相关申请的交叉引用

依据美国法典第35篇第119(e)条的规定，本申请要求在2010年7 月27日提交的第61/368,042号美国专利申请的权益，其内容通过引用的方式 全文并入本申请中。

技术领域

本发明广泛地涉及调节AhR活性的组合物和方法。

政府支持

本发明依据美国国立卫生研究院(NIH)的编号为ES011624和 CA134882的合同，在政府支持之下完成。政府对本发明享有一定的权利。

背景技术：

癌症仍然是对人类健康的最致命的威胁之一。在美国，每年新增 癌症患者接近130万人，癌症是仅次于在心脏病的第二大死亡原因，癌症致 死约占死亡总数的1/4。此外，据预测在未来的10年内，癌症可能会超过心 血管疾病成为死亡的头号原因。这些死亡多数是由实体瘤导致的。虽然在某 些癌症的医学治疗方面已经有显著的进步，但是在过去的20年里，所有癌症 的总的5-年生存率仅提高了约10％。癌症，或恶性肿瘤，以不受控制方式的 转移和快速生长，使得及时发现与治疗极其困难。

在美国，乳腺癌年龄调整的发病率在1940年至1990年之间每年 增长～1％(27,28)，且在1987年至2002年之间每年增长0.4％(29)，在某种程 度上是因为对环境致癌物的接触增加了。现在，乳腺癌是女性中最常见的第 二大癌症(仅次于皮肤癌)，美国每年有225,000例新增病例和40,000例乳 腺癌-相关的死亡病例。据估计今年出生的女性每8人中有1人在她们的一生 中将被诊断患有乳腺癌(34)。诊断患有乳腺癌的女性的总数在未来20年极有 可能显著增加，因为人口结构特征朝着老龄化方向发展(34)。

技术实现要素：

发明概述

本文描述的是调节AhR活性的新型药剂，其用在抑制癌细胞增殖 以及肿瘤细胞侵袭和转移的治疗性组合物及其方法中。这些组合物和方法基 于发明人的以下新发现进行的：包含本文描述的通式(I)和(II)小分子化合物的 药物组合物可以调节AhR活性，诸如组成型AhR活性(constitutive AhR activity)。发明人已发现这样的小分子能够结合至AhR，并阻断或抑制由AhR 调控的那些功能和信号通路，从而影响着癌细胞的生长与增殖以及肿瘤细胞 的侵袭力。发明人已进一步发现包含本文描述的通式(I)和(II)小分子化合物的 药物组合物能够用作AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂(non-constitutive AhR agonists)，并进一步提供新的方法与测定方法用于区分AhR调节剂的类型。 因此，本文提供的是新型的治疗性药物组合物及其方法，它们包含通式(I)和 (II)的AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂，其用于抑制癌细胞生长，并抑制 表征肿瘤转移的参数，诸如肿瘤细胞的侵袭力。

因此，本文描述的是新型的AhR调节剂。在一些方面，本文描述 的是包含通式(I)芳烃受体(AhR)调节剂的药物组合物，以及其药学上可接受的 盐：

其中：

Y是C或N；

X是OR1，NHR1，SR1，CH2(n)R1，卤素，或H；

n是0-6；

Z是O，S，或NH；

R1和R2独立地是H，烷基，链烯基，炔基，氨基，氨基磺酰基，烷氧基， 酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或卤代烷 基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地是不存在，H，卤素，烷基，链烯基，炔基，烷 氧基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或 卤代烷基，其中每一个可被任意取代。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些具体实施方式中， 通式(I)的AhR调节剂是AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂。在一些这样的 实施方式中，AhR抑制剂是CB7993113，具有以下化学结构：

在一些这样的具体实施方式中，非组成型AhR激动剂是 CB7950998，具有以下化学结构：

在一些方面，药物组合物包含通式(Ia)的AhR调节剂，以及其在 药学上可接受的盐：

其中：

X’是H，烷基，氨基磺酰基，烷氧基，氨基，酰基，芳基，或杂芳基， 其中每一个可被任意取代；

n是0-6；

R2是H，烷基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基， 杂环基，或卤代烷基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地是H，烷基，酰基，卤素，芳基，或杂芳基，其 中每一个可被任意取代。

在通式(Ia)的AhR抑制剂的一些实施方式中，

X’是烷基，烷氧基，氨基，或氨基磺酰基；

n是0或1；

R2是芳基，取代的芳基，杂芳基，或取代的芳基；以及

R3，R4，R5和R6独立地是H，烷氧基，烷基，或卤素。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些具体实施方式中， 通式(Ia)的AhR调节剂是AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂。

在其它方面，本文提供的是包含通式(II)化合物的组合物，以及其 立体异构体：

其中，

Y是C或N；

X是OR1，NHR1，SR1，CH2(n)R1，卤素，或H；

n是0-6；

Z是O，S，或NH；

R1和R2独立地是H，烷基，链烯基，炔基，氨基，氨基磺酰基，烷氧基， 酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或卤代烷 基，其中每一个可被任意取代；R3，R4，R5和R6独立地是不存在，H，卤素， 烷基，链烯基，炔基，烷氧基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基， 杂芳基烷基，杂环基，或卤代烷基，其中每一个可被任意取代。

在这些方面的一些实施方式中，位置2的C是R构型，和位置3 的C是S构型。在这些方面的一些实施方式中，位置2的C是S构型，和位 置3的C是R构型。在这些方面的一些实施方式中，位置2的C是R构型， 和位置3的C是R构型。在这些方面的一些实施方式中，位置2的C是S构 型，且位置3的C是S构型。

在这些方面的一些实施方式中，化合物是CMLD-2166，具有以下 化学结构：

在一些方面，本文提供的是包含通式(IIa)化合物的组合物，以及 其立体异构体：

其中：

X’是H，烷基，氨基磺酰基，烷氧基，酰基，芳基，或杂芳基，其中每 一个可被任意取代；

n是0-6；

R2是H，烷基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基， 杂环基，或卤代烷基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地是H，烷基，酰基，卤素，芳基，或杂芳基，其 中每一个可被任意取代。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些实施方式中，

X’是烷基，烷氧基，氨基磺酰基；

n是0或1；

R2是芳基，取代的芳基，杂芳基，或取代的芳基；以及

R3，R4，R5和R6独立地是H，烷氧基，烷基，或卤素。

在一些方面，本文提供的是包含通式(II)芳烃受体(AhR)调节剂的 药物组合物,其的立体异构体，以及它们药学上可接受的盐：

其中，

Y是C或N；

X是OR1，NHR1，SR1，CH2(n)R1，卤素，或H；

n是0-6；

Z是O，S，或NH；

R1和R2独立地是H，烷基，链烯基，炔基，氨基，氨基磺酰基，烷氧基， 酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或卤代烷 基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地是不存在，H，卤素，烷基，链烯基，炔基，烷 氧基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或 卤代烷基，其中每一个可被任意取代。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些实施方式中，它们 的立体异构体包含位于位置2的C是R构型的和位于位置3的C是S构型的。 在该方面的一些实施方式中，其的立体异构体包含位于位置2的C是S构型 的C和位于位置3的C是R构型的。在该方面的一些实施方式中，其的立体 异构体包含位于位置2的C是R构型的和位于位置3的C是R构型的。在该 方面的一些实施方式中，它们的立体异构体包含位于位置2的C是S构型的 和位于位置3的C是S构型的。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些实施方式中，通式 (II)的AhR调节剂是AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂。、

在这些方面的一些实施方式中，通式(II)的AhR调节剂是 CMLD-2166，具有以下化学结构：

CMLD-2166

在一些方面，本文提供的是包含通式(IIa)芳烃受体(AhR)调节剂的 药物组合物，其立体异构体；以及它们药学上可接受的盐：

其中：

X’是H，烷基，氨基磺酰基，烷氧基，酰基，芳基，或杂芳基，其中每 一个可被任意取代；

n是0-6；

R2是H，烷基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基， 杂环基，或卤代烷基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地是H，烷基，酰基，卤素，芳基，或杂芳基，其 中每一个可被任意取代。

在通式(IIa)的AhR调节剂的这些方面的一些实施方式中，

X’是烷基，烷氧基，氨基磺酰基；

n是0或1；

R2是芳基，取代的芳基，杂芳基，或取代的芳基；以及

R3，R4，R5和R6独立地是H，烷氧基，烷基，或卤素。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些实施方式中，通式 (IIa)的AhR调节剂是AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂。

在一些方面，本文描述的是调节有需要的受治疗者的组成型AhR 活性的方法。这样的方法包括向具有组成型AhR活性的受治疗者给予治疗有 效量的包含AhR调节剂的任何药物组合物，其中AhR调节剂诸如是本文描述 的通式(I)，(Ia)，(II)，或(IIa)的AhR抑制剂(例如，CB7993113或CMLD-2166) 或非组成型AhR激动剂(例如，CB7950998)。在本文描述的这些方面和所有 此类方面的一些实施方式中，所述方法进一步包含选择具有组成型AhR活性 的受治疗者的步骤。

在其它方面，本文描述的是通过调节AhR活性来治疗癌症或癌性 病变癌性病变(a cancerous condition)的方法。这样的方法包含向患有癌症或 癌性病变的受治疗者给予治疗有效量的包含AhR调节剂的任何药物组合物， 其中AhR调节剂诸如是本文描述的通式(I)，(Ia)，(II)，或(IIa)的AhR抑制剂(例 如CB7993113或CMLD-2166)或非组成型AhR激动剂(例如CB7950998)。

在一些方面，本文描述的是抑制患有癌症、癌性病变或肿瘤的受治 疗者中肿瘤细胞的侵袭力的方法。这样的方法包含向患有癌症或肿瘤的受治 疗者给药治疗有效量的包含AhR调节剂的任何药物组合物，其中AhR调节剂 诸如是本文描述的通式(I)，(Ia)，(II)，或(IIa)的AhR抑制剂(例如，CB7993113 或CMLD-2166)或非组成型AhR激动剂(例如，CB7950998)。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些实施方式中，所述方 法进一步包含选择患有癌症、癌性病变或肿瘤的受治疗者的步骤。

在这些方法的一些实施方式中，癌症是乳腺癌，鳞状上皮细胞癌， 肺癌，腹膜癌，肝细胞癌，胃癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，子宫颈癌，卵巢 癌，肝癌，膀胱癌，肝细胞瘤，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌， 唾液腺癌，肾癌或肾脏癌(a kidney or renal cancer)，前列腺癌，外阴癌，甲状 腺癌，头颈癌，B-细胞淋巴瘤，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细 胞性白血病(ALL)，毛细胞性白血病，或慢性成髓细胞性白血病(a chronic myeloblastic leukemia)。在一些这样的实施方式中，癌症是乳腺癌。

这些方法的一些实施方式可以进一步包含与一种或多种额外的抗 癌疗法一起给药或治疗。在一些这样的实施方式中，额外的抗癌疗法包含外 科手术，放射疗法，生物疗法，免疫疗法，化学疗法，或任何它们的组合。

这些方法的一些实施方式可以进一步包含与一种或多种抗癌治疗 剂一起给药或治疗。在一些这样的实施方式中，抗癌治疗剂是化学治疗剂， 生长抑制剂，抗血管生成剂，细胞毒素剂，抗激素药剂，前体药物，或细胞 因子。

此外，在其它方面，本文提供的是包含AhR调节剂的药物组合物， 应用于调节有需要的受治疗者的组成型AhR活性，其中AhR调节剂诸如是通 式(I)，(Ia)，(II)，或(IIa)的AhR抑制剂(例如，CB7993113或CMLD-2166)或 非组成型AhR激动剂(例如，CB7950998)。

在一些方面，提供了包含AhR调节剂的药物组合物通过调节AhR 活性应用于治疗癌症或癌性病变，其中AhR调节剂诸如是通式(I)，(Ia)，(II)， 或(IIa)的AhR抑制剂(例如，CB7993113或CMLD-2166)或非组成型AhR激动 剂(例如，CB7950998)。

在一些方面，提供了包含AhR调节剂的药物组合物应用于抑制患 有癌症、癌性病变或肿瘤的受治疗者的肿瘤细胞的侵袭力，其中AhR调节剂 诸如是通式(I)，(Ia)，(II)，或(IIa)的AhR抑制剂(例如CB7993113或CMLD-2166) 或非组成型AhR激动剂(例如CB7950998)。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些实施方式中，所述应 用进一步包含选择患有癌症，癌性病变或肿瘤的受治疗者的步骤。在一些这 样的实施方式中，癌症是乳腺癌，鳞状上皮细胞癌，肺癌，腹膜癌，肝细胞 癌，胃癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，子宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝 细胞瘤，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾 脏癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，头颈癌，B-细胞淋巴瘤，慢性淋巴细 胞性白血病(CLL)；急性淋巴细胞性白血病(ALL)，毛细胞性白血病，或慢性 成髓细胞性白血病。在一些这样的实施方式中，癌症是乳腺癌。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些实施方式中，应用进 一步包含一种或多种额外的抗癌疗法。在一些这样的实施方式中，额外的抗 癌疗法包含外科手术，放射疗法，生物疗法，免疫疗法，或化学疗法。

在本文描述的这些方面和所有此类方面的一些实施方式中，应用进 一步包含一种或多种抗癌治疗剂。在一些这样的实施方式中，抗癌治疗剂是 化学治疗剂，生长抑制剂，抗血管生成剂，细胞毒素剂，抗激素药剂，前体 药物，或细胞因子。

本文描述的其它方面提供了新型的筛选方法，用于鉴别AhR调节 剂，诸如通式(I)，(Ia)，(II)，或(IIa)的AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂。 在一个这样的方面，提供了鉴别AhR调节剂的筛选方法，该方法包含：

a.使如下细胞与强AhR激活剂接触：所述细胞包含编码AhR受体的序 列，而该序列是可操作地连接到编码报道分子的序列上的，这样，通过细胞 中报道分子的表达表明AhR受体被强AhR激活剂激活的

b.使步骤(a)的细胞与受测药剂接触，这样，在受测药剂存在下报道分子 表达的减少表明受测药剂是AhR调节剂；以及

c.在没有强AhR激活剂的情况下，使如下细胞与AhR调节剂接触：所 述细胞包含编码AhR受体的序列，而该序列是可操作地连接到编码报道分子 的序列上的，其中通过细胞对报道分子不表达表明AhR调节剂是AhR抑制 剂，且其中通过细胞对报道分子的表达表明AhR调节剂是AhR部分激动剂。

在本文描述的这个方面和所有此类方面的一些实施方式中，筛选方 法进一步包含使AhR部分激动剂与肿瘤活性检测系统接触，所述肿瘤活性检 测系统包含：(i)肿瘤细胞和(ii)包含一种或多种细胞外基质成分的混合物，其 中AhR部分激动剂对肿瘤活性的抑制表明AhR部分激动剂是非组成型AhR 激动剂，且其中AhR部分激动剂对肿瘤活性的增加表明AhR部分激动剂是组 成型AhR激动剂。

在本文描述的筛选方法的一些实施方式中，报道分子是荧光蛋白， 诸如GFP(绿色荧光蛋白)或RFP(红色荧光蛋白)。在筛选方法的一些实施方 式中，强AhR激活剂是TCDD或BNF。

在筛选方法的一些实施方式中，肿瘤活性检测系统测定的肿瘤活性 是肿瘤细胞增殖或肿瘤细胞侵袭力。在筛选方法的一些实施方式中，肿瘤细 胞是人类乳房肿瘤细胞。在筛选方法的一些实施方式中，包含一种或多种细 胞外基质成分的混合物是基质胶。在一些这样的实施方式中，一种或多种细 胞外基质成分包含层粘连蛋白和胶原蛋白。

定义

为了方便起见，在此我们对说明书、实施例和所附权利要求中的某 些术语进行了汇总。除非另有说明，或上下文中隐含有其含义，下述术语和 短语包括下面提供的含义。除非另有明确说明，或从上下文看是显而易见的， 下面的术语和短语不排除所述术语或短语在其所属领域内已有的含义。定义 被提供以有助于描述特定实施方式，但并不旨在限制本发明，因为本发明的 范围只受权利要求的限制。除非另有限定，本文使用的所有技术与科学术语 与本发明所属领域的技术人员通常理解的具有相同的含义。

如本文所用，术语\"芳烃受体(AhR)调节剂”是指一种药剂，其引起 或促进AhR受体介导的一种或多种过程、机制、效应、响应、功能、活性或 通路中的定性或定量的变化、改变或修饰。AhR调节剂诸如本文描述的AhR 的抑制剂或非组成型激动剂，其所介导的这样的变化可以指AhR的活性或功 能的降低或增加，诸如AhR组成型活性、抑制或转移的降低。

