| MolecularWeight: | 334.33 |
| Formula: | C19H14N2O4 |
| Purity: | ≥98% |
| CAS#: | 48208-26-0 |
| Solubility: | DMSOupto100mM |
| ChemicalName: | (S)-2-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-3-(1H-indol-3-yl)propanoicacid |
| Storage: | Powder:4oC1year.DMSO:4oC3month;-20oC1year. |
BIOLOGicalActivity:
RG108isapotent,selectiveandcellpermeableinhibitorofDNAmethyltransferase.Unlike5-azaC,RG108isnotanucleosideandthereforedoesnotmodifyDNA.ItbindstotheenzymeactivesiteandinhibitsDNMTenzymaticactivitywithanIC50~115nM.ItinhibitsDNAmethylationinhumancancercelllinesinvitrowithoutdetectabletoxicity.TreatmentwithRG108resultsinthedemethylationofgenomicDNAandcanreactivateepigeneticallysilencedtumorsuppressorgenes.Ithasbeenshowntoimprovethereprogrammingefficiencyofmouseembryonicfibroblasts(MEFs)intoinducedpluripotentstem(iPS)cells.RG108canpotentiallybeusedtomaintainembryonicstem(ES)cellsinanundifferentiatedstateaswellasreplacetranscriptionfactorsinbothmouseandhumancellreprogramming.
HowtoUse:
- Invitro:RG108wasusedat10-100µMfinalconcentrationinvariousinvitroassays.
- Invivo:n/a
Reference:
- 1.BruecknerB,etal.Epigeneticreactivationoftumorsuppressorgenesbyanovelsmall-moleculeinhibitorofhumanDNAmethyltransferases.(2005)CancerRes.65(14):6305-11.
- 2.StresemannC,etal.FunctionaldiversityofDNAmethyltransferaseinhibitorsinhumancancercelllines.(2006)CancerRes.66(5):2794-800.
- 3.SchirrmacherE,etal.SynthesisandinvitroevaluationofbiotinylatedRG108:ahighaffinitycompoundforstudyingbindinginteractionswithhumanDNAmethyltransferases.(2006)BioconjugChem.17(2):261-6.
- 4.ShiY,etal.InductionofpluripotentstemcellsfrommouseembryonicfibroblastsbyOct4andKlf4withsmall-moleculecompounds.(2008)CellStemCell.3(5):568-74.
- 5.PashaZ,etal.Efficientnon-viralreprogrammingofmyoblaststostemnesswithasinglesmallmoleculetogeneratecardiacProgenitorcells.(2011)PLoSOne.6(8):e23667.
RG108_spec.pdf
RG108_MSDS.pdf
Productsareforresearchuseonly.Notforhumanuse.
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RNA聚合酶Ⅰ存在于核仁中,转录rRNA顺序。RNA聚合酶Ⅱ存在于核质中,转录大多数基因,需要“TATA”框。RNA聚合酶Ⅲ存在于核质中,转录很少 RNA聚合酶几种基因如tRNA基因如5SrRNA基因。有些重复顺序如Alu顺序可能也由这种酶转录。
各位大侠:小弟最近做个长片段的CDNA与T载体的连接,片段大小6.4K,载体选用的是pUC19和pGEMT-easy,反转录酶用的是RevertAidTirstStrandcDNASynthesisKit(#K1621),CDNA第二链的扩增用的是LATaq。我是用纯病毒的RNA做模板,操作步骤严格按照说明做的,也曾经有一次获得过电泳图清晰显示的是全长6.4KB左右的片段,与载体连接,结果筛选到的几个克隆,插入的片段仅有2KB左右,奈何?可最近几次再用此反转录试剂盒却不能得到所需片段。在此,小弟想问问大家,你们是否遇到同样的问题,是如何解决的?所用的试剂(载体和酶的选择)和方法是什么,可以告诉后来者,共同进步吧。
在进行RT反应之前,应考虑以下几个方面:
1、RNA
成功的cDNA合成来自高质量的RNA,高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中,要特别防止RNase的污染,同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA,B,C对RNA的降解,并不能防止皮肤上的RNase,因此尽管使用了这些抑制剂,也要小心不要从手指上引入RNase,实验过程中经常更换新手套。
2、引物的选择
OligodT
选择OligodT时,要求RNA必须有PolyA,所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT,所以对RNA样品的质量要求较高,最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应,建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
随机引物
适合各种RNA的RT,尤其适合模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。选择随机引物时,第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板,然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系,一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。
特异性引物
特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT,引物设计质量影响RT的结果,而且不同引物退火温度本来就不相同,所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择,一般不推荐。向左转|向右转
TERT是端粒酶逆转录酶
人的端粒酶是由端粒酶逆转录酶、端粒酶RNA和一种假尿嘧啶合成酶组成
不过。。。。我时常用那种过期一两年的。。。。也能反转出来。只要你保存得当就可以了。一般是-20以下保存。

