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Biomatik—供应生物试剂、免疫、基因、多肽/蛋白、抗体 Biomatik公司成立于2002年,致力于为全球科研工作者供应高质量的分子生物学、免疫学、药物研发等领域产品及服务。供应的产品囊括生物试剂,重组蛋白,ELISA试剂盒,定制基因、多肽及抗体等产品。此外,我们还提供完善的生物制品定制服务,包括基因、多肽/蛋白及抗体等。为研究人员提供zui优的产品和服务是我们赖以成功的保证,因此我们确保我们的产品与服务具有百分百的满意度保证。 Biomatik公司主要产品: 一、生物试剂系列产品:该系列产品含有360多款实验室常用的生化、酶类及PCR试剂,多款产品有不同的纯化级别(Biotechnology、 High Purity、 Ultra Pure、 Certifiable 、ACS 、USP等),这些产品备有存货,可尽快发货到实验室。 二、免疫检测产品系列:(ELISA /CLIA试剂盒):该产品系列包括7200多款ELISA /CLIA试剂盒,5300多款重组蛋白产品。 三、定制化合成基因:Biomatik在化学合成基因上有着丰富的经验,特别在长复杂基因合成上,可保证在zui短的时间内完成100%精确度的基因合成。 四、定制化多肽合成:Biomatik是高质量多肽合成领域中的佼佼者,所提供的合成产品纯度可从粗提至99%以上纯度(依据客户需要),合成量可从毫克到千克级。 五、定制化重组蛋白产品:Biomatik提供E.coli源重组蛋白产品,优质低价。未得到所要求蛋白全额退款。 六、定制抗体产品:Biomatik在定制抗体上执行着严酷的质量标准,所提供的单/多克隆产品定制服务可在两月内完成。
Biomatik公司于2002年在加拿大成立,是生物试剂一站式购物中心,提供7000多种ELISA试剂盒,5300多种重组蛋白,350多种生物试剂。 特色产品包括定制基因和多肽、以及PCR产品和酶。特色生化试剂包括三羟甲基氨基甲烷(Tris)、琼脂糖、白蛋白、核糖核酸酶A(RNase A0)\蛋白酶 A 和溶菌酶、半乳糖苷等。﹙网址:http://www.biomatik.com ) 日前,毕特博生物公司已成功取得Biomatik的授权和代理,Biomatik的各大产品均可在我司查询订购。 加拿大Biomatik成立于2002年,公司创建伊始就以为全世界的生命科学和药物研发工作者提供高质量的科研用品和服务为奋斗目标。 产品涵盖生化试剂、重组蛋白、ELISA试剂盒、基因定制和多肽合成及蛋白及抗体的定制生产等。 公司之所以能成功,因为我们始终把您的科研需要摆在第一位,为您独一无二的研究项目提供完美的产品和服务。 我们的长远目标是成为您科研道路上中可靠的合作伙伴。 Biomatik为您提供工业领先的创新产品和高效的客户服务。 公司在为您提供高质量的产品,满足您科研需要的同时,也为您节省研究经费,努力创造双赢的局面。 这为我们在业内带来持续不断的竞争力,成长和品牌认可,也是我们所推崇的高质量产品服务带来的回报。
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1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
目前,我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子,5%BSA37度封闭二小时后,洗涤四次后将板子分三个组加入抗原:其中一个组中加入的是我重组的蛋白,另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清,最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性,其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高,两组都可以达到1.8以上,而加入的抗原为人体血清组低,为0.6-1.0不等。
后面我优化条件,封闭液用过5%的脱脂奶粉,2%的BSA,包被的单抗浓度摸了梯度,加入的多抗也摸了梯度,酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变,连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性?
请教各位高手,我的ELISA该如何往下面做了啊,是不是我的抗体本身有问题呢?
对了,我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的,很纯,在考染中是看不到一条杂带的。
1. 包被:用0.05M PH9,碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml,在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二:用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30~60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
我现在用商品化的试剂盒进行夹心法ELISA测定某抗体的浓度,盒子给定了4个标准品,标准品抗体浓度为70000~1000单位,测定步骤中要求对样品进行1:1000稀释后测定。
但是有的样本按照1:1000稀释后,最终OD值大于70000浓度的标准品的OD值,然后使用ELISACALC软件进行四参数拟合,超过了标准曲线的范围,就算不出来这个样品的浓度,但是如果在1000-70000之间的OD值就可以算出相应浓度。请教大神们,接下来我是否可以对样品进行1:2000,1:4000浓度稀释,算出结果后再×2、×4,算作此样品的浓度呢?还是直接给一个>70000的定性结果?或者可以有能算出来的其他软件?
Ps试剂盒中提及Dilutionlinearity(稀释线性?)为141%,这个是什么意思呢?
多谢!!
大家好,我在做双抗夹心法的elisa实验,已经花了20来天了,然而标准曲线的线性一直做不好,而且不稳定。下面我把具体的实验过程说下,希望大家能给我提个建议,谢谢!
首先我从以下数据中确定了标准品的起始稀释浓度:4.64,46.4,464,4640IU/ml对应的OD为0.55,1.178,1.086,1.168.因此我取46.4IU/ml(300ng/ml)作为标品的起始稀释浓度。然后作了关于单抗,多抗,二抗的合适稀释度的实验,我的数据如下:
123456789
空白0.2290.1920.2120.1540.1390.1730.2360.1770.257
46.4iu/ml1.2421.5271.2691.9641.6281.9592.0051.8802.163
9.28iu/ml0.9680.9501.0131.1360.8731.2461.6971.5861.769
阴性0.1920.1760.2500.1310.1610.1540.1990.2190.244
选取了7号组合单抗,多抗,二抗分别为1ug/ml,1ug/ml,0.5ug/ml。
标品按照以下梯度稀释:46.423.211.65.82.91.450.725iu/ml.以下是我近来做的三组数据,都是相对空白的相对值:
123
46.4iu/ml0.6130.5860.851
23.20.5240.6490.765
11.60.3820.510.663
5.80.3160.3850.567
2.90.2880.3190.37
1.450.2890.1340.303
0.7250.1210.1460.113
空白0.0820.0870.101
阴性0.0820.1050.101
似乎梯度都不明显。我现在疑惑的是我的标品浓度的设置有问题还是之前抗体的浓度选择不合适,请大家多指点,万分感谢!!!