术语\"AhR的抑制剂”或\"AhR抑制剂”是指这样的药剂或化合物：其 抑制一种或多种AhR信号传递和下游效应器通路，包括组成型AhR信号传 递，如那些术语在本文所用。因此，术语AhR抑制剂是指这样的药剂：其抑 制AhR多肽或编码AhR的多核苷酸的表达，或者其结合，部分或全部阻断所 述AhR多肽或编码AhR的多核苷酸的刺激作用，降低、阻止、延迟所述AhR 多肽或多核苷酸的激活作用，失活、脱敏或下调所述AhR多肽或编码AhR 的多核苷酸的活性。这样的AhR抑制剂能够例如抑制AhR表达，例如，AhR 翻译，AhR的翻译后加工，AhR多肽的稳定、降解或者核定位或胞质定位， 或者编码AhR的多核苷酸的转录、转录后加工、稳定或降解，或者结合至， 部分或全部地阻断刺激作用，DNA结合，或者AhR的转录因子活性。AhR 抑制剂能够直接或间接地起作用。

\"AhR拮抗剂”是指AhR抑制剂：该AhR抑制剂在与AhR多肽或 编码AhR的多核苷酸的特异性结合，其本身不会激发生物响应，但是其会阻 断或缓冲激动剂-介导的或配体-介导的响应，即AhR拮抗剂能够结合但并不 激活AhR多肽或编码AhR的多核苷酸，并且结合会干扰其相互作用，取代 AhR激动剂，和/或抑制AhR激动剂的功能。因此，如本文所用，当结合至 AhR时，AhR拮抗剂并没有起到AhR活性诱导物的作用，即它们起的是纯 AhR抑制剂的作用。

如本文所用，术语\"AhR的非组成型激动剂”，\"非组成型AhR激动 剂”，\"AhR的非组成型激活剂”，或\"非组成型AhR激活剂”是指药剂或化合物： 该药剂或组合物结合至AhR并超激活或转移组成型AhR信号传递和下游效 应器通路，如那些术语在本文所用。这样的非组成型AhR激动剂能够增加 AhR多肽或编码AhR的多核苷酸的表达，或结合至AhR，并部分或全部转移 组成型AhR信号传递和下游活性，诸如癌细胞生长和肿瘤侵袭性质。因此， 与没有非组成型AhR激动剂存在的情况下的参考或对照水平相比，非组成型 AhR激动剂能够转移组成型AhR信号的约至少10％或更多，至少20％或更多， 至少30％或更多，至少40％或更多，至少50％或更多，至少60％或更多，至 少70％或更多，至少80％或更多，至少90％或更多，至少95％或更多，或至 少100％或全部。

本文描述的AhR激动剂，AhR非组成型激动剂，AhR抑制剂，和 AhR拮抗剂可以是自然存在的和合成的配体、拮抗剂、激动剂、小化学分子、 抗体或其抗原-结合片段、抑制RNA分子(即siRNA或反义RNA)及其类似。 鉴别AhR激动剂，AhR非组成型激动剂，AhR抑制剂，和AhR拮抗剂的检 测方法包括，例如，在多肽或多核苷酸存在或缺少的情况下，将待测的AhR 调节剂化合物涂布在细胞上，然后测定对多肽或多核苷酸功能的影响。

术语\"受治疗者”和\"个体”在本文可互换使用，且是指动物，例如人 类，本文描述的通式(I)或通式(II)的小分子AhR调节剂的接受者。对于那些疾 病状态的治疗，术语\"受治疗者”是指特定的动物，其中所述疾病状态对于如 人类受治疗者的特定动物而言是特定的。术语\"非人类动物”和\"非人类哺乳动 物”在本文可互换使用，且包括哺乳动物，诸如大鼠、小鼠、兔子、绵羊、猫、 狗、奶牛、猪和非人类灵长类动物。术语\"受治疗者”也包括任何脊椎动物， 包括但不限于哺乳动物、爬行动物、两栖动物和鱼类。

术语\"癌症”和\"癌性”是指或描述哺乳动物以不受调控的细胞生长 或增殖为典型特征的生理状态，这干扰了身体器官和系统的正常机能。癌从 原始位置转移并在重要器官增殖，其通过影响器官的功能退化最终导致受治 疗者死亡。诸如白血病的造血系统癌症在受治疗者中能够在竞争力上胜过正 常造血区室(hematopoietic compartments)，从而导致造血功能衰竭(贫血、血小 板减少症和嗜中性白血球减少症的形式)，最终造成死亡。在本定义内的包括 有良性肿瘤和恶性癌症，以及休眠肿瘤或微小转移灶。

术语\"抗癌治疗”是指用于治疗癌症的疗法或治疗剂。抗癌治疗剂的 例子包括，但不限于，例如，外科手术，化学治疗剂，生长抑制剂，细胞毒 素剂，用于放射治疗的药剂，抗血管生成剂，细胞凋亡剂，抗微管蛋白剂， 和治疗癌症的其它药剂，诸如抗-HER-2抗体(例如赫赛汀TM)(HerceptinTM)，抗 -CD20抗体，表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)， HER1/EGFR抑制剂(例如厄洛替尼(特罗凯TM))(erlotinib(TarcevaTM))，血小板衍 生生长因子抑制剂(例如格列卫TM(甲磺酸伊马替尼))(GleevecTM(Imatinib Mesylate))，COX-2抑制剂(例如塞来考昔)，干扰素，细胞因子，结合至一个 或多个以下靶标的拮抗剂(例如中和抗体)：ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、 BlyS、APRIL、BCMA或VEGF受体、TRAIL/Apo2，以及其它生物活性剂和 有机化学剂等。它们的组合也包括在本文描述的实施方式中。

本文所用的术语\"筛选”是指在实验室内使用细胞和组织来鉴别具 有特定功能的药剂，及其方法，所述特定功能例如是调节活性。在一些实施 方式中，本文描述的是用于鉴别抑制或相反地调节AhR活性药剂(化合物或药 物)的筛选方法。

如本文所用，术语\"包含(comprising)”或\"包括(comprises)”在 涉及组合物、方法和它们各自的组成时用来表达对于本发明而言是必不可少 的，然而还可以含有没有述及的要素，不论该要素是否是必需的。

如本文所用，术语\"基本上由……组成”是指对于给定的实施方式来 说是必需的那些要素。该术语允许额外的要素存在，这些额外的要素对本发 明实施方式的基本的和新颖的或功能性的特征没有实质性影响。

术语\"由……组成”是指本文描述的组合物、方法和它们各自的组 成，排除了实施方式中描述的没有列举的任何要素。

如本说明书和所附权利要求中所用，除非上下文中清楚指出，否则 单数形式\"一(a)”、\"一(an)”和\"该(the)”包括复数引用。因此，例如， 提到\"该方法”，包括一种或多种方法，和/或本文描述的类型的步骤，和/或阅 读该公开内容后对本领域技术人员来说将是显而易见的，等等。

除了在操作实例中，或另有说明外，本文所用的表示成分或反应条 件的量的所有数目应当理解为在所有情况下通过术语\"大约”修正。当与百分 比一起使用时，术语\"大约”意思是±1％。

除非本文另有限定，否则本申请中使用的科学或技术术语应具有本 公开内容所属领域的技术人员通常理解的含义。应理解本发明不限于本文描 述的具体方法、方案和试剂等，其本身可作改变。本文使用的术语只用于描 述具体实施方式的目的，且不旨在限制本发明的范围，本发明的范围只通过 权利要求限定。免疫学和分子生物学中常用术语的定义可在以下出版物中找 到：默克诊断与治疗手册，第18版，默克研究实验室出版，2006年(ISBN 0-911910-18-2)(The Merck Manual of Diagnosis and Therapy,18th Edition, published by Merck Research Laboratories,2006(ISBN 0-911910-18-2))；罗伯特 S.波特等人(主编)，分子生物学百科全书，布莱克威尔科学出版公司，1994 年(ISBN 0-632-02182-9)(Robert S.Porter et al.(eds.),The Encyclopedia of Molecular Biology,published by Blackwell Science Ltd.,1994(ISBN 0-632-02182-9))；和罗伯特A.迈耶斯(主编)，分子生物学与生物技术：综 合参考，VCH出版公司出版，1995年(ISBN 1-56081-569-8)(Robert A.Meyers (ed.),Molecular Biology and Biotechnology:a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers,Inc.,1995(ISBN 1-56081-569-8))；沃纳·卢特曼的 免疫学，艾尔塞维尔科学出版社出版，2006年(Immunology by Werner Luttmann, published by Elsevier,2006)。分子生物学中常用术语的定义可在以下出版物中 找到：本杰明·勒温，基因IX，琼斯和巴特利特出版公司出版，2007年(ISBN-13: 9780763740634)(Benjamin Lewin,Genes IX,published by Jones Bartlett Publishing,2007(ISBN-13:9780763740634))；肯德鲁等人(主编)，分子生物 学百科全书，布莱克威尔科学出版公司出版，1994年(ISBN 0-632-02182-9)(Kendrew et al.(eds.),The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd.,1994(ISBN 0-632-02182-9))；和罗伯特A. 迈耶斯，马尼亚蒂斯等人，分子克隆：实验室手册，冷泉港实验室出版社， 冷泉港，纽约，美国(1982)(Robert A.Meyers(ed.),Maniatis et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,USA(1982))；山姆布鲁克等人，分子克隆：实验室指南(第2 版)，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，美国(1989)(Sambrook et al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2ed.),Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,USA(1989))；戴维斯等人，分子生物学的基本 方法，艾尔塞维尔科学出版公司，纽约，美国(1986)(Davis et al.,Basic Methods in Molecular Biology,Elsevier Science Publishing,Inc.,New York,USA(1986))； 或者酶学方法：分子克隆技术指南，152卷，S.L.伯杰和A.R.基摩尔主编，学 术出版公司，圣地亚哥，美国(1987)(Methods in Enzymology:Guide to Molecular Cloning Techniques Vol.152,S.L.Berger and A.R.Kimmerl Eds., Academic Press Inc.,San Diego,USA(1987))；分子生物学实验指南(CPMB)(弗 雷德M.奥斯泊等人，约翰威利国际出版公司)(Current Protocols in Molecular Biology(CPMB)(Fred M.Ausubel,et al.ed.,John Wiley and Sons,Inc.))，蛋白质 科学实验指南(CPPS)(约翰E.科林根等人主编，约翰威利国际出版公 司)(Current Protocols in Protein Science(CPPS)(John E.Coligan,et.al.,ed., John Wiley and Sons,Inc.))和免疫学实验指南(CPI)(约翰E.科林根等人主编，约 翰威利国际出版公司)(Current Protocols in Immunology(CPI)(John E.Coligan, et.al.,ed.John Wiley and Sons,Inc.))，以上出版物通过引用整体并入本文。

应理解的是上述详细描述和以下实施例只是说明性的，且不应作为 对本发明保护范围的限制。在不背离本发明的精神与范围的前提下，对公开 的实施方式可作各种改变与修改，这对于本领域的技术人员来说将是显而易 见的。进一步地，所有专利，专利申请，和经鉴定的出版物通过引用明确并 入本文，用于描述和公开的目的，例如，出版物中描述的方法可能与本发明 一起使用。仅提供这些在本申请的申请日期之前公开的出版物。在这方面任 何内容不应当解释为发明人承认其没有权利依据在先发明或任何其他原因先 于该出版物公开的。所有针对日期的声明或针对这些文件内容的描述是以对 于申请人来说可用的信息为基础，而不包含针对这些文件的日期或内容的正 确性的任何承诺。

附图说明

图1显示AhRR对AhR的抑制上调p21并减小MCF-10F的生长。 插入：对照或AhRR-转导细胞中p21蛋白水平。

图2证实AhRR对AhR的抑制可以抑制基质胶中肿瘤侵袭。

图3证实AhR siRNA对AhR的下调可以抑制博伊登室(Boyden Chambers)中的侵袭。48小时后测定含基质胶的膜上方和下方的细胞数目，并 计算下闸室(lower chamber)中细胞百分比。*p 0.04；**p 0.03。

图4A-4B显示对AhR激动剂和拮抗剂的高通量筛选。图4A显示 H1G1细胞表达AhR-驱动的GFP报道分子构建体，并单独用候选AhR调节 剂(黑线)或与BNF一起处理H1G1细胞(亮线)，其中BNF是一种已知的AhR 激动剂。黑圈表示为AhR抑制剂而亮圈表示为激动剂。图4B显示来自\"A” 中鉴定的无毒化合物的数据，在BNF存在下，滴定所述化合物以计算IC50。 在这种半自动化检测中筛选了超过4,000化合物。

图5A-5B证实CH223191和CMLD 2166抑制组成型AhR活性和细 胞生长。图5A显示来自恶性BP1和永生化MCF-10F细胞的数据，这些细胞 用AhR-响应的pGudLuc瞬时转染，并用载体(DMSO)，CH223191或2166处 理。图5B显示来自BP1和MCF-10F细胞的数据，这些细胞在DMSO,CH2231 91或2166存在下生长18小时，并用3H-胸苷掺入测定。*p 0.05。

图6证实了用DMBA，一种AhR激动剂，刺激细胞之后，CB7993113 阻断了AhR向细胞核的易位。用载体或1-10μM CH223191处理Hepa-1细胞。 1小时后，用0.1μM DMBA(其上表示)处理细胞，并培养30分钟。收获细胞， 并从细胞质和细胞核中提取蛋白质。提取的蛋白质接受AhR或β-肌动蛋白作 为内参照(loading control)的特异性免疫印迹检测。数据代表3个独立的实验。

图7A-7B证实CH223191,CMLD-2166和CMLD-2186抑制肿瘤侵 袭。在DMSO，10-5M CMLD-2166，(2166的对映异构体)或 CH223191存在下，Hs578T细胞培养于博伊登室(图7A)或基质胶(图7B)中， 在2天(博伊登室)或7天(基质胶)后检测侵袭力。

图8A-8B证实CB7993113能够在体内阻断有效价的AhR配体和原 型PAH，DMBA的急性毒性作用，并且通过用CB7993113处理，受DMBA 影响的骨髓细胞的3个亚群都被复活。图8A显示来自C57BL/6小鼠(6/组)的 数据，这些小鼠在-1天和0天给予腹腔注射载体(油)或50mg/kg的 CB7993113。然后，给予小鼠注射50mg/kg DMBA。48小时后处死小鼠。将 骨髓造血干细胞从骨骼中去除，并对有生命力的细胞进行计数。数据表示为 有生命力的白血细胞的平均数+SE。**p 0.01,***P 0.001，学生t-检验 (student’s t-test)。图8B确认了图8A所示的数据，并进一步证实通过用 CB7993113处理，受DMBA影响的骨髓细胞的3个亚群都被复活。如图8A 处理C57BL/6小鼠(6/组)。48小时后，用流式细胞计量仪测定有生命力的骨 髓pro B细胞，pre B细胞，和中性粒细胞的百分比和数目。数据表示为每个 亚型有生命力的细胞的平均数+SE。(*p 0.05,**P 0.01，学生t-检验)。

图9描绘了形状-和电性相似性搜索的计算机策略。

图10证实化合物CMLD-2166和CB7993113结合人类AhR。化合 物CMLD-2166和CB7993113与翻译的人类AhR和放射性标记的TCDD(二 噁英)，一种高亲和力AhR配体，在体外混合。然后，复合物在蔗糖密度梯度 中分离并检测其片段的放射性。片段13-16中可见信号的减弱(放射性标记的 TCDD的代替)，表明受测化合物结合到了AhR且TCDD被代替。这些结果 证实这些化合物是竞争性AhR抑制剂。

图11证实AhR抑制剂并不显著地阻断PPARγ-介导的转录。从4 个实验汇集数据。与它们阻断AhR-驱动的报道分子活性的能力不同的是，AhR 抑制剂对PPAR-驱动的报道分子活性没有影响。

图12证实AhR siRNA转染阻断在基质胶中肿瘤侵袭。对照siRNA 或AhR siRNA瞬时转染BP1或Hs578T人类乳房肿瘤细胞以敲低(knock down) AhR表达，且细胞在基质胶中培养6天。所显示的是单细胞在那6天中生长 的肿瘤细胞克隆。

图13证实多西环素-诱导的AhR shRNA阻断在基质胶中肿瘤侵袭。 用多西环素-诱导的对照(乱序的/非沉默的)shRNA(左)或AhR-特异性shRNA(右)稳定转导Hs578T细胞。用多西环素处理细胞以激活对照和AhR shRNA载体，且细胞在基质胶中培养5天。

图14证实AhR抑制剂CB993113阻断在基质胶中BP1肿瘤侵袭。 在载体(左)或5uM CB7993113存在下，BP1细胞在基质胶中培养5天。在最 高测试剂量，在10uM下，CB7993113是无毒的。

图15是简略地描绘了AhR抑制剂和非竞争性激动剂如何能够抑制 肿瘤侵袭。

图16A-16B证实AhR激动剂降低了基质胶中人类乳房肿瘤细胞 (BP1)侵袭。在载体，5uM DIM(16A)，载体或5uM CB7950998(16B)存在下， BP1细胞在基质胶中培养5天。

