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2021-08-20
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反转录是用随机引物比如Random 9 mers,得到cDNA;再用5’引物和3’特异性引物进行PCR得到5’端的的片段
generacer64 rlmrace kit多少钱 123
红妆对镜残3232021-07-22
说明书应该很好懂啊,实在不行你给他们公司去邮件要中文说明书,一般是会给的
RACE技术怎么理解?123
骚哥mFE06U2021-07-28
RACE是获得cDNA的全长,而TAIL-PCR则是扩增已知片段的未知旁侧序列。前者用于获得全长cDNA,后者用于确定某一片段的位置,比如T-DNA插入突变体中T-DNA的插入位置。
我准备做3‘和5‘RACE,请问哪个公司的试剂盒比较好用?操作是不是完全按照说明书进行?请做过这方面试验的师哥、师姐们谈谈经验。小妹才疏学浅,请大家帮帮忙!
请问该试剂盒的使用比较其他试剂盒如何?设计的基因特异性引物要多长,说明书规定的是20-25,是越长越好吗?我只设了20bp,不知能不能行(长了,引物效率差)?设计引物有什么其它要注意的,除了说明书说的以外?做的过程中应注意什么?由于过程复杂,花费人民币5000多,不敢轻易动,希望有用过的和有经验的朋友说一下你们的经验.
发si的轻音
请采纳。。。。
按照试剂盒的说明书要求进行设计。要求特异性比较强。
基因做表达实验必须要克隆全长
步骤:1,RNA抽提(同RT)
2,逆转录,使用合成的oligo
3,p内参
4,使用根据已知序列设计的上游引物和提供下游引物做PCR,注意设计上游引物是退火温度与下游引物相差不大。
5,产物切胶回收,TA克隆测序

这个oligo和下游引物是我根据Takara和BD公司的manual自己设计的,经过我的使用效果很好。具体操作参照takara的3-racemanual。你先做3-race,了解熟悉下,成功后再做5-race。5-race要买试剂盒做,较为复杂!
我最近做race,用的是clonetechsmarterRACE试剂盒,但是再设计引物的时候,很难找到Tm》65,GC:50~70%的引物,一般来说Tm值可以通过增加引物长度得到满足,但是GC一般都很低都是40左右,这样的引物弄够做吗?
还有就是我准备做nestedPCR,试剂盒中提供了一个NUP(不知道试剂盒中提供的那个controlReagent序列是NUP的吗?),但是好像没有序列,那我在设计NGSP的时候不需要考虑试剂盒引物跟NGSP的二聚体或者二级结构吗?
谢谢~~
反转录酶和其他东西都可以单买就是引物不行,问各位大侠个问题是不是这个区域就是Oligodt18加OuterPCR引物的互补序列呢?自己合成可以么?效果如何,谢谢
我用Takara的小量试剂盒提质粒,但提出的量很少,导致酶切效果不好,加菌液的量1、1.5、3、4.5、6ml都试过了,都不行,加入SolutionII后不是特别透明,老是有点浑浊,打电话问客服,说是摇菌的问题,但我试过OD值小一些的菌液,也不行,希望能尽快找到原因,...
可以自己合UPM和NUP,只买phusion酶就行
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