Cell Line Information:
Designations: 3197-3Depositors: JE DeLarcoGrowth Properties: adherentOrganism: Mus musculusMorphology: fibroblastOrgan: embryoCell Type: fibroblastAge: embryoThe cells were derived from ATCC CCL-92 by transformation with Moloney murine sarcoma virus. They release a growth factor in serum free medium. They do not produce virus particles. The cells have a tendency to slough off the flask surface. Tested and found negative for ectromelia virus (mousepox).
The Transfection Reagent:
3197-3 Cell Avalanche™ Transfection Reagent is a new, proprietary solution specifically designed for transfection on 3197-3 Cells. The proprietary formulation of lipids and polymersensures the highest possible transfection efficiencies and viabilities for 3197-3 Cells. No other transfection reagents can match the efficiency, convenience, and gentleness of 3197-3 Cell Avalanche™ Transfection Reagent for transfection on 3197-3 Cells. For details of the developing process of this reagent, please go to: How did EZ Biosystems develop Avalanche™ Cell type/cell line specific transfection reagent series?
Features:
- Unique formulation-maximize transfection performance in 3197-3 Cells.
- Extremely gentle to cells
- 0.5 ml is able to transfect about 1000 wells of 24-well plate
- Deliver single or multiple plasmids
- Synthesized from 100% animal origin-free components, making it easy to validate the absence of zoonotic diseases, such as BSE or viruses, in research experiments or cells lines
- Economical: High efficiency means less amount of nucleic acid & reagent is needed
- Developed and manufactured by EZ Biosystems
EZBiosystems美国EZBiosystems™公司是一家全球性转染试剂和基因表达生产服务提供商，公司的研发宗旨是让生命科学研究变得更简单，快速，容易！该公司主要产品之一为新一代转染试剂Avalanche 系列产品，该产品集合了组合化学，分子生物学和细胞生物学技术。公司致力于开发针对不同细胞类型的专用转染试剂。公司研发团队由多个学科经验丰富的专家组成，包括组合化学、脂类化学、生物物理学、分子生物学和细胞生物学。目前,EZBiosystems™主要提供广谱性基因及siRNA体外转染试剂、体内转染试剂、生物治疗性蛋白表达专用转染试剂以及150余种细胞特异性转染试剂。
EZBiosystems特约代理EZBiosystems品牌名称：EZBiosystemsEZBiosystems品牌logo：EZBiosystems品牌官网：http://ezbiosystems.com/EZBiosystems品牌链接：http://www.annoron.com/brand-342.htmlEZBiosystems品牌介绍：EZ生物系统™是一家全球性的基因转染和基因表达产品和服务提供商。EZBiosystems™isaworldwideprovideroftransfectionandgeneexpressionproducts&services.OneofthemajorfocusesofEZBiosystems™hasbeentheresearch,development,andmanufactureofnext-generationtransfectionreagents----theAvalanche®TransfectionReagentseriesbyapplyingourexpertiseincombinatorialchemistry,molecularBIOLOGy,andcellbiology. EZBiosystems品牌相关产品：品牌货号名称规格EZ BiosystemsEZT-CRPR-1Avalanche®-CRISPR Transfection Reagent0.5ml 1.5mlEZ BiosystemsEZT-OMNI-1Avalanche®-Omni Transfection Reagent0.75ml 1.5ml5*1.5mlEZ BiosystemsEZT-EVDY-1Avalanche®-Everyday Transfection Reagent0.75ml 1.5ml
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考马斯亮兰染液也可以重复用。新配的染液10分钟即可，重复3次后要染30分钟。
一抗二抗可以重复利用,但是注意要在5%milk中加入0.2% sodium azide ,并且用完以后放入4度保存,我的经验重复使用4-5次是肯定没有问题的.如果保存不当,就会污染微生物,只能丢弃.
原理简介：
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐，低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
注意事项：
◆ 第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有混杂有微量RNA残留， 这时可在溶液P1中补加RNase A即可。
◆ 第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入45ml无水乙醇，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
◆ 温度低时溶液P2中SDS可能会出现浑浊或者析出沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
◆ 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
试剂盒特点：
◆ 产量高---一次提取高达30ug以上的质粒。
◆ 纯度高---OD260/OD280一般为1.80~1.85本试剂盒提取的质粒纯度好，能充分保证测序所需要的读长(用于ABI3730测序一般可达1000bp有效读长)。
◆ 快速，方便，不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
提示
BIOTEKE的质粒提取试剂盒既适用于革兰氏阴性菌中质粒的提取，同时也可从革兰氏阳性菌中提取质粒。由于革兰氏阳性菌外被一层较厚的细胞壁，会严重阻碍细菌细胞的裂解，因此必须在裂解细胞前破除，方法如下：
收集适量的菌体，加入250ul溶液P2，充分悬浮菌液，加入溶菌酶使其终浓度在10-20mg/ml左右在37℃处理30分钟左右。加入溶菌酶的浓度和处理的时间可根据不同的菌主和具体实验条件进行调整。
1. 使用预染 Marker，不过分子量不是特别准；
2. 所使用的 Marker 条带与待测蛋白质带有相同的抗原表位，比如都带有 His 融合标签；
3. 可以使用普通的 Marker 转膜使用 丽春红 等染色，然后在膜上标记出 Marker 各条带的位置。