发明详述

本文描述的是包含调节AhR活性的药剂的新型组合物和方法。发 明人已发现了通式(I)和(II)的新型小分子化合物，如本文所述，其可以调节组 成型AhR活性并能够用来治疗和抑制诸如癌症的增殖性疾病(proliferative disorders)，这是基于如下能力：抑制癌细胞生长，并抑制表征肿瘤转移的参 数，诸如肿瘤细胞的侵袭力。

芳烃受体及其调节剂

芳烃受体(\"AhR\")是碱性-螺旋-环-螺旋转录因子家族的配体依赖性 成员，已发现许多结构多样的合成和自然存在的化合物，诸如多环芳烃、吲 哚和类黄酮，可将其激活。在没有结合配体存在的情况下，在细胞的细胞质 区室中AhR以与下述蛋白结合的潜在的构象存在，所述蛋白为：两分子的分 子伴侣热休克蛋白90(\"hsp90\")(普度,生物化学杂志.263卷:13802-13805页 (1988年)和威廉森等人,欧洲分子生物学学会杂志.9卷:69-76页(1990年)) (Perdew,J.Biol.Chem.263:13802-13805(1988)and Wilhelmsson et al.,EMBO J. 9:69-76(1990))，亲免素样蛋白，XAP2(卡佛等人,生物化学杂志.272 卷:11452-11456页(1997年)；玛等人,生物化学杂志.272卷:8878-8884页(1997 年)；和迈耶等人,分子与细胞生物化学.18卷:978-988页(1998年))(Carver et al., J.Biol.Chem.272:11452-11456(1997)；Ma et al.,J.Biol.Chem.272:8878-8884 (1997)；and Meyer et al.,Mol.Cell.Biol.18:978-988(1998))，和hsp90结合蛋白， p23(卡兹劳斯卡斯等人,生物化学杂志.274卷:13519-13524页(1999年)) (Kazlauskas et al.,J.Biol.Chem.274:13519-13524(1999))。配体结合引发一系 列级联性事件，所述事件包括易位至细胞核，hsp90的释放，和与ARNT的 异源二聚化(施密特等人,细胞与发育生物学年评.12卷:55-89页(1996年)和罗 兰兹等,毒理学评论.27卷:109-134页(1997年))(Schmidt et al.,Annu.Rev.Cell. Dev.Biol.12:55-89(1996)and Rowlands et al.,Crit.Rev.Toxicol.27:109-134 (1997))。配体结合的AhR-ARNT复合物能够识别定位于CYP1A1和其它敏感 基因的启动子区的被称为二噁英反应元件(\"DRE\"s)的共有序列，从而激活转 录(施密特等人,细胞与发育生物学年评.12卷:55-89页(1996年)和罗兰兹等, 毒理学评论.27卷:109-134页(1997年))(Schmidt et al.,Annu.Rev.Cell.Dev. Biol.12:55-89(1996)and Rowlands et al.,Crit.Rev.Toxicol.27:109-134 (1997))。已知的AhR-相关蛋白的例子包括，但不限于，hsp90p23，XAP2， p60，hsp70，和p48。

AhR蛋白含有几个对功能至关重要的区域，并且AhR蛋白被分类 为转录因子的碱性螺旋-环-螺旋/Per-Arnt-Sim(bHLH/PAS)家族的成员。bHLH 基序位于蛋白质的N-末端。bHLH超家族成员具有两个功能独特并高度保守 的域。第一个是碱性-区域(b)，其参与将转录因子与DNA的结合。第二个是 螺旋-环-螺旋(HLH)区域，其促进蛋白质-蛋白质的相互作用。AhR还包含两 个PAS域，PAS-A和PAS-B，它们是200-350个氨基酸的一段序列，展示了 对蛋白质域的高度的序列同源性：所述蛋白质域是最初发现于果蝇基因期(Per) 和单脑(single minded)(Sim)基因，以及AhR的二聚化伴侣，芳烃受体核易 位体(ARNT)。PAS域为与含有蛋白质的其它PAS域的特异性二级相互作用提 供支持，与AhR和ARNT一样，因此可以形成杂合和纯合蛋白复合物。AhR 的配体结合位点包含在PAS-B域内，并含有几个对配体结合很关键的保守残 基。最后，富Q域位于蛋白质的C-末端，并且参与辅激活因子(co-activator) 的补充和转激活。

因此，本文所用的术语\"芳烃受体”或\"AhR”是指具有例如 NP_001612所描述的下列氨基酸序列的848个氨基酸多肽和任何自然发生的 等位剪接变体及其加工形式：

MNSSSANITYASRKRRKPVQKTVKPIPAEGIKSNPSKRHRDRLNTELDR LASLLPFPQDVINKLDKLSVLRLSVSYLRAKSFFDVALKSSPTERNGGQDNC RAANFREGLNLQEGEFLLQALNGFVLVVTTDALVFYASSTIQDYLGFQQSD VIHQSVYELIHTEDRAEFQRQLHWALNPSQCTESGQGIEEATGLPQTVVCY NPDQIPPENSPLMERCFICRLRCLLDNSSGFLAMNFQGKLKYLHGQKKKGK DGSILPPQLALFAIATPLQPPSILEIRTKNFIFRTKHKLDFTPIGCDAKGRIVLG YTEAELCTRGSGYQFIHAADMLYCAESHIRMIKTGESGMIVFRLLTKNNRW TWVQSNARLLYKNGRPDYIIVTQRPLTDEEGTEHLRKRNTKLPFMFTTGEA VLYEATNPFPAIMDPLPLRTKNGTSGKDSATTSTLSKDSLNPSSLLAAMMQ QDESIYLYPASSTSSTAPFENNFFNESMNECRNWQDNTAPMGNDTILKHEQI DQPQDVNSFAGGHPGLFQDSKNSDLYSIMKNLGIDFEDIRHMQNEKFFRND FSGEVDFRDIDLTDEILTYVQDSLSKSPFIPSDYQQQQSLALNSSCMVQEHL HLEQQQQHHQKQVVVEPQQQLCQKMKHMQVNGMFENWNSNQFVPFNCP QQDPQQYNVFTDLHGISQEFPYKSEMDSMPYTQNFISCNQPVLPQHSKCTE LDYPMGSFEPSPYPTTSSLEDFVTCLQLPENQKHGLNPQSAIITPQTCYAGA VSMYQCQPEPQHTHVGQMQYNPVLPGQQAFLNKFQNGVLNETYPAELNNI NNTQTTTHLQPLHHPSEARPFPDLTSSGFL(SEQ ID NO:1)。典型地，AhR是 指人类AhR。术语AhR也用来指AhR多肽的截短的形式或片段，包括，例 如，特异性AhR域。在本申请中，提到的任何这样的形式能够鉴定出，例如， 通过\"AhR(122-224)”。

在经典的信号传递过程中，细胞溶质的AhR结 合至诸如合适的小分子的配体上，这促进AhR易位至细胞核，并最终导致靶 基因的重新转录。AhR靶基因的启动子具有反应元件5′-TNGCGTG-3′，被称 为\"二噁英反应元件”或\"外源性反应元件”的\"DRE”或\"XRE”。外源性代谢酶的 基因(例如细胞色素P450)是AhR公知的靶标，且在此被称作\"AhR电池基 因”(AhR battery genes)。数以百计的其它基因也有DRE。经典的AhR信号传 递的生物化学解释已显示能够微调AhR活性的几个参数。这些参数包括配体 特征，接头分子和转录辅激活因子(co-activators)或辅阻抑物(co-repressors)， 它们调控AhR的异常的细胞特异性活性(C.艾瑟等,免疫学的发展趋势2009 年,卷30:9,447-454页)(C.Esser et al.,Trends in Immunology 2009,Vol.30:9, pp.447-454)。

已经对AhR信号传递的替代途径进行了描述。例如，AhR能够结 合至视网膜母细胞瘤蛋白，雌激素受体(ER)，转录因子E2F1和NFκB途径亚 单元RelA和RelB。也已经对AhR与其它信号传递通路的交互作用(cross-talk) 的证据进行了报导，诸如通过激酶(src，JNK，p38，MAPK)或对转录辅助因 子的竞争。AhR可作为泛素连接酶，靶向ER，用于蛋白酶体降解。在这些信 号传递通路中，AhR和其它蛋白质有时候会相互抑制彼此的功能。事实上， 生物信息学分析指明AhR与进一步的转录因子或转录辅激活因子之间存在复 合信号交互作用(C.艾瑟等,免疫学的发展趋势 2009年,卷30:9,447-454页) (C.Esser et al.,Trends in Immunology 2009,Vol.30:9,pp.447-454)。

一些低分子量化学物质可作为内源性或生理性\"AhR配体”，也就是 说，它们具有结合离解常数(Kd)和生理相关的AhR配体预期水平上的有效浓 度。物理流体切应力(其引起低密度脂蛋白的氧化)，第二信使cAMP和Ca2+， 血清和生长培养基成分都能激活AhR响应(C.艾瑟等,免疫学的发展趋势 2009年,卷30:9,447-454页)(C.Esser et al.,Trends in Immunology 2009,Vol. 30:9,pp.447-454)。但是，AhR结晶还没有得到，所以目前还缺少关于依赖 于配体的结构变化的信息。配体保护的蛋白酶消化研究表明只存在一个配体 结合口袋(binding pocket)(S.克罗嫩伯格等,核酸研究.28卷(2000年), 2286–2291页)(S.Kronenberg et al.,Nucleic Acids Res.28(2000),pp. 2286–2291)。

AhR配体只需要满足尺寸和平面形状的最低要求以便适合进入 AhR结合口袋。因此，即使是在10-12和10-3M之间的不同亲和力范围，一 大批低分子量化学物质能够激活AhR。很多配体具有两个碳环系统，诸如色 氨酸衍生物、黄酮类和联苯。AhR系统具有遗传多态性，且不同的等位基因 影响对AhR配体的答应性(C.艾瑟等,免疫学的发展趋势 2009年,卷30:9, 447-454页)(C.Esser et al.,Trends in Immunology 2009,Vol.30:9,pp. 447-454)。AhR配体通常可分为两类，合成的或天然存在的。首先被发现的 配体是合成的，并且成员有卤代芳香烃(二苯并-二噁英，二苯并呋喃和联苯) 和多环芳香烃(3-甲基胆蒽，苯并(a)芘，苯并蒽和苯并黄酮)。

已被鉴别为AhR配体的天然存在的化合物包括诸如靛蓝和靛玉红 的色氨酸衍生物，诸如胆红素，花生四烯酸代谢产物脂氧素A4和前列腺素G 的四吡咯类，修饰的低密度脂蛋白和多种膳食类胡萝卜素。

AhR配体的例子包括，但不限于，内源性配体，诸如FICZ或6- 甲酰吲哚[3,2-b]咔唑和6,12-二甲酰吲哚[3,2-b]咔唑或dFICZ(色氨酸光产物)， 胆红素(肝脏亚铁血红素代谢产物)，脂氧素A4(具有抗炎性质的类花生酸)，ITE [2-(1′H-吲哚-3′-羰基)-噻唑-4-羧酸甲酯](分离自肺组织)；环境污染物(在有机 材料的燃烧过程中形成)，诸如2,3,7,8-四氯二苯并-p-二噁英(TCDD)，和苯[a] 芘；膳食配体，诸如槲皮素(存在于苹果和洋葱中)，吲哚-3-甲醇(存在于很多 十字花科植物中，例如卷心菜)，白藜芦醇(存在于红酒中)，和姜黄色素(一种 调味品)；和药物(合成的)，诸如M50367{3-[2-(2-苯乙基)苯并咪唑-4-基]-3- 羟基丙酸，和VAF347{[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]}。

两种最有效且有良好特点的AhR拮抗剂包括合成的黄酮类，3\'- 甲氧基-4\'-硝基黄酮(\"3M4NF\")，和吲哚衍生物3,3\'-二吲哚甲烷(\"DIM\")。已显 示这些化合物通过直接竞争性结合至AhR配体结合位点功能(亨利等人,分子 药理学55卷:716-725页(1999年)；黑斯特曼等人,分子细胞生物学23 卷:7920-7925页(2003年))(Henry et al.,Mol.Pharmacol.55:716-725(1999)； Hestermann et al.,Mol.Cell.Biol 23:7920-7925(2003))。与这些结构不同的拮抗 剂的结合使AhR的最终结果非常不同。3M4NF结合到AhR抑制了TCDD-介 导的核定位，ARNT二聚化，和DNA结合(亨利等人,分子药理学55卷:716-725 页(1999年))(Henry et al.,Mol.Pharmacol.55:716-725(1999))。3M4NF被认为 可抑制对于核定位序列的暴露是必需的AhR复合物内构象变化，导致细胞的 胞质区室中AhR的存留。相反地，DIM结合到AhR则可以核定位，ARNT 二聚化，和随后的DNA结合。然而，与TCDD-结合的AhR-ARNT二聚体不 同，这种DIM-结合的复合物不能补充负责启动转录的必需辅助因子(黑斯特 曼等人,分子细胞生物学23卷:7920-7925页(2003年))(Hestermann et al.,Mol. Cell.Biol 23:7920-7925(2003))。卤代的和硝基-取代的黄酮能够显示结构相关 的芳烃受体(AhR)激动剂和抗结剂活性，相比于2,3,7,8-四氯二苯并-p-二噁英(TCDD)所观察到的活性(F.卢等人,生化药理学.51卷.1077页(1996年))(F. Lu et al.,Biochemical Pharmacology.51.1077(1996))。

AhR调节剂

发明人已经发现了本文描述的新型的黄酮和氢黄酮 (hydroflavone)AhR调节剂化合物，诸如通式(I)和通式(II)的小分子，例如 CB7993113、CB9950998和CMLD-2166，通过发挥AhR抑制剂或非组成型 AhR激动剂的作用来调节组成型AhR活性。此外，他们已经发现这样的AhR 调节剂化合物能够抑制癌细胞生长，以及肿瘤侵袭，此外，所述化合物在体 内被吸收并能够以药学有效剂量用以靶向外周器官，诸如骨髓。因此，本文 描述的是用于治疗性组合物的AhR新型小分子调节剂和组成型AhR信号传 递及方法，用于治疗和抑制癌症生长和肿瘤细胞侵袭以及其它高增殖性疾病。

AhR介导各种功能响应，包括但不限于，具有DRE或XRE反应元 件5′-TNGCGTG-3′的靶基因或AhR电池基因的重新转录。AhR信号传递的替 代途径也进行了描述，诸如结合至视网膜母细胞瘤蛋白，雌激素受体(ER)， 转录因子E2F1和NFκB途径亚单元RelA和RelB。AhR也可作为泛素连接酶。 因此，通过AhR的信号传递包含多种途径，包括组成型和非组成型AhR信号 传递通路或信号传递活性，本文对这些术语进行了定义。

如本文所用，\"组成型AhR信号传递”是指一种或多种由AhR介导 或调控的信号传递通路，所述AhR由一种或多种内源性AhR配体或者诸如毒 素或污染物的一种或多种的环境配体激活或驱动的，这引起AhR向细胞核的 组成型的或长期的易位，以及激活或调节一种或多种AhR电池基因，该AhR 电池基因参与不受调控的细胞生长和增殖、肿瘤细胞侵袭或其组合。

因此，\"组成型AhR激动剂”是选择性结合至AhR的AhR激动剂， 而且其能够诱导AhR活性或信号传递或者通过自身激活AhR的功能，其测量 或分析的可以使用诸如体外AhR报道分子检测的本领域技术人员已知的任何 方法，此外，其还能够引起不受调控的细胞生长，肿瘤细胞侵袭或其组合。 在一些实施方式中，组成型AhR激动剂上调CYP1A1、CYP1B1或其组合的 表达。与没有AhR激动剂的对照相比，当AhR的活性值至少高10％，至少 高25％，至少高50％，至少高75％，至少高100％，至少高2倍，至少高5 倍，至少高10倍，至少高25倍，至少高50倍，至少高100倍，至少高1000 倍，那么就获得了可实现AhR激动剂引起的激活。

如本文所用，\"非组成型AhR信号传递”是指AhR介导或诱导的一 种或多种信号传递通路，既不会引起AhR向细胞核的组成型的或长期的易位， 也不会激活或调节一种或多种AhR电池基因，该AhR电池基因引起参与不受 调控的细胞生长、肿瘤细胞侵袭或其组合。在一些实施方式中，非组成型AhR 信号传递不会引起CYP1A1、CYP1B1或其组合的表达的上调。

