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CRISPR/Cas9 and other gene editing tools have been successfully used for obtaining knockout mutations, but knockin mutations have proven to be much harder to introduce. A major challenge has been the production and delivery of the repair template along with the Cas9-sgRNA ribonucleoprotein complex.
CRISPR/Cas9 and other gene editing tools have been successfully used for obtaining knockout mutations, but knockin mutations have proven to be much harder to introduce. A major challenge has been the production and delivery of the repair template along with the Cas9-sgRNA ribonucleoprotein complex.
Although single-stranded DNA (ssDNA) repair templates have recently been shown to have several advantages over double-stranded DNA (dsDNA) templates, the usefulness of long ssDNA templates is limited due to the difficulty and cost of producing them. The Guide-it Long ssDNA Strandase Kit is designed to produce a long ssDNA oligo of up to 5 kb in length for use as a repair template in knockin experiments using CRISPR/Cas9 or other gene editing tools. This kit provides a simple method for converting a dsDNA PCR product into ssDNA by selectively digesting either the sense or the antisense strand. The kit contains sufficient reagents to create 50 ssDNA strands (25 pairs of sense and antisense strands).
Benefits of using ssDNA as a template over dsDNA:
- Drastically reduced tendency to randomly integrate into the genome, resulting in an improved gene editing efficiency
- Low cytotoxic response to ssDNA template delivery
- No expression from nonintegrated templates, making identification of correctly edited clones significantly easier
- NOTE: The Guide-it Long ssDNA Production System includes a NucleoSpin Gel and PCR Clean-up kit to purify the strandase reaction before using it for gene editing
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-08-31
新乡智宝生物科技有限公司在发布的m-mlv反转录酶供应信息，浏览与m-mlv反转录酶相关的产品或在搜索更多与m-mlv反转录酶相关的内容。 查看更多
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2021-09-15
众所周知，外科手术切除是早期单个原发性非小细胞肺癌（NSCLC）的首选治疗方案。饶是如此，术后患者仍有 30% 发生远处转移或局部复发。之前许多文献表明，术中肿瘤细胞的脱落可能是复发潜在因素之一。所以，部分研究者对定量检测肿瘤细胞在术中脱落或转移颇感兴趣。据某些文献报道显示，检测脱落的肿瘤细胞主要手段有细胞形态学检查、免疫组化染色或直接用反转录 查看更多
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2021-09-11
随着生物技术的发展，肿瘤临床的早期诊断、鉴别诊断、有效观察及预后监测越来越受益于肿瘤分子标志物的发现及其检测方法的完善。肿瘤患者外周血循环核酸分子的检测成为研究者关注的热点。已有研究证实肿瘤患者外周血循环 DNA 具有和恶性肿瘤相关的分子生物学特征，可作为敏感高效的肿瘤分子标志物。近期文献发现外周血循环 RNA 也存在同样的变化，检测这些来自 查看更多
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2021-08-25
北京索宝生物科技有限公司在发布的 反转录酶AMV 供应信息，浏览与 反转录酶AMV 相关的产品或在搜索更多与 反转录酶AMV 相关的内容。 查看更多
