录因子,大大方便了后续的基因表调控、信号通路及其它方面的研究。
http://www.biomart.cn/infosupply/17197307.htm

转录因子(启动子结合)微孔板阵列检测试剂I(FA-2001_Promoter-binding_TF_profiling_assay_I).pdf(91.72k)
不一样。
基因表达(gene expression)是指细胞在生命过程中,把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译,转变成具有生物活性的蛋白质分子。
即表达=转录+翻译
转录量和拷贝数是相等的(产生的RNA),但和表达量(蛋白质,最终产物)不同意思,只是表达的第一步,只有转录的也都同样顺利翻译成蛋白质才有同时满足的可能。
转录增加 不等于 表达增加表达增加 也不等于 转录增加成功转录 不代表 成功表达成功表达 说明 成功转录