因此，\"AhR调节剂”，作为本文使用的术语，是指这样的药剂，例 如通式(Ia)小分子的通式(I)小分子，或者例如通式(IIa)小分子的通式(II)小分 子，其调节或引起或促进AhR受体介导的一种或多种过程、机制、效应、响 应、功能、活性或通路中的定性或定量的变化、改变或修饰。通过AhR调节 剂介导的此类变化可以指AhR的表达、活性或功能的降低或增加，诸如AhR 组成型活性的降低、抑制或转移，所述的AhR调节剂诸如本文描述的AhR 的抑制剂或非组成型激动剂。术语\"表达”是指参与产生RNA和蛋白质，且视 情况参与分泌蛋白质的细胞过程，在适用情况下，包括但不限于，例如转录、 翻译、折叠、修饰和加工。\"表达产物”包括基因转录的RNA和通过翻译转录 基因的mRNA而得到的多肽。

就AhR调节剂而言，术语\"调节”的用途与其在本领域内的用途一 致，例如意思是引起或促进一种或多种生物过程、机制、效应、响应、功能、 活性、通路或其它感兴趣的现象中定性或定量的变化、改变或修饰。因此， 如本文所用，调节是指AhR受体介导的一种或多种过程、机制、效应、响应、 功能、活性或通路中的定性或定量的变化、改变或修饰。

就AhR调节剂而言，本文使用的术语\"药剂”意思是任何化合物或 物质，诸如，但不限于，小分子、核酸、多肽、肽、药物、离子等。\"药剂” 可以是任何化学物质、实体(entity)或部分(moiety)，包括但不限于合成的或天 然存在的蛋白质性质的或非蛋白质性质的。在一些实施方式中，药剂是核酸、 核酸类似物、蛋白质、抗体、肽、适体(aptamer)、核酸的低聚物、氨基酸或 碳水化合物，且包括但不限于蛋白质、寡核苷酸、核酶、DNA酶、糖蛋白、 siRNA(小干扰RNA)、脂蛋白、适配体以及它们的修饰与组合等。在特定实 施方式中，如本文描述，药剂是具有化学部分的小分子。例如，化学部分包 括未被取代的或取代的烷基、芳香基或杂环部分。化合物具有已知的期望活 性和/或特性，例如调节AhR活性，或者使用例如本文描述的筛选方法选自包 含不同化合物的库。

如本文所用，术语\"小分子”是指这样的化学药剂：其可以包括，但 不限于，肽，肽类似物(peptidomimetic)，氨基酸，氨基酸类似物，多核苷酸， 多核苷酸类似物，适体，核苷酸，核苷酸类似物，分子量小于约10,000克/ 摩尔的有机或无机化合物(例如包括杂环有机化合物和有机金属化合物)，分子 量小于约5,000克/摩尔的有机或无机化合物，分子量小于约1,000克/摩尔的 有机或无机化合物，分子量小于约500克/摩尔的有机或无机化合物，这些化 合物的盐、酯和其它药学上可接受的形式。

在一些实施方式中，AhR调节剂选择性结合至AhR。如本文所用， \"选择性结合”或\"特异性结合”是指本文描述的AhR激动剂或诸如AhR拮抗剂 的AhR抑制剂结合至诸如AhR多肽的靶标上的能力，其KD是10-5M(10000 nM)或更小，例如10-6M或更小，10-7M或更小，10-8M或更小，10-9M或 更小，10-10M或更小，10-11M或更小，或者10-12M或更小。例如，如果本 文描述的激动剂或抑制剂以10-5M或更低的KD结合至AhR多肽，但是不结 合至其它分子或相关的同源物，那么就说所述药剂特异性结合AhR多肽。例 如，激动剂或抑制剂的亲和性和亲和力以及所用激动剂或抑制剂的浓度能够 影响特异性结合。使用任何合适的方法，诸如合适的细胞分析中AhR激动剂 或AhR抑制剂的滴定法，诸如本文描述的那些方法，本领域的技术人员能够 确定本文描述的激动剂或抑制剂选择性结合的合适条件。

至于AhR靶标，在AhR上的术语\"配体相互作用位点”意思是AhR 上的位点、表位、抗原决定簇、部件、域或氨基酸残基的延伸物，其是结合 至配体、受体或其它结合伴侣、催化位点、切割位点、变构相互作用的位点、 参与AhR多聚化(诸如同聚(homomerization)或异源二聚化)的位点；或AhR上 参与靶标，即AhR，的生物作用或机制的任何其它位点、表位、抗原决定簇、 部件、域或氨基酸残基的延伸物。更一般地，\"配体相互作用位点”可以是AhR 多肽上的任何位点、表位、抗原决定簇、部件、域或氨基酸残基的延伸物， 本文描述的抑制剂或激动剂可以结合到它们上面，这样可以调节AhR活性和 /或表达(和/或AhR参与的任何通路、相互作用、信号传递、生物机制或生物 效应)。

在本文描述的组合物和方法的一些方面，AhR调节剂是具有本文 描述的通式(I)、通式(Ia)、通式(II)或通式(IIa)化学结构的AhR抑制剂。

如本文所用，术语\"AhR的抑制剂”或\"AhR抑制剂”是指这样的药剂 或化合物：诸如本文描述的通式(I)或通式(II)小分子，分别地例如CB7993113 和CMLD-2166，其抑制一种或多种AhR信号传递和下游效应器通路，包括 组成型AhR信号传递，如在本文所用的那些术语。因此，术语AhR抑制剂是 指抑制AhR多肽或编码AhR的多核苷酸的表达的药剂，或者其结合，部分或 全部阻断所述AhR多肽或编码AhR的多核苷酸的刺激作用，降低、阻止、延 迟所述AhR多肽或多核苷酸的激活作用，失活、脱敏或下调所述AhR多肽或 多核苷酸的活性。这样的AhR抑制剂能够抑制AhR表达，例如，AhR翻译， AhR的翻译后加工，AhR多肽的稳定性、降解或者核定位或胞质定位，或者 编码AhR的多核苷酸的转录、转录后加工、稳定性或降解，或者结合其至， 部分或全部地阻断刺激作用，DNA结合，或者AhR的转录因子活性。AhR 抑制剂能够直接或间接地起作用。在一些实施方式中，AhR抑制剂选择性地 与AhR结合。

用于本文的术语\"抑制”、\"降低”和\"减少”通常意思都是统计学上显 著量的降低。因此，相比于没有抑制剂的参考或对照水平，当AhR多肽或编 码AhR的多核苷酸的活性值约至少低于10％，至少低于20％，至少低于30％， 至少低于40％，至少低于50％，至少低于60％，至少低于70％，至少低于80％， 至少低于90％，至少低于95％，至少低于98％，至少低于99％，直到包括100％ 或更少，即没有或检测不到，那么抑制AhR就达到。在本文描述的方面的一 些实施方式中，AhR抑制剂抑制组成型AhR活性。

在这些方面的一些实施方式中，AhR抑制剂是\"AhR拮抗剂”。AhR 拮抗剂是指通过特异性结合到AhR多肽或编码AhR的多核苷酸上而本身不 会激发生物响应的AhR拮抗剂，但是其会阻断或缓冲激动剂-介导的或配体- 介导的响应，即AhR拮抗剂能够结合但并不激活AhR多肽或编码AhR的多 核苷酸，并且结合会扰乱相互作用，取代AhR激动剂，和/或抑制AhR激动 剂的功能。在一些这样的实施方式中，AhR抑制剂是阻止或抑制2,3,7,8-四氯 二苯并-p-二噁英(TCDD)结合至AhR的AhR拮抗剂。在一些这样的实施方式 中，AhR拮抗剂鉴别为小分子化合物，通过诸如BNF或TCDD的强AhR激 活剂阻断AhR的激活，但是本身不诱导AhR活性或信号传递，如使用本领域 技术人员已知的任何方法测量或分析的诸如体外AhR报道分子检测那样。因 此，如本文所用，当结合至AhR时，AhR拮抗剂并不能发挥AhR活性诱导 物的作用，即它们只起到纯AhR抑制剂的作用。在一些实施方式中，AhR拮 抗剂选择性结合至AhR。

在这些方面的一些实施方式中，本文描述的AhR抑制剂，诸如 通式(I)或通式(II)小分子，分别地例如CB7993113和CMLD-2166，阻断组成 型AhR效应器的功能，所述功能介导已长成的肿瘤的生长与增殖。在其它实 施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR抑制剂，例如CB7993113 和CMLD-2166，通过阻断AhR-介导的CYP1A1诱导和接触环境配体时诱变 剂的产生，而作为化学预防物。

在这些方面的一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小 分子AhR抑制剂，例如CB7993113和CMLD-2166，抑制推进恶性转化中持 续活性的AhR的早期促进作用。在一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通 式(II)小分子AhR抑制剂，例如CB7993113和CMLD-2166，抑制组成型AhR 信号传递-介导的癌症或肿瘤细胞生长。在一些实施方式中，本文描述的通式 (I)或通式(II)小分子AhR抑制剂，例如CB7993113和CMLD-2166，抑制在推 进恶性转化中组成型AhR信号传递-介导的肿瘤侵袭。

在其它方面，本文描述的AhR调节剂是具有通式(I)或通式(II)化 学结构的非组成型AhR激动剂，诸如CB7950998。

如本文所用，术语\"AhR的非组成型激动剂”，\"非组成型AhR激 动剂”，\"AhR的非组成型激活剂”，或\"非组成型AhR激活剂”是指本文描述的 通式(I)或通式(II)小分子，例如，CB7950998，其结合至AhR并超激活或转向 组成型AhR信号传递和下游效应器通路，如那些术语在本文所用。通式(I)或 通式(II)的这些小分子非组成型AhR激动剂，例如CB7950998，能够增加AhR 多肽或编码AhR的多核苷酸的表达，或结合至AhR，并部分或全部转移组成 型AhR信号传递和下游活性，诸如癌细胞生长和肿瘤侵袭性质。在一些实施 方式中，非组成型AhR激动剂选择性结合至AhR。

在这些方面的一些实施方式中，非组成型AhR激动剂阻断或缓冲 组成型内源性配体-介导的响应，即非组成型AhR激动剂能够通过AhR结合 并发出信号，但是不激活AhR多肽或编码AhR的多核苷酸的组成型活性，并 且所述结合干扰了相互作用和/或抑制了激活组成型AhR通路的内源性AhR 配体的功能。因此，通式(I)或通式(II)的非组成型AhR激动剂，例如 CB7950998，与没有非组成型AhR激动剂存在情况下的参考或对照水平相比， 非组成型AhR激动剂能够转移组成型AhR信号约至少10％或更多，至少20％ 或更多，至少30％或更多，至少40％或更多，至少50％或更多，至少60％或 更多，至少70％或更多，至少80％或更多，至少90％或更多，至少95％或更 多，或至少100％或全部。

在这些方面的优选实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)的非 组成型AhR激动剂，例如CB7950998，结合AhR并介导非组成型AhR信号 传递，并且抑制或阻断组成型AhR效应器功能，所述功能介导已长成的肿瘤 的生长与增殖。在其它实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)的非组成型 AhR激动剂，例如CB7950998，通过阻断AhR-介导的CYP1A1诱导以及在 接触介导组成型AhR信号传递的AhR配体时阻断诱变剂的产生，从而作为化 学预防物。在一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)的非组成型AhR 激动剂，例如CB7950998，抑制在推进恶性转化中持续活性的AhR的早期促 进作用。在一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)的非组成型AhR激 动剂，例如CB7950998，抑制或阻止部分或全部地由组成型AhR信号传递介 导的癌或肿瘤细胞的生长。在一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II) 的非组成型AhR激动剂，例如CB7950998，抑制或阻止部分或全部地由组成 型AhR信号传递介导的肿瘤细胞的侵袭。

在一些实施方式中，将非组成型AhR激动剂鉴别为这样的小分子 化合物：其结合至AhR，并且通过诸如BNF或TCDD的AhR激活剂能够取 代结合；能够激活AhR，使用本领域技术人员已知的任何方法测定或检测到； 此外，不引起，优选抑制癌细胞生长或增殖或者肿瘤侵袭，使用本领域技术 人员已知的任何检测方法测定到。通过非组成型激动剂对AhR的激活可以使 用例如本文描述的体外AhR报道分子检测方法进行测量。确定AhR激动剂是 否起发挥抑制癌细胞生长与增殖的非组成型AhR激动剂功能的检测可基于本 领域技术人员已知的任何方法，诸如图14中CB7950998的鉴定中描述的基 质胶检测。

因此，本文提供用于描述的各方面的是通式(I)化合物的小分子 AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂以及它们药学上可接受的盐：

其中：

Y是C或N；

X是OR1，NHR1，SR1，CH2(n)R1，卤素，或H；

n是0-6；

Z是O，S，或NH；

R1和R2独立地是H，烷基，链烯基，炔基，氨基，氨基磺酰基，烷氧基， 酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或卤代烷 基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地为不存在，H，卤素，烷基，链烯基，炔基，烷 氧基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或 卤代烷基，其中每一个可被任意取代。

本文描述的各方面，还提供了通式(II)化合物，它们的立体异构体； 以及它们药学上可接受的盐，

其中：

Y是C或N；

X是OR1，NHR1，SR1，CH2(n)R1，卤素，或H；

n是0-6；

Z是O，S，或NH；

R1和R2独立地是H，烷基，链烯基，炔基，氨基，氨基磺酰基，烷氧基， 酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或卤代烷 基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地为不存在，H，卤素，烷基，链烯基，炔基，烷 氧基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基，杂环基，或 卤代烷基，其中每一个可被任意取代。

本领域的技术人员将理解的是，通式(II)的各种立体异构体可被制 备。例如，针对在两个手性中心(通式(II)中标记为2和3)的立体异构体，表示 为化合物的(2R,3S)，(2S,3R)，(2R,3R)和(2S,3S)立体异构体。当然，手性中 心定义为R构型还是S构型取决于不同变量的取代基。以下通用的立体异构 体是通式(II)的各种(2R,3S)，(2S,3R)，(2R,3R)和(2S,3S)构型的例子：

在一些实施方式中，通式(I)可以表示为通式(Ia)，以及它们药学 上可接受的盐：

其中：

X’是H，烷基，氨基磺酰基，烷氧基，氨基，酰基，芳基，或杂芳基， 其中每一个可被任意取代；

n是0-6；

R2是H，烷基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基， 杂环基，或卤代烷基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地是H，烷基，酰基，卤素，芳基，或杂芳基，其 中每一个可被任意取代。

在通式(Ia)的其它实施方式中，X’是烷基，烷氧基，氨基，氨基磺 酰基(被芳基，或诸如甲苯的芳烷基任意取代)；n是0或1；R2是芳基，取代 的芳基，杂芳基，或取代的芳基；以及R3，R4，R5和R6独立地是H，烷氧基， 烷基，或卤素。

通式(I)的代表性化合物包括以下化合物：

CB7993113:

CB7950998

在其它实施方式中，通式(II)可以表示为通式(IIa)，它们的立体异 构体；以及它们药学上可接受的盐：

其中：

X’是H，烷基，氨基磺酰基，烷氧基，酰基，芳基，或杂芳基，其中每 一个可被任意取代；

n是0-6；

R2是H，烷基，酰基，芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，杂芳基烷基， 杂环基，或卤代烷基，其中每一个可被任意取代；

R3，R4，R5和R6独立地是H，烷基，酰基，卤素，芳基，或杂芳基，其 中每一个可被任意取代。

在通式(IIa)的其它实施方式中，X’是烷基，烷氧基，氨基磺酰基(被 芳基，或诸如甲苯的芳烷基任意取代)；n是0或1；R2是芳基，取代的芳基， 杂芳基，或取代的芳基；以及R3，R4，R5和R6独立地是H，烷氧基，烷基， 或卤素。

通式(II)的代表性化合物包括以下化合物：

CMLD-2166

为了简便起见，本文定义和提及的化学部分可以是单价化学部分 (例如烷基、芳基等)或多价部分，在适当的结构情况下，这对本领域的技术人 员来说是清楚的。例如，在一些实施方式中，\"烷基”部分可指一价基团(例如 CH3-CH2-)，或者在其它实施方式中，二价连接部分可以是\"烷基”，在这种情 况下，本领域的技术人员将所述烷基理解为二价基团(例如-CH2-CH2-)，其等 同于术语\"烷撑基”。类似地，在需要二价部分时，二价基团部分表述为是\"烷 氧基”，\"烷基氨基”，\"芳氧基”，\"烷硫基”(alkylthio)，\"芳基”，\"杂芳基”， \"杂环基”，\"烷基”\"链烯基”，\"炔基”，\"脂族基”，或\"环烷基”的情况下，本领 域的技术人员将理解术语\"烷氧基”，\"烷基氨基”，\"芳氧基”，\"烷硫基”，\"芳 基”，\"杂芳基”，\"杂环基”，\"烷基”，\"链烯基”，\"炔基”，\"脂族基”，或\"环烷 基”是指对应的二价基团部分。

