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biopioneerinc
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Prsterilized 2x YT broth medium, 500ml

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本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多>
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    之一 具有高扩增活性,高热稳定性的反转录酶  反转录酶,又称逆转录酶,是依赖RNA为模板的DNA聚合酶的统称。美国科学家H.M.Temin和D.Baltimore在1970年发现了反转录酶,并因此获得了1975年的诺贝尔生理学医学奖。反转录酶的发现对遗传工程技术起来到了巨大的推动作用,是研究真核或者原核生物目的基因,构建cDNA文库等实验不可或缺的工具,与Taq酶等共同构成了现代生物技术的的基础工具酶。        目前已... 查看更多>
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随着生物技术的发展,肿瘤临床的早期诊断、鉴别诊断、有效观察及预后监测越来越受益于肿瘤分子标志物的发现及其检测方法的完善。肿瘤患者外周血循环核酸分子的检测成为研究者关注的热点。已有研究证实肿瘤患者外周血循环 DNA 具有和恶性肿瘤相关的分子生物学特征,可作为敏感高效的肿瘤分子标志物。近期文献发现外周血循环 RNA 也存在同样的变化,检测这些来自 查看更多>
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在DNA重组中,催化形成重组DNA分子的酶是 A.拓扑异构酶 B.DNA连接酶 C.解链酶 D.DNA聚合酶 E.反转录酶 请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!... 查看更多>
根据吉利德年度报表显示,吉利德有 7 种在售的艾滋病药物,品牌名分别为:Atripla、Truvada、Viread、Complera、Vitekta、Tybost、Stribild。预计在接下来的 5 年内,吉利德艾滋病药物将继续雄霸艾滋病医药市场,到 2020 年在年度报表中公布的在售艾滋病药物市场份额达逼近 100 亿美元。1. 四丸合一药物 Stribild 吉利德的 Stribild 在 2012 年 8 月 27 日获得美国 FDA 批准上市,由替诺福韦酯(T 查看更多>
E.片段之间有待连接封口 请帮忙给出正确答案和分析,谢谢! 点击查看答案4 大肠杆菌RNA聚合酶全酶由___因子和核心酶___所组成。 请帮忙给出正确答案和分... 查看更多>
基因工程的关键技术是脱氧核糖核酸的连接和重组,在此过程中一些酶起着至关重要的作用,这些酶统称为基因工程工具酶。工具酶种类繁多、功能各异,主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类。其中,以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。这些酶具有特异... 查看更多>
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反转录酶的注意事项123
灰太狼咳卫2352021-08-01
反转录酶
在进行RT反应之前,应考虑以下几个方面:
1、RNA
成功的cDNA合成来自高质量的RNA,高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中,要特别防止RNase的污染,同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA,B,C对RNA的降解,并不能防止皮肤上的RNase,因此尽管使用了这些抑制剂,也要小心不要从手指上引入RNase,实验过程中经常更换新手套。
2、引物的选择
OligodT
选择OligodT时,要求RNA必须有PolyA,所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT,所以对RNA样品的质量要求较高,最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应,建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
随机引物
适合各种RNA的RT,尤其适合模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。选择随机引物时,第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板,然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系,一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。
特异性引物
特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT,引物设计质量影响RT的结果,而且不同引物退火温度本来就不相同,所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择,一般不推荐。向左转|向右转
TERC是端粒酶RNA基因,编码端粒酶RNA
TERT是端粒酶逆转录酶
人的端粒酶是由端粒酶逆转录酶、端粒酶RNA和一种假尿嘧啶合成酶组成
我提取的RNA反转录,用的是0ligdT为引物,但是我能用反转录为模板扩出18S的rRNA来。我查了下反转录需要引物,我用的引物是0ligdT,本来只能反转录mRNA的啊,拿扩18S rRNA中间片断的引物不应该能从我的反转录产物中扩出18S中间片断来啊?
反转录酶一方面能够把具有引物的RNA逆转录成DNA,同时还具有RNaseH的活性,能够把DNA-RNA杂合链中的RNA水解。因为具备两种功能,所以称之为多功能酶。
人体内有没有逆转录酶? 123
具区胜境2010-07-15
最近做了RT-realtimePCR。样品如下:1,阳性对照;2,不加RT酶,加模板;3,不加RT酶和模板,做RT-PCR后,再做realtimePCR(Taqman)。realtime的样品除以上3个RT产物,另加一个无RT产物的对照,共4个样品。结果所有的样品都跑出了CT值……请问可能是什么原因?
一名两句也说不清楚,请到图书馆或新华书店去查遗传方面的书.我是生物系的.
人工合成基因的方法主要有两条途径:一是以目的基因转录成的mRNA为模板,逆转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需要的基因;二是根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的 mRNA序列,然后按碱基互补配对原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过化学的方法,以单核苷酸为原料合成目的基因。
逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。是RNA病毒的复制形式,需逆转录酶的催化。艾滋病病毒(HIV)就是一种典型的逆转录病毒。
逆转录与反转录严格意义上来说没有什么区别,但是逆转录是RNA类病毒自主行为,在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程;反转录是进行基因工程过程中,人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA,并以之为模板人工合成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程,但地点不同,相对性的来说,逆转录在体内,反转录在体外。
本想买一个SMARTRACECDNAAmplificationKit想做一个基因的全长cDNA,公司告知这个KIT里面的PowerScriptReverseTranscriptase已经停止生产了:(,想问一下各位现在该如何做RACE呢?还有没有可以替代PowerScriptReverseTranscriptase这个酶的产品可以用:?)?谢谢!
如题

反转录酶没有3-5外切活性,其保真度怎么保证呢?

大家做表达的时候,获取长CDNA片段怎么保证的呢?

我获得的2.5kb的片段,其中sequencing后发现有8个错突变,狂ft

高保真的KOD-PLUS扩增的,按道理说,PCR没这么夸张吧

请大家指点啊
好多酶的试剂说明书上都要求反应结束后灭活,如fermentas的MLV就是写着,反应结束后70度10分钟灭活,如果反转完了没有这个灭活,直接放冰箱中储存备用,会怎么样?影响后面PCR的扩增吗?
此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高[1]。
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