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2021-09-04
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3'端的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多
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2021-08-27
本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多
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2021-09-01
北京赛百盛基因技术有限公司在发布的M-MLV反转录酶供应信息，浏览与M-MLV反转录酶相关的产品或在搜索更多与M-MLV反转录酶相关的内容。 查看更多
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2021-09-12
技术文章AMV和M-MuLV在应用上的区别更多逆转录酶文章请点击：http://www.e1617.com/nizhuanlumei-2191/... 查看更多
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2021-09-14
2013 年 12 月，中国报道了首例人感染 H10N8 甲型禽流感病毒死亡病例，患者为一名 73 岁女性，临床诊断为重症肺炎，并伴有高血压、心脏病、重症肌无力等基础性疾病，免疫水平低下，有活禽市场暴露史。患者住院 9 天后因呼吸衰竭、休克死亡，所有密切接触者未出现异常。 从该例患者体内分离出的 H10N8 型禽流感病毒亚型通常见于迁徙性鸟类以及活禽市场，虽然尚未肯定人 查看更多
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2021-09-16
根据吉利德年度报表显示，吉利德有 7 种在售的艾滋病药物，品牌名分别为：Atripla、Truvada、Viread、Complera、Vitekta、Tybost、Stribild。预计在接下来的 5 年内，吉利德艾滋病药物将继续雄霸艾滋病医药市场，到 2020 年在年度报表中公布的在售艾滋病药物市场份额达逼近 100 亿美元。1. 四丸合一药物 Stribild 吉利德的 Stribild 在 2012 年 8 月 27 日获得美国 FDA 批准上市，由替诺福韦酯（T 查看更多
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北京百泰克生物技术有限公司在发布的Thermo M-MLV 反转录酶供应信息，浏览与Thermo M-MLV 反转录酶相关的产品或在搜索更多与Thermo M-MLV 反转录酶相关的内容。 查看更多
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2021-09-10
近日，来自德国海德堡 (Heidelberg) 欧洲分子生物学实验室 (EMBL) 的科研人员首次揭开了包被反转录病毒遗传物质的外壳的精细结构，比如 HIV，当这些反转录病毒复制成很多拷贝，大量组装过程中这种外壳结构显得尤为关键，且在病毒的整个生命周期当中，也是一个潜在的易感阶段。研究成果在线发表于《自然》杂志(Nature)，该项研究也为潜在的以病毒外壳为靶点的药物研发提 查看更多
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美国GRAYMILLS 美国GRAYMILLS公司 名企库品牌认证123
琉璃゛2272021-07-29
RNA聚合酶分三类。
RNA聚合酶Ⅰ存在于核仁中，转录rRNA顺序。RNA聚合酶Ⅱ存在于核质中，转录大多数基因，需要“TATA”框。RNA聚合酶Ⅲ存在于核质中，转录很少 RNA聚合酶几种基因如tRNA基因如5SrRNA基因。有些重复顺序如Alu顺序可能也由这种酶转录。
RNA聚合酶Ⅰ存在于核仁中，转录rRNA顺序。RNA聚合酶Ⅱ存在于核质中，转录大多数基因，需要“TATA”框。RNA聚合酶Ⅲ存在于核质中，转录很少 RNA聚合酶几种基因如tRNA基因如5SrRNA基因。有些重复顺序如Alu顺序可能也由这种酶转录。
【求助】大片段DNA(6.4K)与载体连接所需的载体,反转录酶,PCR聚合...123
weile_02021-08-05
各位大侠：小弟最近做个长片段的CDNA与T载体的连接，片段大小6.4K，载体选用的是pUC19和pGEMT-easy,反转录酶用的是RevertAidTirstStrandcDNASynthesisKit(#K1621)，CDNA第二链的扩增用的是LATaq。我是用纯病毒的RNA做模板，操作步骤严格按照说明做的，也曾经有一次获得过电泳图清晰显示的是全长6.4KB左右的片段，与载体连接，结果筛选到的几个克隆，插入的片段仅有2KB左右，奈何？可最近几次再用此反转录试剂盒却不能得到所需片段。在此，小弟想问问大家，你们是否遇到同样的问题，是如何解决的？所用的试剂（载体和酶的选择）和方法是什么，可以告诉后来者，共同进步吧。
反转录酶MMLV使用说明(Promega)【吧】 123
wsuyio2021-08-13
反转录酶的注意事项123
灰太狼咳卫2352021-08-01
反转录酶
在进行RT反应之前，应考虑以下几个方面：
1、RNA
成功的cDNA合成来自高质量的RNA，高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中，要特别防止RNase的污染，同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中，在缓冲液和还原剂（如DTT）存在的条件下加入，因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA，B，C对RNA的降解，并不能防止皮肤上的RNase，因此尽管使用了这些抑制剂，也要小心不要从手指上引入RNase，实验过程中经常更换新手套。