术语\"卤素”是指氟、氯、溴或碘的任何基。

术语\"酰基”是指烷基羰基，环烷基羰基，芳基羰基，杂环羰基， 或杂芳基羰基取代基，其中任何一个可进一步被取代基取代。酰基的例子包 括，但不限于，(C1-C6)烷酰基(例如甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰 基，己酰基，叔丁基乙酰基等)，(C3-C6)环烷基羰基(例如环丙基羰基，环丁基 羰基，环戊基羰基，环己基羰基等)，杂环羰基(例如吡咯烷基羰基，吡咯烷 基-2-酮-5-羰基，呱啶基羰基,哌嗪基羰基，四氢呋喃基羰基等)，芳酰基(例 如苯甲酰基)和杂芳酰基(例如苯硫基-2-羰基，苯硫基-3-羰基，呋喃基-2-羰基， 呋喃基-3-羰基，lH-吡咯甲酰-2-羰基，lH-吡咯甲酰-3-羰基，苯并[b]苯硫基-2- 羰基等)。此外，酰基的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基部分可以是各 自的定义中描述的基团的任一个。

术语\"烷基”是指饱和的非芳香烃链，可以是直链的或支链的，含 有指定数目的碳原子(这些包括但不限于甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，己 基)，它们可以被可选地插入N,O,S,SS,SO2,C(O),C(O)O,OC(O),C(O)N或 NC(O)。例如，C1-C6表明基团可以具有1至6个(包括端点)碳原子在它里面。

术语\"链烯基”是指包含至少一个双键的烷基。链烯基的例子包括， 但不限于，例如乙烯基，丙烯基，丁烯基，l-甲基-2-丁烯-l-基及类似。

术语\"炔基”是指包含至少一个三键的烷基。

术语\"烷氧基”是指-O-烷基。

术语\"氨基烷基”是指氨基取代的烷基。

术语\"芳基”是指单环、二环或三环的芳环体系，其中，每个环的 0,1,2,3或4个原子可被取代基取代。典型的芳基包括，但不限于，苯基，萘 基，蒽基，薁基，芴基，茚满基，茚基，萘基，苯基，四氢萘基及其类似。

术语\"芳基烷基”是指芳基取代的烷基或烷基取代的芳基。

术语\"环烷基”是指饱和的或部分不饱和的环烃基团，具有3至12 个碳，例如3至8个碳，和例如是3至6个碳，其中，另外的环烷基还可以 被任意取代。典型的环烷基包括，但不限于，环丙基，环丁基，环戊基，环 戊烯基，环己基，环己烯基，环庚基，环辛基及类似。

术语\"杂芳基”是指芳香性的5-8元单环体系，8-12元二环体系， 或11-14元三环体系，如果是单环则具有1-3个杂原子，如果是二环则具有 1-6个杂原子，如果是三环则具有1-9个杂原子，所述杂原子选自O,N或S(例 如，碳原子和分别与单环、二环或三环对应的1-3,1-6或1-9个N,O或S杂 原子)，其中，每个环的0,1,2,3或4个原子可被取代基取代。典型的杂芳基 包括，但不限于，吡啶基，呋喃基或呋喃基(furyl or furanyl)，咪唑基，苯 并咪唑基，嘧啶基，苯硫基或噻吩基，哒嗪基，吡嗪基，喹啉基，吲哚基， 噻唑基，萘啶基及类似。

术语\"杂芳基烷基”是指杂芳基取代的烷基。

术语\"杂环基”是指非芳香性的5-8元单环体系，8-12元二环体系， 或11-14元三环体系，如果是单环则具有1-3个杂原子，如果是二环则具有 1-6个杂原子，如果是三环则具有1-9个杂原子，所述杂原子选自O,N或S(例 如，碳原子和分别与单环、二环或三环对应的1-3,1-6或1-9个N,O或S杂 原子)，其中，每个环的0,1,2或3个原子可被取代基取代。典型的杂环基包 括，但不限于，哌嗪基，吡咯烷基，二氧六环基(dioxanyl)，吗啉基，四氢呋 喃基及其类似。

术语\"卤代烷基”是指具有1，2，3或多个卤素原子连接于其上的 烷基。典型的卤代烷基包括，但不限于，氯甲基，溴乙基，三氟甲基及其类 似。

术语\"任意取代”意思是特定的基团或部分，其是未取代的，或者 被一个或多个(一般是1-4个取代基)取代基取代，所述取代基独立地选自本文 \"取代基”定义中列出的取代基的组，或另有指定的。取代基可以是\"分离的” 取代基，例如，结合于苯环中不同碳原子的卤素基和烷氧基，或者取代基可 以是彼此\"堆叠的”，例如，被氨基磺酰基取代的酰基(诸如甲酰)，而其中的氨 基磺酰基是被芳基烷基(诸如甲苯)取代的。

术语\"取代基”是指在被取代的基团或部分的任一原子处置换氢的 基团，以及在烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，杂环基，杂芳基，酰基， 氨基的基团上的被取代的基团的任一原子处\"取代”。合适的取代基包括，但 不限于，卤素，羟基，氧代，硝基，卤代烷基，烷基，链烯基，炔基，烷芳 基，芳基，芳烷基，烷氧基，芳氧基，氨基，氨基磺酰基，酰氨基，烷基羰 基，芳基羰基，氨基烷基，烷氧羰基，羧基，羟烷基，烷硫基，CF3，N-吗啉 基(morphilino)，苯硫基，链烷磺酰基(alkanesulfonyl)，芳基磺酰基，烷基亚磺 酰胺基(alkanesulfonamido)，芳烃亚磺酰胺基(arene sulfonamido)，芳烷基亚磺 酰胺基(aralkyl sulfonamido)，烷基羰基，酰氧基，氰基或脲基。在某些情况下， 两个取代基，连同它们所连接的碳一起，能够形成环。

在许多情况下，在制备本发明化合物的过程中使用保护基。如本 文所用，术语\"保护的”意思是具有指定的部分附加于其上的保护基。在本发 明的一些优选实施方式中，化合物含有一个或多个保护基。各种各样的保护 基可应用于本发明的方法中。通常，保护基将化学功能惰性给予特定的反应 条件，并且能够在分子中增加或去除此类功能基，而基本上不会破坏分子的 其余部分。

碧尤卡什等人(Beaucage et al.)公开了代表性的羟基保护基(四面 体1992年,48卷,2223-2311页)(Tetrahedron 1992,48,2223-2311)。格林和沃 茨,有机合成中的保护基,第2章,第2版,约翰威利国际出版公司,纽约, 1991年(Greene and Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Chapter 2,2d ed.,John Wiley Sons,New York,1991)和寡核苷酸及其类似物,一种实用方 法,埃克斯坦,F.主编,IRL出版社,纽约,1991年(Oligonucleotides And Analogues A Practical Approach,Ekstein,F.Ed.,IRL Press,N.Y,1991)进一步公 开了更多的羟基保护基，以及其它代表性保护基。羟基保护基的例子包括， 但不限于，叔丁基，叔丁氧甲基，甲氧甲基，四氢吡喃基，1-乙氧乙基，1-(2- 氯乙氧基)乙基，2-三甲基甲硅烷基乙基，对氯苯基，2,4-二硝基苯基，苄基， 2,6-二氯苄基，二苯基甲基，p,p\'-二硝基二苯甲基，对硝基苄基，三苯基甲基， 三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基，叔丁基二苯基 甲硅烷基，三苯基甲硅烷基，苯甲酰甲酸酯，乙酸酯，氯乙酸酯，三氯乙酸 酯，三氟乙酸酯，新戊酸酯(pivaloate)，苯甲酸酯，对苯基苯甲酸酯，9-芴基 甲基碳酸酯，甲磺酸酯和甲苯磺酸酯。

氮-或氨基-保护基对酸处理稳定而使用碱处理被选择性去除，并 且它们被用来制备反应性氨基，选择性用于取代。典型的氨基-保护基包括， 但不限于，氨基甲酸酯保护基，诸如2-三甲基甲硅烷基乙氧羰基(Teoc)，1- 甲基-1-(4-联二苯基)乙氧羰基(Bpoc)，叔丁氧羰基(BOC)，烯丙氧基羰基 (Alloc)，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，和苄氧羰基(Cbz)；酰胺保护基，诸如甲酰 基，乙酰基，三卤乙酰基，苯甲酰基，和硝基苯基乙酰基；磺酰胺保护基， 诸如2-硝基苯磺酰；以及亚胺和环状亚胺保护基，诸如苯二甲酰亚氨基和二 硫杂琥珀(dithiasuccinoyl)。

AhR调节剂：治疗应用与药物组合物

本文描述的是通式(I)或通式(II)新型小分子AhR调节剂，用于治 疗患有诸如癌症的增值性病症或具有患上此类病症风险的受治疗者。本文描 述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂诸如是AhR抑制剂，例如CB7993113 和CMLD-2166，以及非组成型AhR激动剂，例如CB7950998，将其通过引 起对受治疗者有效治疗的任何合适路线可给予有需要的受治疗者。

因此，在一些方面，本文提供的是调节受治疗者的组成型AhR 活性的方法。这样的方法包含向具有组成型AhR活性的受治疗者给予治疗有 效量的本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂。在这些方面的一些实 施方式中，AhR调节剂是通式(I)的AhR抑制剂，例如CB7993113。在这些方 面的一些实施方式中，AhR调节剂是通式(II)的AhR抑制剂，例如 CMLD-2166。在这些方面的一些实施方式中，AhR调节剂是通式(I)非组成型 AhR激动剂，例如CB7950998或通式(II)。

术语\"受治疗者”和\"个体”在本文可互换使用，且是指动物，例如 人类，本文描述的通式(I)或通式(II)的小分子AhR调节剂的接受者，所述小分 子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，和非组 成型AhR激动剂，诸如CB7950998。对于那些疾病状态的治疗，术语\"受治 疗者”是指特定的动物，其中所述疾病状态对于如人类受治疗者的特定动物而 言是特定的。术语\"非人类动物”和\"非人类哺乳动物”在本文可互换使用，且包 括哺乳动物，诸如大鼠、小鼠、兔子、绵羊、猫、狗、奶牛、猪和非人类灵 长类动物。术语\"受治疗者”也包括任何脊椎动物，包括但不限于哺乳动物、 爬行动物、两栖动物和鱼类。

在一些方面，本文提供的是治疗患有癌症或癌性病变或者具有患 上癌症或癌性病变风险的受治疗者的方法，该方法包含向患有癌症或癌性病 变或者具有患上癌症或癌性病变风险的受治疗者给予治疗有效量的本文描述 的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂。在这些方面的一些实施方式中，AhR 调节剂是通式(I)的AhR抑制剂，例如CB7993113。在这些方面的一些实施方 式中，AhR调节剂是通式(II)的AhR抑制剂，例如CMLD-2166。在这些方面 的一些实施方式中，AhR调节剂是通式(I)非组成型AhR激动剂，例如 CB7950998或通式(II)。

术语\"癌症”和\"癌性的”是指或描述哺乳动物的生理状态，所述生 理状态的一般特征在于不受调控的细胞生长或增殖，这干扰了身体器官和系 统的正常机能。因此，本文使用的术语\"癌症”或\"肿瘤”是指细胞不受控制的生 长，这干扰了的身体器官和系统，包括癌症干细胞和肿瘤血管微环境的正常 机能。患有癌症或肿瘤的受治疗者是其体内存在客观上可测量的癌细胞的受 治疗者。癌从原始位置转移并在重要器官增殖，其通过受影响器官的功能退 化最终导致受治疗者死亡。诸如白血病的造血系统癌症在受治疗者中能够在 竞争力上胜过正常造血区室(hematopoietic compartments)，从而导致造血功能 衰竭(以贫血、血小板减少症和嗜中性白血球减少症的形式)，最终造成死亡。 包括在本定义内的是良性肿瘤和恶性癌症，以及休眠肿瘤或微小转移灶。

\"转移”是指癌从它的最初位点向身体其它地方的扩散。癌细胞能 够脱离原发肿瘤，进入淋巴管和血管，通过血流进行循环，且在身体其它位 置的正常组织中在远端病灶(转移)生长。转移可以是局部转移或远端转移。转 移是连续的过程，视脱离原发肿瘤的肿瘤细胞而定，通过血流移动，且停止 在远位点。在新位点，细胞建立了血液供应，且能够生长以形成危及生命的 量。肿瘤细胞内刺激性和抑制性分子通路都调控这种行为，且肿瘤细胞和远 位点宿主细胞之间的相互作用也是显著的。

转移的监测，除了监测具体症状外，还经常通过单独或结合使用 以下方法进行：磁共振成像(MRI)扫描，计算机断层(CT)扫描，全血计数和血 小板计数，肝功能检查，胸部X-光检查和骨扫描。

因此，使用本文各个方面描述的组合物和方法能够治疗的癌症包 括，但不限于，癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病(leukemia)。此类 癌症更具体的例子包括，但不限于，乳腺癌；基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌； 骨癌；脑癌和CNS癌；腹膜癌；子宫颈癌；绒毛膜癌；结肠直肠癌；结缔组 织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食管癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠 癌)(gastric cancer(including gastrointestinal cancer))；成胶质细胞瘤；肝癌； 肝细胞瘤；上皮内瘤；肾脏癌或肾脏癌(kidney or renal cancer)；喉癌；非 白血性白血病；肝癌；肺癌(例如小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺腺癌，和肺 鳞状细胞癌)；淋巴瘤，包括霍金奇淋巴瘤和非霍金奇淋巴瘤；黑素瘤；骨髓 瘤；成神经细胞瘤；成胶质细胞瘤；口腔癌(例如，唇、舌、口和咽)；卵巢癌； 胰腺癌；前列腺癌；视网膜成神经细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统 癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状上皮细胞癌；胃癌(stomach cancer)； 睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；以及其 它癌瘤和肉瘤；以及B-细胞淋巴瘤(包括轻度/滤泡性非霍金奇淋巴瘤(NHL)； 小淋巴细胞(SL)NHL；中度/滤泡性NHL；中度弥散性NHL；高度成免疫细 胞NHL；高度成淋巴细胞NHL；高度小无核裂细胞NHL；大肿块NHL；外 套细胞淋巴瘤；AIDS-相关淋巴瘤和特发性巨球蛋白血症)；慢性淋巴细胞性 白血病(CLL)；急性淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞性白血病；慢性成髓细 胞性白血病；和移植后淋巴增生性障碍(PTLD)，以及与瘢痣病相关的异常血 管增生，水肿(诸如与脑肿瘤有关的水肿)和梅格斯综合征。

在一些实施方式中，癌症可以是实体瘤。如本文所用，\"实体瘤” 是指通常不含包囊或液体区域的不正常组织的块。实体瘤可以是良性的或恶 性的。不同类型的实体瘤以形成它们的细胞的类型命名。实体瘤的非限制性 实施例是肉瘤，癌瘤，和淋巴瘤。非白血性白血病和其它血液癌症通常不形 成实体瘤，且因此不包括在本文所用的术语\"实体瘤”内。

在本文描述的这些方面的一些实施方式中，受治疗者是指患有癌 症或癌性病变风险增大的人类受治疗者。患有癌症或肿瘤的受治疗者是其体 内存在着客观上可测量的癌细胞的受治疗者。癌性病变风险增大的受治疗者 包括带有已知的癌症遗传风险因子的受治疗者，也就是这些人有癌症的家族 病史。在本文描述的这些方面的一些此类实施方式中，癌症是乳腺癌。在本 文描述的这些方面的一些此类实施方式中，癌症是实体瘤。

在本文描述的这些方面的一些实施方式中，治疗癌症或癌性病变 的方法进一步包含选择、诊断或鉴别患有癌症或癌性病变的受治疗者的步骤。 在这样的实施方式中，通过本领域技术人员对受治疗者体内癌细胞或肿瘤存 在情况的客观测定来鉴定受治疗者患有癌症。客观测定除了监测与癌症有关 的具体症状，还通过如下方法的单独或结合使用来进行：组织活检，全血计 数和血小板计数，尿液检测，磁共振成像(MRI)扫描，计算机断层(CT)扫描， 肝功能检查，胸部X-光检查和骨扫描。

给药、剂量和持续时间

本文描述的通式(I)或通式(II)的小分子AhR调节剂例如是AhR抑 制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，以及非组成型AhR激动剂，诸如 CB7950996，能够以这样方式被配制，剂量服用与给药，所述方式与用于治 疗本文描述的癌症和癌性病变的良好的医学实践相一致，癌症诸如是乳腺癌。 就此而论，需要考虑的因素包括被治疗的特定疾病或疾病的类型，例如癌症， 接受治疗与否，接受治疗的特定受治疗者，个体受治疗者的临床情况，疾病 的原因，药剂递送位点，给药方法，给药时间安排，和执业医师已知的其它 因素。

因此，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的\"治疗有 效量”是指预防、改善、治疗或稳定疾病或症状所必需的最小剂量，而所述疾 病或症状诸如是由组成型AhR活性所介导的，其中，所述小分子AhR调节剂 例如是AhR抑制剂，诸如是CB7993113和CMLD-2166，以及非组成型AhR 激动剂，诸如CB7950996，给药是考虑到上述因素，且如本文所用。

