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【求助】clonetech smarter RACE试剂盒相关问题,请教各位前辈
2010-07-19
问题描述:

我最近做race,用的是clonetechsmarterRACE试剂盒,但是再设计引物的时候,很难找到Tm》65,GC:50~70%的引物,一般来说Tm值可以通过增加引物长度得到满足,但是GC一般都很低都是40左右,这样的引物弄够做吗?
还有就是我准备做nestedPCR,试剂盒中提供了一个NUP(不知道试剂盒中提供的那个controlReagent序列是NUP的吗?),但是好像没有序列,那我在设计NGSP的时候不需要考虑试剂盒引物跟NGSP的二聚体或者二级结构吗?
谢谢~~

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mjd99sy
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有前辈做过吗,提点下~~万分感谢·~
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weizi8848
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我觉得可以在5端修改几个碱基来提高GC%
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gemaizhe
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Tm值低点式可以做的但GC含量低了就不行了。你仔细看看说明书,ShortUPM+NUP=LongUPM做巢式时,我是自己设计的引物,没有用到试剂盒给的nup。当然设计的时候还是要注意一些引物设计的基本要求的,网上又不少这方面的东西,你可以自己看看。当然,没有十全十美的引物,试试多设计几个,找出实验结果不错的那个就行。
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mjd99sy
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谢谢前辈指点·~受益匪浅,呵呵~~
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brobob
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求助啊..................
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brobob
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求助啊
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lgy63
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用水饱和酚。通常RNA用水饱和酚,DNA用Tris饱和酚。
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wind0210
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多谢红藻之吻!!您讲我设计的引物退火温度最好在55-60之间,就是说试剂盒中的innerprimer退火温度是存在很灵活的范围的?
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