2、引物的选择
OligodT
选择OligodT时，要求RNA必须有PolyA，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，所以对RNA样品的质量要求较高，最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（<500bp）的增加和长片断、全长产物产物的降低。
特异性引物
特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT，引物设计质量影响RT的结果，而且不同引物退火温度本来就不相同，所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择，一般不推荐。向左转|向右转
在进行RT反应之前，应考虑以下几个方面：
1、RNA
成功的cDNA合成来自高质量的RNA，高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中，要特别防止RNase的污染，同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中，在缓冲液和还原剂（如DTT）存在的条件下加入，因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA，B，C对RNA的降解，并不能防止皮肤上的RNase，因此尽管使用了这些抑制剂，也要小心不要从手指上引入RNase，实验过程中经常更换新手套。
2、引物的选择
OligodT
选择OligodT时，要求RNA必须有PolyA，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，所以对RNA样品的质量要求较高，最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（<500bp）的增加和长片断、全长产物产物的降低。
特异性引物
特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT，引物设计质量影响RT的结果，而且不同引物退火温度本来就不相同，所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择，一般不推荐。向左转|向右转
端粒酶(TERC)和端粒逆转录酶(TERT)有什么区别?123
为杰沉沦_楚2018-04-03
TERC是端粒酶RNA基因，编码端粒酶RNA
TERT是端粒酶逆转录酶
人的端粒酶是由端粒酶逆转录酶、端粒酶RNA和一种假尿嘧啶合成酶组成
TERT是端粒酶逆转录酶
人的端粒酶是由端粒酶逆转录酶、端粒酶RNA和一种假尿嘧啶合成酶组成
【求助】如何保证得到的cDNA片段中没有反转录酶引起的突变存在?...123
kingoldfive2021-07-27
反转录时所需的酶是反转录酶,那不需要DNA聚合酶吗123
东林加油0363352018-04-05
RT-nPCR实际叫做反转录-巢式PCR，反转录PCR就是把RNA提取后反转录成cDNA，并以其为模板进行的PCR反应，通常用于检测某种RNA是否被表达，或者比较其相对表达水平巢式PCR（nested PCR），是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。所以反转录-巢式PCR就是以cDNA为模板进行的巢式PCR，它和简单的反转录PCR一样是用于检测某种RNA是否被表达，或者比较其相对表达水平，但是特异性更高，可靠性更强。
反转录酶 123
内心很纠结742018-04-03
由它催化转录合成的DNA称为互补DNA(cDNA)。通常情况下，细胞内的转录应由DNA到RNA的，所得RNA为信使RNA（mRNA）供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中，要实现自身扩增，必须具有DNA，因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。逆转录酶可用RT—PCR，将RNA转变为DNA后扩增，以获得RNA的序列。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶，并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质绝对化，遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究，已成为研究这些学科的有力工具。向左转|向右转
INTERNATIONAL SERVICE OIL :: Καλώς ήρθατε123
MLIUGLDA83G2018-03-28
那你做表达量的时候就不准了啊 不加DNA酶将原有的DNA消化掉，那么你做RT-PCR这个就没意义了 逆转录得到的cDNA和原有的DNA是一样的序列
TAKARA aran 反转录酶的保质期123
2021-07-26
一般情况下不同产品都谢了EXP有效期的。不同品牌不一样的。
不过。。。。我时常用那种过期一两年的。。。。也能反转出来。只要你保存得当就可以了。一般是-20以下保存。
不过。。。。我时常用那种过期一两年的。。。。也能反转出来。只要你保存得当就可以了。一般是-20以下保存。
反转录酶为什么以trna为引物123
2021-08-07
此酶需要RNA为引物，多为色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高[1]。
RNA反转录 分子生物 综合其他论坛学术科研互动平台123
2018-02-28
底物应该指的是dNTP吧，以RNA为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA。
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