在与癌症或其它增殖性疾病相关的那些方面和实施方式中，本文 描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的\"治疗有效量”是进展之前的时 间延长(无进展生存期的持续时间)，抑制或预防肿瘤侵袭，或治疗或预防肿瘤、 休眠肿瘤或微小转移灶发生或复发所必需的最小量。在一些这样的实施方式 中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸 如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996， 与一种或多种目前使用的药剂任意配制，所述药剂用于预防或治疗癌症或患 癌症的风险。此类其它药剂的有效量取决于制剂中存在的AhR抑制剂或非组 成型AhR激动剂的量，疾病或治疗的类型，以及本文讨论的其它因素，如本 领域技术人员所理解的那样。这些通常以本文之前使用的相同的剂量和给药 路线被使用，或者以约1至99％在此之前采用的剂量而被使用。

如本文所用的有效量也包括足以延迟癌症症状发展，改变癌症进 程(例如但不限于，减缓癌症症状进展，诸如肿瘤生长)，或逆转癌症或肿瘤症 状的量。因此，具体指定精确的\"有效量”是不可能的。然而，对于任何给定 的情况，本领域技术人员只使用常规实验就能确定适当的\"有效量”。

通过细胞培养或实验动物中的标准制药操作，例如确定LD50(对 群体的50％致死的剂量)和ED50(对群体的50％治疗有效的剂量)的标准制药 操作，能够确定本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的有效量、毒 性和治疗效果，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如CB7993113 和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。根据采用的剂 型和利用的给药路线，剂量是可以变化。毒性和治疗效果之间的剂量比是治 疗指数，能够表示为LD50/ED50的比率。显示大的治疗指数的组合物和方法 是优选的。从最初细胞培养检测结果能够估计治疗有效剂量。此外，可在动 物模型中配制一剂以达到包括IC50的循环血浆浓度范围(即AhR抑制剂或非 组成型AhR激动剂的浓度)，其达到了症状的半-最大抑制，如在细胞培养物 中或在合适的动物模型中所测定的。通过高效液相色谱法可测量血浆中的水 平。通过合适的生物监测法可监测任何具体剂量的效果。剂量可由内科医师 决定，并且必要时，可调整剂量以适应治疗的观察到的效果。

根据疾病的类型和严重程度，大约1μg/kg至100mg/kg(例如 0.1-20mg/kg)本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂是给予受治疗者 的起始候选剂量范围，例如通过一次或多次单独给药或通过连续灌输，其中 所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166， 或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。典型的日常剂量范围可以从约1 μg/kg至约100mg/kg或更多，取决于上面提到的因素。对于几天或更长时间 的重复给药，取决于病情，治疗持续至癌症被治愈，如上面描述的方法或本 领域已知的方法所测量到的。然而，其它剂量方案可能是有用的。通过常规 技术和检测，诸如本文描述的，或本领域技术人员已知的，可轻松地监测本 文描述的治疗方法的进展。在其它实施方式中，这样的给药方案可与化学治 疗给药方案联合使用，作为治疗局部复发或转移性乳腺癌的一线治疗方案。

本文描述的治疗方法的持续时间可持续到只要医学上有表征，或 者直至达到所需的治疗效果(例如本文描述的那些效果)。在特定实施方式中， AhR调节剂的给药，即\"AhR抑制剂治疗”或\"非组成型AhR激动剂治疗”持续 至少1个月，至少2个月，至少4个月，至少6个月，至少8个月，至少10 个月，至少1年，至少2年，至少3年，至少4年，至少5年，至少10年， 至少20年，或者至少是受治疗者的一生。

根据已知方法，诸如作为静脉团注给药，或通过一段时间的连续 灌输，通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、皮下的、关节内、滑膜腔内内、鞘膜 内、口腔、局部或吸入途径，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂， 例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂， 诸如CB7950996，可给予受治疗者，例如人类受治疗者。如果例如广泛的副 作用或毒性与AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂有关，那么可使用局部给 药。离体(ex vivo)策略也可用于治疗应用。

本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂，例如AhR抑制 剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如 CB7950996，其典型的给药方式包括，但不限于，注射，灌输，吸入(例如鼻 内或气管内)，食入，直肠和局部(包括口腔和舌下)给药。如本文所用的短语\"肠 胃外投药”和\"非经肠给药”是指除肠内和局部给药之外的方式，通常通过注 射。如本文所用，\"注射”包括，但不限于，静脉内、肌肉内、动脉内、鞘膜 内、心室内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、 关节内、子囊、蛛网膜下、脊柱内、脑脊髓内以及胸骨内注射与灌输。如本 文所用的短语\"全身给药”，\"全身性给药”，\"外周给药”和\"外周性给药”是指给 予本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如 CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996，而 不是直接给药至靶点、组织或器官，诸如给药到肺，这样它进入受治疗者的 循环系统，因此进行新陈代谢和其它类似过程。

在一些实施方式中，通过静脉内灌输或注射给予本文描述的通式 (I)或通式(II)小分子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和 CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。在一些实施方式中， 当需要局部治疗时，在肿瘤位点处或其附近，通过病灶内给药可给药本文描 述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113 和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996，其中肿瘤例如 是患乳腺癌的受治疗者的乳腺中的肿瘤。另外，在一些实施方式中，通过脉 冲灌输，特别是以低于抑制剂或非组成型激动剂的剂量，可将本文描述的AhR 抑制剂或非组成型AhR激动剂给药。优选地，通过注射给药，最优选，通过 静脉内或皮下注射，部分取决于给药是短期的还是长期的。

在一些实施方式中，当疾病或肿瘤位置允许的情况下，且注射能 够周期性重复时，可通过局部给药，例如通过直接注射，给予本文描述的通 式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和 CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。本文描述的AhR 抑制剂或非组成型AhR激动剂也可全身递送至作用对象上或直接递送至肿瘤 细胞，例如，递送至肿瘤，或在手术摘除肿瘤后递送至瘤床，以便预防或降 低休眠肿瘤或微小转移灶的局部复发或转移。

药物制剂

在一些方面，通过将具有所需纯度的本文描述的通式(I)或通式(II) 小分子AhR调节剂与一个或多个药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(雷明 登氏药学全书，第 16版，奥索尔,A.主编(1980年))(Remington\'s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))混合后以冻干制剂或 水溶液的形式，能够制备得到AhR抑制剂的药物制剂，所述小分子AhR调节 剂为例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激 动剂，诸如CB7950996。本文描述的这种AhR抑制剂和非组成型AhR激动 剂的此类药物制剂包括配制成药物组合物或药物制剂，用于肠胃外给药，例 如，静脉注射给药；粘膜给药，例如，鼻内给药；肠内给药，例如口服；局 部给药，例如，经皮给药；眼部给药，或其它方式的给药。

如本文所用，短语\"药学上可接受的”是指这样的化合物、材料、 组合物和/或剂型：在合理的医学判断范围内，它们适合与人类和动物的组织 接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或者其它问题或并发症，与合理 的收益/风险比相称。如本文所用的短语\"药学上可接受的载体”意思是药学上 可接受的材料、组合物或载体(vehicle)，诸如液体或固体填料、稀释剂、赋形 剂、溶剂、介质、封装材料、加工助剂(例如，润滑剂、滑石镁、钙或硬脂酸 锌或者硬脂酸)或封装材料用溶剂，参与保持本文描述的通式(I)或通式(II)小分 子AhR调节剂的活性，携带它们或者将它们从一个器官或身体的一部分运输 到另一个器官或身体的另一部分，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制 剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如 CB7950996。

采用的剂量或浓度对接受者是无毒的可接受的载体、赋形剂或稳 定剂，它们的一些非限制性例子包括pH缓冲液，诸如磷酸、柠檬酸和其它有 机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；润滑剂，诸如硬脂酸镁、月桂基 硫酸钠和滑石；赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡(suppository waxes)；油，诸如 花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；防腐剂(诸如十 八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚，丁 醇或苯甲醇；烷基对羟基苯甲酸酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸 丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约 10残基)的多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白，明胶，HDL，LDL，或免疫球蛋 白；亲水聚合物，诸如聚乙烯吡咯酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酸，天冬 氨酸，组氨酸，精氨酸，或赖氨酸；单糖，二糖，和其它碳水化合物，包括 甘露糖，淀粉(玉米淀粉或马铃薯淀粉)，或糊精；纤维素及其衍生物，诸如羧 甲基纤维素钠，甲基纤维素，乙基纤维素，微晶纤维素和醋酸纤维素；螯合 剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖，葡萄糖，乳糖，甘露醇，海藻糖或山梨糖 醇；形成盐的平衡离子，诸如钠离子；金属复合物(例如Zn-蛋白复合物)；二 醇类，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯； 琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水； 林格氏溶液；聚酯，聚碳酸酯和/或聚酐；C2-C12醇，诸如乙醇；西黄蓍胶粉； 麦芽；和/或非离子表面活性剂，诸如吐温TM(TWEENTM)，普郎尼克TM (PLURONICSTM)或聚乙二醇(PEG)；和/或其它用于药物制剂的无毒的可配 伍的物质。润湿剂，着色剂，释放剂，涂层剂，甜味剂，调味剂，香料，防 腐剂和抗氧化剂也可存在于所述制剂中。

在一些实施方式中，包含AhR抑制剂的治疗制剂包含药学上可接 受的盐，典型地，例如是氯化钠，且优选是约以生理浓度。可选地，本文描 述的制剂可含有药学上可接受的防腐剂。在一些实施方式中，防腐剂浓度范 围从0.1至2.0％，一般是体积比。合适的防腐剂包括在药学领域已知的那些 防腐剂。防腐剂的例子有苯甲醇，苯酚，间甲酚，对羟基苯甲酸甲酯和对羟 基苯甲酸丙酯。可选地，本发明的制剂能够包含0.005至0.02％浓度的药学 上可接受的表面活性剂。

在本文描述的这些方面的一些实施方式中，本文描述的通式(I)或 通式(II)小分子AhR调节剂，例如是AhR抑制剂，诸如CB7993113和 CMLD-2166，或者非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996，能够被专门配制 用于以固体、液体或凝胶形式将化合物给予受治疗者，包括适合于以下给药 方式的那些形式:(1)口服给药，例如，灌服(含水或无水溶液或悬浮液)，锭剂， 糖衣丸，胶囊，药丸，药片(例如针对口腔、舌下，和全身吸收的那些)，丸剂， 粉末，颗粒，糊剂，用于舌部的；(2)肠胃外给药，作为例如无菌溶液或悬浮 液，或者持续释放的制剂，通过例如皮下注射，肌内注射，静脉注射或硬膜 外注射来给药；(3)局部应用，例如作为用于皮肤的乳膏，软膏，或者控释的 膏药或喷雾剂；(4)阴道内或直肠内给药，例如，作为阴道栓剂，乳膏或泡沫； (5)舌下给药；(6)眼部给药；(7)经皮给药；(8)粘膜给药；或(9)鼻内给药。 此外，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂，例如是AhR抑制剂， 诸如CB7993113和CMLD-2166，或者非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996， 可以植入患者体内或使用药物递送系统注射。参见，例如，厄科特,等人,药 理学与毒理学年评.24卷:199-236页(1984年)(Urquhart,et al.,Ann.Rev. Pharmacol.Toxicol.24:199-236(1984))；刘易斯,主编.\"杀虫剂与医药的控释\" (普林厄姆出版社,纽约,1981年)(Lewis,ed.\"Controlled Release of Pesticides and Pharmaceuticals\"(Plenum Press,New York,1981))；美国专利第3,773,919 号；和美国专利第35 3,270,960号。剂型的例子包括，但不限于：片剂；囊片； 胶囊，诸如硬明胶胶囊和软弹性明胶胶囊；扁囊剂；锭剂；糖锭；分散体； 栓剂；软膏；巴布剂(泥敷剂)；糊剂；粉剂；敷料剂；乳膏；硬膏；溶液；膏 药；气溶胶(例如鼻用喷雾剂或吸入器)；凝胶剂；液体，诸如悬浮液(例如含 水或无水液体悬浮液，水包油型乳剂，或油包水液体乳剂)，溶液，和酏剂； 和能够再生提供液体剂型的无菌固体制剂(例如结晶固体或非晶态固体)。

在一些实施方式中，可以通过各种途径将本文描述的通式(I)或通 式(II)小分子AhR调节剂的肠胃外剂型给予患有癌症或癌性病变风险增大的 受治疗者，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如CB7993113和 CMLD-2166，以及非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996，所述各种途径包 括，但不限于，皮下给药，静脉注射(包括弹丸注射)，肌内给药和动脉注射。 由于肠胃外剂型的给药一般绕开患者对污染物的自然抵抗措施，所以肠胃外 剂型优选是无菌的或在给予患者前能够成为无菌的。肠胃外剂型的例子包括， 但不限于，预备用于注射的溶液，预备用于溶解在或悬浮在药学上可接受的 载体中用于注射的干品，预备用于注射的悬浮液，控释肠胃外剂型和乳剂。

提供本文描述的能够用于肠胃外剂型的合适的载体是本领域技术 人员公知的。例子包括，但不限于：无菌水；USP注射用水；盐水溶液；葡 萄糖溶液；含水载体，诸如但不限于氯化钠注射液，林格氏注射液，葡萄糖 注射液，葡萄糖和氯化钠注射液，和乳酸林格氏注射液；水溶性载体，诸如 但不限于乙醇，聚乙二醇，和丙二醇；无水媒介物，诸如但不限于玉米油， 棉籽油，花生油，芝麻油，油酸乙酯，肉豆蔻酸异丙酯，和苯甲酸苄酯。

在一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调 节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，以及非组成型AhR 激动剂，诸如CB7950996，被制成适合口服给药，例如作为分离剂型，诸如 但不限于片剂(包括但不限于刻痕片或包衣片)，药丸，囊片，胶囊，咀嚼片， 粉包，扁囊剂，锭剂，干胶片，喷雾剂，或者液体，诸如但不限于，糖浆剂， 酏剂，在水液体中的溶液或悬浮液，非水液体，水包油乳剂，或油包水液体 乳剂。这样的组合物含有公开组合物的预定剂量的药学上可接受的盐，且可 以通过本领域技术人员已知的制药方法制备。通常参见雷明顿药物科学，第 18版，A.R.热纳罗主编，麦克出版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚洲(1990 年)(Remington\'s Pharmaceutical Sciences,18th ed.,Mack Publishing,Easton,Pa. (1990))。

由于片剂和胶囊易于给药，所以它们代表最有利的固体口服剂的 单位形式，在这种情况下，使用固体药用赋形剂。如果需要，可以通过标准 含水或无水技术对药片包衣。可以通过任何药用方法制备这些剂型。通常， 通过以下方法制备药物组合物和剂型：将活性组分与液体载体，细碎的固体 载体或二者均匀且紧密地混合，然后如果有必要，将产物造型为所需的形状。

按照常规的药用配料技术，通过将本文描述的通式(I)或通式(II) 小分子AhR调节剂的药学上可接受的盐与至少一种赋形剂紧密混合来制备组 合物的典型口服剂型，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如 CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。赋 形剂可采用各种形式，取决于所需组合物的给药形式。例如，适合用于口服 的液体或气溶胶剂型的赋形剂包括，但不限于，水，二醇，油，醇，调味剂， 防腐剂，和着色剂。适合用于固体口服剂型(例如粉末，片剂，胶囊，和囊片) 的赋形剂的例子包括，但不限于，淀粉，糊精，微晶纤维素，高岭土，稀释 剂，颗粒剂，润滑剂，粘合剂，和崩解剂。

适合用于本文描述的药物制剂的粘合剂包括，但不限于，玉米淀 粉，马铃薯淀粉，或其它淀粉，明胶，诸如阿拉伯胶的天然树胶或合成树胶， 海藻酸钠，海藻酸，其它藻酸盐，西黄蓍胶粉，瓜尔胶，纤维素及其衍生物(例 如，乙基纤维素，醋酸纤维素，羧甲基纤维素钙，羧甲基纤维素钠)，聚乙烯 吡咯烷酮，甲基纤维素，预胶凝淀粉，羟丙基甲基纤维素，(例如第2208,2906, 2910号)，微晶纤维素，和它们的混合物。

适合用于本文描述的药物制剂的填料的例子包括，但不限于，滑 石，碳酸钙(例如颗粒或粉末)，微晶纤维素，粉末状纤维素，葡萄糖粘合剂， 高岭土，甘露醇，硅酸，山梨糖醇，淀粉，预凝胶淀粉，和它们的混合物。 本文描述的药物组合物中的粘合剂或填料一般存在为药物组合物的约50至 99重量百分比。

用于本文描述的口服药物制剂的崩解剂，以使片剂在接触含水环 境时会崩解。对于改变活性成分的释放既不太少也不太多的足够量的崩解剂 可以形成本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的固体口服剂型，所 述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166， 或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。崩解剂的量可根据制剂类型而变 化，这是本领域技术人员很容易辨别的。能够用来形成口服药物制剂的崩解 剂包括，但不限于琼脂，海藻酸，碳酸钙，微晶纤维素，交联羧甲基纤维素 钠，交聚维酮，波拉克林钾，淀粉羟基乙酸钠，马铃薯或木薯淀粉，其它淀 粉，预凝胶淀粉，粘土，其它藻胶，其它纤维素，树胶，和它们的混合物。

可用来形成本文描述的AhR抑制剂的口服药物制剂的润滑剂包 括，但不限于，硬脂酸钙，硬脂酸镁，矿物油，轻质液体石蜡，甘油，山梨 糖醇，甘露醇，聚乙二醇，其它二醇，硬脂酸，月桂基硫酸钠，滑石，氢化 植物油(例如花生油，棉籽油，葵花籽油，芝麻油，橄榄油，玉米油，和豆油)， 硬脂酸锌，油酸乙酯，月桂酸乙酯，琼脂和它们的混合物。额外的润滑剂包 括，例如，syloid硅胶(气相200(200)，由马里兰州巴尔 的摩市的W.R.格蕾丝公司(W.R.Grace Co.of Baltimore,Md.)制造)，合成二氧 化硅的凝聚型气溶胶(由德克萨斯州Piano的德固赛公司(Degussa Co.of Piano, Tex.)销售)，(马萨诸塞州波士顿的卡伯特公司(Cabot Co. of Boston,Mass.)出售的焦化二氧化硅产品)，和它们的混合物。如果使用，润 滑剂一般以小于1％的药物组合物或剂型的量而存在于药物组合物或剂型中。

在其它实施方式中，提供了无乳糖药物制剂和剂型，其中，这样 的组合物优选几乎不含有，如果有的话为乳糖或其它单糖或二糖。如本文所 用，术语\"无乳糖”意思是，如果有的话，存在的乳糖的量不足以实质上提高 活性组分的降解速率。公开的无乳糖组合物可包含本领域已知且列在USP (XXI)/NF(XVI)上的赋形剂，所述文献通过引用并入本文。

在一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调 节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR 激动剂，诸如CB7950996，因为水能促进一些化合物的降解，所以所述小分 子AhR调节剂口服制剂进一步包含无水药物组合物和如下剂型：所述剂型包 含作为活性组分的本文描述的AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂。例如，水 (例如5％)的加入在制药领域被广泛接受，作为模拟长期储存的方法，以便确 定诸如保质期的性质或制剂随时间的稳定性。参见，例如延斯T.卡斯滕森,药 物稳定性:原理 实践,379-80页(第2版,马塞尔·德克尔出版社,纽约:1995 年)(Jens T.Carstensen,Drug Stability:Principles Practice,379-80(2nd ed., Marcel Dekker,NY,N.Y.:1995))。使用无水或低水分原料在低水分或低湿度条 件能够制备本文描述的无水药物组合物和剂型。当药物组合物和剂型包含乳 糖和至少一种包含初级或二级胺的活性成分的，如果预计在制造，包装，和/ 或存藏过程中会与水分和/或湿气有实质性接触，那么所述药物组合物和剂型 优选是无水的。优选使用已知的避免接触到水的材料包装无水组合物，这样 使其能够包括在合适的处方试剂盒中。合适的包装形式的例子包括，但不限 于密封箔，塑料包转，带有或没有干燥剂的单位计量容器(例如小瓶)包装，吸 塑包装，和条带包装。

本文描述的AhR抑制剂，诸如通式(I)或通式(II)小分子，例如 CB7993113和CMLD-2166，以气溶胶形式或通过喷雾作用可直接给药至气 道。因此，在一些实施方式中，对于用作气溶胶，本文描述的AhR抑制剂， 诸如通式(I)或通式(II)小分子，例如CB7993113和CMLD-2166，可以与合适 的推进剂一起包装在加压的喷雾剂容器内，所述推进剂例如是烃推进剂，像 带有常规佐剂的丙烷，丁烷或异丁烷，。在其它实施方式中，AhR抑制剂能 够以非加压形式给药，诸如在喷雾器或雾化器中。

本领域内公知术语\"喷雾作用”包括使液体变为细喷雾。优选地， 通过这样的喷雾作用，较大的液体以控制方式产生大小均匀的小液滴。通过 任何合适的方式都能够实现喷雾作用，包括通过使用很多今天已知的且市售 的喷雾器。众所周知，在喷雾作用过程中可使用任何合适的气体来施加压力， 优选的气体是对本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂是化学惰性 的那些，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如CB7993113和 CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。典型的气体包括， 但不限于氮气，氩气或氦气。

在其它实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调 节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR 激动剂，诸如CB7950996，以干粉形式可直接给药至气道。对于用作干粉形 式的，通过使用吸入器可将AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂进行给药。典 型的吸入器包括压力定量吸入器和干粉吸入器。

以说明的方式，合适的粉末组合物包括本文描述的通式(I)或通式 (II)小分子AhR调节剂的粉末制剂，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制 剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如 CB7950996，它们与乳糖或其它适合支气管内给药的惰性粉末充分混合。粉 末组合物可通过喷雾剂分配器或装在易碎胶囊中而进行给药，受治疗者可将 所述易碎胶囊插入刺破胶囊并以适合吸入的稳定气流将粉末吹出的装置中。 组合物可包括推进剂，表面活性剂，和共溶剂，并且可被填充进常规喷雾剂 容器中，所述常规喷雾剂容器是由合适的配量阀闭合的。

递送至呼吸道的气溶胶是本领域已知的。例如，参见阿杰伊,A.和 加伦,J.医药研究,1卷:565-569页(1990年)(Adjei,A.and Garren,J.Pharm. Res.,1:565-569(1990))；扎嫩,P.和拉姆,J.-W.J.国际制药杂志,114卷: 111-115页(1995年)(Zanen,P.and Lamm,J.-W.J.Int.J.Pharm.,114:111-115 (1995))；贡达,I.\"用于将治疗性诊疗剂递送至呼吸道的喷雾剂\"治疗性药物载 体系统的评论,6卷:273-313页(1990年)(Gonda,I.\"Aerosols for delivery of therapeutic an diagnostic agents to the respiratory tract,\"in Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems,6:273-313(1990))；安德森等人,美国呼吸道 疾病评论,140卷:1317-1324页(1989年)(Anderson et al.,Am.Rev.Respir.Dis., 140:1317-1324(1989)))，气溶胶也具有系统递送肽和蛋白质的潜力(巴顿和普 拉茨,先进药物输送评论,8卷:179-196页(1992年))(Patton and Platz, Advanced Drug Delivery Reviews,8:179-196(1992))；蒂姆赛因等人,国际制药 杂志,101卷:1-13页(1995年)(Timsina et.al.,Int.J.Pharm.,101:1-13(1995))； 和坦西,I.P.,喷涂技术市场,4卷:26-29页(1994年)(Tansey,I.P.,Spray Technol.Market,4:26-29(1994))；法兰西,D.L.,爱德华兹,D.A.和尼文,R.W., 喷雾剂科学,27卷:769-783页(1996年)(French,D.L.,Edwards,D.A.and Niven, R.W.,Aerosol Sci.,27:769-783(1996))；维瑟,J.,粉末技术58卷:1-10页 (1989年)(Visser,J.,Powder Technology 58:1-10(1989))；路德特,S.和R.H.缪 勒,控释杂志,22卷:263-272页(1992年)(Rudt,S.and R.H.Muller,J.Controlled Release,22:263-272(1992))；塔巴塔,Y,和Y.筏,生物医药材料研究,22卷: 837-858页(1988年)(Tabata,Y,and Y.Ikada,Biomed.Mater.Res.,22:837-858 (1988))；沃尔,D.A.,药物输送,2卷:10 1-20页(1995年)(Wall,D.A.,Drug Delivery,2:10 1-20(1995))；巴顿,J.和普拉茨,先进药物输送评论,8卷: 179-196页(1992年)(Patton,J.and Platz,R.,Adv.Drug Del.Rev.,8:179-196 (1992))；布莱恩,P.,先进药物输送评论,5卷:107-132页(1990年)(Bryon,P., Adv.Drug.Del.Rev.,5:107-132(1990))；巴顿,J.S.,等人,控释杂志,28卷:15 79-85页(1994年)(Patton,J.S.,et al.,Controlled Release,28:15 79-85(1994))； 戴门思,B.和贝恩斯,W.,自然生物技术(1996年)(Damms,B.and Bains,W., Nature Biotechnology(1996))；尼文,R.W.,等人,医药研究,12卷9期: 1343-1349页(1995年)；和小林,S.,等人,医药研究,13卷1期:80-83页 (1996(Kobayashi,S.,et al.,Pharm.Res.,13(1):80-83(1996)，上述所有出版物的 内容通过引用将其整体并入本文。

在一些实施方式中，提供了本文描述的通式(I)或通式(II)小分子 AhR调节剂的外用剂型，所述AhR调节剂为：例如AhR抑制剂，诸如 CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996，其 外用剂型包括，但不限于乳膏，洗液，软膏，凝胶，洗发香波，喷雾剂，气 溶胶，溶液，乳剂，和本领域技术人员已知的其它形式，参见，例如雷明顿 药物科学，第18版，A.R.热纳罗主编，麦克出版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚 洲(1990年)(Remington\'s Pharmaceutical Sciences,18th ed.,Mack Publishing, Easton,Pa.(1990))；和药物剂型概论,第4版,Lea Febiger,费城,宾夕法尼亚 洲(1985年)(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms,4th ed.,Lea Febiger, Philadelphia,Pa.(1985))。对于不可喷雾的外用剂型，一般采用半固体或固体 的粘稠形式，其具有粘性并优选具有比水更大的动力粘度，其中所述半固体 或固体形式包含载体或一种或多种与局部施用相容的赋形剂。合适的制剂包 括，但不限于，溶液，混悬液，乳状液，乳膏，软膏，粉末，搽剂，油膏， 及类似，如果需要的话，它们可与灭菌与助剂(防腐剂，稳定剂，湿润剂，缓 冲液或盐)混合，以影响各种性质例如渗透压。其它合适的外用剂型包括可喷 射气溶胶制剂，其中优选与固体或液体惰性载体结合的活性组分包装于加压 挥发性混合物(例如，气体推进剂，诸如氟利昂)中或塑料挤瓶中。如果需要， 也可将湿润剂或稀释剂加入到药物组合物和剂型中。这些额外组分的例子在 本领域是已知的。参见，例如，雷明顿药物科学，第18版，A.R.热纳罗主编， 麦克出版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚洲(1990年)(Remington\'s Pharmaceutical Sciences,18th ed.,Mack Publishing,Easton,Pa.(1990))和药物剂型概论,第4版, Lea Febiger,费城,宾夕法尼亚洲(1985年)(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms,4th ed.,Lea Febiger,Philadelphia,Pa.(1985))。适合治疗口腔内 粘膜组织的剂型可配制成漱口剂类，口腔用凝胶，或口腔贴片剂。额外的透 皮吸收剂型包括\"药库型”或\"骨架型”贴片，它们可应用于皮肤和破损处一段特 定的时间，以允许所需量的活性组分的穿过。

可用于给药本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的透 皮吸收剂型的例子和给药方法的例子包括，但不限于在以下美国专利号中所 公开的：4,624,665；4,655,767；4,687,481；4,797,284；4,810,499；4,834,978； 4,877,618；4,880,633；4,917,895；4,927,687；4,956,171；5,035,894；5,091,186； 5,163,899；5,232,702；5,234,690；5,273,755；5,273,756；5,308,625；5,356,632； 5,358,715；5,372,579；5,421,816；5,466；465；5,494,680；5,505,958；5,554,381； 5,560,922；5,585,111；5,656,285；5,667,798；5,698,217；5,741,511；5,747,783； 5,770,219；5,814,599；5,817,332；5,833,647；5,879,322；和5,906,830，这些专利通 过引用将其整体并入本文，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如 CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。

用来提供本文描述的抑制剂的透皮吸收剂型和粘膜剂型的合适赋 形剂(例如载体和稀释剂)和其它材料是制药领域技术人员已知的，并取决于给 定组合物或剂型将应用的具体组织或器官。此外，根据被治疗的特定组织， 在使用本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂治疗之前，与其共同使 用中，或其后，可使用额外的成分，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制 剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如 CB7950996。例如，穿透促进剂可用来帮助活性组分递送至组织或穿透组织。

在本文描述的方面的一些实施方式中，包含本文描述的通式(I)或 通式(II)小分子AhR调节剂的药物制剂，能进一步包含多于一种的活性化合 物，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如CB7993113和 CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996，所述活性化合物对 受治疗的适应症是必需的，优选具有互补活性的的活性化合物对彼此不会造 成不利影响。例如，在一些实施方式中，可取的是在包含通式(I)或通式(II)AhR 抑制剂或非组成型AhR激动剂的制剂中进一步包含抗体，所述抗体结合至的 EGFR,VEGF,VEGFR,或ErbB2(例如赫赛汀TM(HerceptinTM))。在其它实施方 式中，包含通式(I)或通式(II)AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂的制剂可包 含细胞毒素剂，细胞因子，生长抑制剂和/或VEGFR拮抗剂。这样的分子适 合以对治疗目的的有效量存在于组合中。

在一些实施方式中，包含本文描述的AhR抑制剂或非组成型AhR 激动剂的制剂的活性组分例如也可通过凝聚技术或通过界面聚合包裹在制备 的微粒体中，例如，羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸酯)微胶囊， 各自地，用于胶体给药系统(例如，脂质体，白蛋白微球，微乳剂，纳米粒子 和毫微囊剂)或粗乳状液中。雷明顿药物科学，第16版，奥索,A.主编(1980年) (Remington\'s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))公开了这 样的技术。

在这些方面的一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分 子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组 成型AhR激动剂，诸如CB7950996，可通过控释或延释的方式给予受治疗者。 理想情况下，在医药治疗中的优化设计的控释制剂的应用的特征在于最少量 的药物在最短时间内可以治疗或控制病情。控释制剂的优点包括：1)延长药 物活性；2)降低的用药频率；3)提高的患者依从性；4)总药物使用量减少；5) 局部或全身副作用降低；6)药物蓄积最小化；7)血液水平波动降低；8)治疗效 果改善；9)药物活性的增毒作用或活性损耗降低；和10)疾病或症状控制速 度改善(金,诚举,控释剂型设计,2(技术标准出版社,兰卡斯特,宾夕法尼亚.: 2000年))(Kim,Cherng-ju,Controlled Release Dosage Form Design,2 (Technomic Publishing,Lancaster,Pa.:2000))。控释剂型可用来控制AhR抑制 剂的起效时间，有效时程，治疗窗内的血浆水平，和血药浓度峰值。特别地， 控释或延长释放剂型或制剂可用来确保本文描述的通式(I)或通式(II)小分子 AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成 型AhR激动剂，诸如CB7950996，达到其最大效果，同时使潜在不利影响和 安全问题最小化，这二者可发生自药物的有效剂量之下(under-dosing a drug) (即在最低治疗水平之下)以及超过药物的毒性水平。

可对各种已知的控释或缓释剂型、制剂和装置进行改良以与本文 描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂一起使用，所述AhR调节剂例如 是AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂， 诸如CB7950996。例子包括，但不限于，以下美国专利号中所公开的：3,845,770； 3,916,899；3,536,809；3,598,123；4,008,719；5674,533；5,059,595；5,591,767； 5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556；5,733,566；和6,365,185B1；上述专 利通过引用将其整体并入本文。这些剂型可用来提供一种或多种活性组分的 缓释或控释，所述使用的活性组分例如羟丙基甲基纤维素，其它其它聚合物 基质，凝胶，渗透膜，渗透系统(诸如(阿尔扎制药公司,山景城,加利 福尼亚州USA)(Alza Corporation,Mountain View,Calif.USA))，多层包衣，微 粒，脂质体，或微球或它们的组合以提供所需的不同比例的释药行为。此外， 离子交换材料可用来将制备所公开的化合物进行固定化、吸附盐形式，且因 此影响药物的控释。特定的阴离子交换剂的例子包括，但不限于， A568(A568)和AP143(罗姆哈斯公司,斯普林豪斯,宾夕法 尼亚州，美国)(Rohm Haas,Spring House,Pa.USA)。

在这些方面的一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分 子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组 成型AhR激动剂，诸如CB7950996，用于各种治疗制剂和组合物以及它们的 方法，如本文描述的，通过缓释给药或以脉冲式释放的方式给予受治疗者。 脉冲疗法不是相同量的组合物随时间连续给药的形式，而是包含以降低的频 率给予相同剂量的组合物，或以降低的剂量给药。在诸如癌症的慢性病症中 特别优选缓释给药或脉冲给药，因为每个脉冲剂量可被降低，并且在治疗过 程中给予患者的AhR抑制剂化合物的总量也是最小化的。

当必要时，本领域的技术人员可确定脉冲之间的时间间隔。通常， 当在下一个脉冲给药之前受治疗者中不再能检测到组合物或组合物的活性成 分时，通过给予另一剂组合物可计算脉冲之间的时间间隔。时间间隔也可根 据组合物在体内的半衰期来计算。时间间隔可计算为大于体内半衰期，或比 组合物半衰期大2,3,4,5且甚至10倍。美国专利第4,747,825号；第4,723,958 号；第4,948,592号；第4,965,251和第5,403,590号中公开了通过灌输或其它 递送形式将组合物脉冲给予患者的各种方法和设备。

在一些实施方式中，可制备包含本文描述的通式(I)或通式(II)小分 子AhR调节剂的缓释制剂，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸 如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。 缓释制剂的合适例子包括包含所述抑制剂的固体疏水性聚合物的半渗透性基 质，其中，基质是特型制品的形式，例如，薄膜或微胶囊。缓释基质的例子 包括聚酯，水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯),或聚(乙烯醇))，聚乳 酸(美国专利第3,773,919号)，L-谷氨酸的共聚物和乙基-L-谷氨酸酯，不可降 解的乙烯-醋酸乙烯酯，诸如LUPRON DEPOT.TM(由乳酸-乙二醇酸共聚物和 醋酸亮丙瑞林组成的注射微球)的可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，和聚-D-(-)-3- 羟基丁酸。

用于体内给药的包含本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调 节剂的制剂优选是无菌的，其中所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂， 诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。 例如，通过无菌滤膜过滤和本领域技术人员已知的其它方法，很容易实现无 菌。

治疗效果

包含本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的方法，用 途和组合物的一个关键优点是在人类受治疗者中产生显著的抗癌效果而不会 引起显著毒性或副作用的能力，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂， 诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。 可通过评价癌症治疗中常用的各种参数来测量本文描述的治疗效果，所述参 数包括但不限于，肿瘤退化，肿瘤重量或大小的收缩，肿瘤生长率的下降， 休眠肿瘤的存在部位或大小，转移灶或微小转移灶的存在或大小，肿瘤或癌 症侵袭的程度，血管的大小或数目，进展时间，生存时间，无进展生存期， 总体响应率，响应持续时间，和生活质量。例如，2-维检测中大于50％的肿 瘤收缩是标准的表明应答的分离点(cut-off for declaring a response)。然而， 在一些实施方式中，包含本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的组 合物能够用来抑制转移灶扩散，而原发肿瘤不收缩，或者仅能够简单地发挥 抑制肿瘤效果。在癌症的情况下，包含本文描述的通式(I)或通式(II)小分子 AhR调节剂的组合物的治疗有效量能够减少癌细胞数目；减小肿瘤大小；抑 制(即在一定程度上减缓且优选停止)癌细胞渗入外周器官；抑制(即在一定程 度上减缓且优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程 度上缓解一种或多种与疾病相关的症状。在一定程度上，包含本文描述的通 式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的组合物能够阻止癌细胞的生长和/或杀死 存在的癌细胞，其可以通过抑制细胞生长的和/或细胞毒素的。对于癌症治疗， 通过评价生存时间，无进展生存(PFS)时间，响应率(RR)，响应持续时间，和 /或生活质量可以测量其的体内疗效。

在一些实施方式中，本文描述了增加人类受治疗者无进展生存期 的方法，所述人类受治疗者易患癌症或诊断患有癌症。如本文所用，\"疾病进 展时间”定义为从给药直至疾病进展的时间或死亡的时间。在优选的实施方式 中，本文描述的治疗方法使用本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节 剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激 动剂，诸如CB7950996，且在进一步的实施方式中，本文描述的治疗方法还 使用一种或多种化学治疗剂，当与无治疗或单纯化学治疗的相比，上述治疗 方法显著增加无进展生存期至少约1个月，至少约2个月，至少约3个月， 至少约4个月，至少约5个月，至少约6个月，至少约7个月，至少约8个 月，至少约9个月，至少约10个月，至少约11个月。

在其它实施方式中，本文描述的治疗方法显著增加了接受各种治 疗的人类受治疗者群体的响应率，所述人类受治疗者易患癌症或被诊断患有 癌症。如本文所用，\"响应率”定义为对治疗产生响应的受治疗者的百分比。 在一些这样的实施方式中，本文描述的联合治疗包含使用通式(I)或通式(II)小 分子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非 组成型AhR激动剂，诸如CB7950996，且在进一步的实施方式中，本文描述 的联合治疗包含使用一种或多种化学治疗剂，与未受治疗组或只接受化学治 疗的群体相比，上述联合治疗显著增加了受治疗组的响应率。

在这些方法的其它实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分 子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组 成型AhR激动剂，诸如CB7950996，将其给药用于增加人类受治疗者或人类 受治疗者群体的响应持续时间，所述人类受治疗者易患癌症或被诊断患有癌 症。如本文所用，\"响应持续时间”定义为从初始响应到疾病进展的时间。在 一些这样的实施方式中，本文描述的AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂可用 于增加易患癌症或被诊断患有癌症的人类受治疗者的生存时间。

如本文所用，术语\"治疗”(treat)，\"治疗”(treatment)，\"进行 治疗”(treating)或\"改善”是指治疗处理，其中，其目的是逆转，减轻，改善， 抑制，减缓或停止与疾病或病症相关的情况的进展或严重性。术语\"进行治疗” 包括降低或减轻与慢性免疫状态有关的状态，疾病或病症的不良作用或症状， 所述慢性免疫状态诸如是，但不限于，慢性感染或癌症。如果一种或多种症 状或临床表征降低，那么治疗通常是\"有效的”。或者说，如果疾病的进展降 低或停止，那么治疗是\"有效的”。也就是说，\"治疗”不但包括改善症状或临床 表征，而且包括终止，至少是减缓在没有治疗的情况下预计会出现的症状的 进展或恶化。不管是检测到的还是检测不到的，有利的或期望的临床结果包 括，但不限于，一种或多种症状的减轻，病变范围的减小，疾病状态的稳定(即 不恶化)，疾病进展的延迟或减缓，疾病状态的改善或缓和，以及疾病状态(部 分或全部)的减退。术语\"治疗”疾病也包括减轻疾病的症状或疾病的副作用(包 括姑息治疗)。

例如，在一些实施方式中，本文描述的方法包含将本文描述的通 式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂的有效量给予受治疗者以便于减轻癌症或 其它此类病症的症状，所述小分子AhR调节剂例如是AhR抑制剂，诸如 CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。如 本文所用，\"减轻癌症症状”是改善或降低与癌症相关的任何状态或症状。与 相当的未治疗对照比较，这样的降低或预防程度是通过任何标准技术所测量 的至少5％，10％，20％，40％，50％，60％，80％，90％，95％或100％。理想 情况下，通过本领域已知的任何标准方法检测到癌症被完全清除，在这种情 况下，我们认为癌症已经治愈。接受癌症治疗的患者是这样的人：执业医师 已诊断出其具有这样的癌症状态。诊断可以通过任何合适的方法。诊断和监 测可以涉及，例如，检测生物样品(例如，组织或淋巴结活检，验血，或验尿) 中癌细胞的水平，检测生物样品中癌症替代标志的水平，检测与特定癌症相 关的症状，或检测参与此类癌症感染的典型免疫应答的免疫细胞。

联合治疗

在一些实施方式中，包含本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR 调节剂的组合物和方法进一步包含，将其与一种或多种额外的癌症疗法一起 给药或治疗，所述AhR调节剂例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和 CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。抗癌疗法的例子包 括，但不限于，外科手术，放射疗法(放疗)，生物疗法，免疫疗法，化学疗法， 或这些疗法的组合。此外，细胞毒素剂，抗血管生成剂和抗增生剂可与AhR 抑制剂联合使用。

对于这样的实施方式中包含联合治疗的癌症治疗，本文描述的通 式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和 CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996，其合适的剂量取决 于如上定义的治疗疾病的类型，疾病的严重性和病程，是否给予AhR抑制剂 或非组成型AhR激动剂用于预防目的或治疗目的，之前的治疗，受治疗者的 临床病史和对AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂的响应，以及主治医师的判 断。AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂适合给予曾经或经过了一系列治疗的 受治疗者。

在应用联合治疗方案的那些实施方式中，以治疗有效量或治疗协 同增效量给予本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂，例如AhR抑 制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR激动剂，诸如 CB7950996，以及一种或多种本文描述的抗癌治疗剂。如在包含联合治疗的 这些实施方式中所用，治疗有效量是指本文描述的通式(I)或通式(II)小分子 AhR调节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成 型AhR激动剂，诸如CB7950996，与一种或多种其它治疗剂的共同给药，或 者将包含本文描述的AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂的治疗性组合物或 制剂给药，引起如本文描述的癌症的减少或抑制。\"治疗协同增效量”是本文 描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调节剂与一种或多种其它治疗剂的量，其 对于协同地或显著地降低或消除与具体癌症相关的状态或症状是必须的，所 述小分子AhR调节剂例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或 非组成型AhR激动剂，诸如CB7950996。

在一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调 节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR 激动剂，诸如CB7950996，能够与一种或多种其它治疗剂以一定量同时地或 顺序地给药一段时间，使其足以降低或消除肿瘤，休眠肿瘤或微小转移灶的 发生或复发。在一些实施方式中，本文描述的通式(I)或通式(II)小分子AhR调 节剂，例如AhR抑制剂，诸如CB7993113和CMLD-2166，或非组成型AhR 激动剂，诸如CB7950996，与一种或多种其它治疗剂能够作为维持疗法进行 给药以便预防肿瘤或降低肿瘤复发的可能性。

本领域的技术人员将理解的是，化学治疗剂或其它抗癌治疗剂的 合适的剂量通常大约是已用于临床治疗的量，其中化学治疗机可以单独给药 或与其它化学治疗剂联合给药。根据接受治疗的状态，进行剂量变化。给予 治疗的内科医生能够确定对个体受治疗者来说合适的剂量。

除了上述治疗方案之外，受治疗者还可以接受放射疗法。

术语\"抗癌疗法”是指用于治疗癌症的疗法。抗癌治疗剂的例子包 括，但不限于，例如，外科手术，放射疗法，化学治疗剂，生长抑制剂，细 胞毒素剂，用于放射疗法的药剂，血管生成抑制剂，细胞凋亡剂，抗微管蛋 白剂，和治疗癌症的其它药剂，诸如抗-HER-2抗体(例如赫赛汀 TM)(HerceptinTM)，抗-CD20抗体，表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如酪氨 酸激酶抑制剂)，HER1/EGFR抑制剂(例如厄洛替尼(特罗凯TM))(erlotinib (TarcevaTM))，血小板衍生生长因子抑制剂(例如格列卫TM(甲磺酸伊马替尼)) (GleevecTM(Imatinib Mesylate))，COX-2抑制剂(例如塞来考昔)，干扰素，细胞 因子，结合至一个或多个以下靶标的拮抗剂(例如中和抗体)：ErbB2、ErbB3、 ErbB4、PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA或VEGF受体、TRAIL/Apo2，以 及其它生物活性剂和有机化学剂等。它们的组合也包括在本文描述的实施方 式中。

如本文所用的术语\"细胞毒素剂”是指抑制或阻止细胞的功能和/ 或引起细胞的破坏的物质。该术语旨在包括放射性同位素(例如At211,I131,I125, Y90,Re186,Re188,Sm153,Bi212,P32和Lu的放射性同位素)，化学治疗剂，和毒 素，诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物源的酶促活性的毒素，包 括其片段和/或其变体。

如本文所用，\"化学治疗剂”是用于癌症治疗的化学化合物。化学 治疗剂的例子包括，但不限于，烷化剂，诸如塞替派和癌得星TM(CYTOXANTM) 环磷酰胺；烷基磺酸盐，诸如白消安，英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，诸如 苯并多巴(benzodopa)，卡波醌，甲多巴(meturedopa)，和尿多巴(uredopa)； 乙撑亚胺和甲基嘧胺，包括六甲蜜胺，三乙烯胺三嗪，三乙撑磷酰胺，三乙 撑硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；多聚乙酰(特别是布拉它辛和布拉它辛酮 (bullatacinone)；喜树碱(包括其合成类似物托泊替康)；苔藓抑素；海绵乙酰 (callystatin)；CC-1065(包括它的合成类似物阿多来新，卡折来新和比折来 新)；隐藻菌素(特别是隐藻菌素1和隐藻菌素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(包 括其合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；软珊瑚醇；水鬼蕉碱(sarcodictyin)， 海绵抑制素；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥，萘氮芥，胆磷酰胺(cholophosphamide)， 雌莫司汀，异环磷酰胺，二氯乙基甲胺，盐酸甲氧氮芥，美法仑，新恩比兴， 苯芥胆甾醇，泼尼莫司汀，曲磷胺，乌拉莫司汀；亚硝基脲，诸如卡莫司汀， 氯脲霉素，福莫司汀，洛莫司汀，尼莫司汀，和雷莫司汀(ranimnustine)；抗 生素，诸如烯二炔类抗生素(例如刺孢霉素，特别是刺孢霉素γ1I和刺孢霉素 ΩI1(可以参见德国应用化学杂志,33卷:183-186页(1994年))(Agnew,Chem. Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；蒽环类抗生素(dynemicin),包括蒽环类 抗生素A(dynemicin A)；二膦酸盐，诸如氯膦酸盐；埃斯波霉素 (esperamicin)；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色 团)，阿卡拉菌素(aclacinomysins),放线菌素,安曲霉素,重氮丝氨酸,争光 霉素,放线菌素C,卡比霉素(carabicin),洋红霉素(caminomycin),嗜癌 素,东洋霉素(chromomycinis),放线菌素D,柔红霉素,地托比星,6-重氮-5- 氧代-L-正亮氨酸,亚德里亚霉素TM(ADRIAMYCINTM),阿霉素(包括吗啉代-阿 霉素,氰基吗啉代-阿霉素,2-吡咯啉基-阿霉素和脱氧阿霉素),表柔比星,依 索比星,依达比星,麻西罗霉素,诸如丝裂霉素C的丝裂霉素，麦考酚酸,诺 加霉素,橄榄霉素,培洛霉素,泊非霉素(potfiromycin),嘌呤霉素,三铁阿 霉素,罗多比星,链黑霉素,链脲菌素,杀结核霉素,乌苯美司,净司他丁,佐 柔比星；抗-代谢物，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二 甲叶酸,甲氨蝶呤,蝶罗呤,曲美沙特；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨,6-巯嘌呤, 硫咪嘌呤,硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨,阿扎胞苷,6-氮尿苷,卡莫 氟,阿糖胞苷,二脱氧尿核苷,去氧氟尿苷,依诺他宾,氟脲嘧啶脱氧核苷； 雄激素，诸如卡普睾酮,屈他雄酮丙酸酯,环硫雄醇,美雄烷,睾内酯；抗-肾 上腺素，诸如氨鲁米特,米托坦,曲洛司坦；叶酸补充物，诸如亚叶酸；醋葡 醛内酯；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧 啶；安吖啶；巴托比尔(bestrabucil)；比山群；依达曲沙(edatraxate)；地磷 酰胺(defofamine)；地美可辛；亚胺醌氨酯；依佛嘧辛(elformithine)；依利 醋铵；埃博霉素；乙环氧啶；硝酸镓；羟基脲；蘑菇多糖；氯尼达明；美登木 素生物碱，例如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫皮达明 (mopidanmol)；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼 臼酸；2-乙基肼；甲基苄肼；PSKTM,多糖复合物(JHS天然产品,尤金,俄勒冈 州)；雷佐生；根霉素；施佐非兰(sizofuran)；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三乙 撑亚胺苯醌；2,2\',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素(特别是T-2毒素,疣孢菌 素A,杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀； 二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；镓阿糖胞苷(gacytosine)；阿糖胞苷 (\"Ara-C\")；环磷酰胺；三胺硫磷；紫杉烷类,例如,紫杉酚TM(TAXOLTM),紫杉 醇(布里斯托尔-迈尔斯施贵宝肿瘤学,普林斯顿,新泽西州)(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.),白蛋白结合型紫杉醇TM(ABRAXANETM),克 列莫佛单体,紫杉醇的白蛋白工程纳米粒子制剂(美国制药合作伙伴,邵伯克, 伊利诺伊州.)(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.),和泰素帝 TM(TAXOTERETM),多西他赛(隆河-普朗克罗尔,安东尼,法国)(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；瘤可宁；健择TM(GEMZARTM)吉西他滨；6-硫鸟嘌呤； 巯嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物，诸如顺铂,奥沙利铂和卡铂；长春碱；铂；依托 泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨 (NAVELBINE.RTM.)长春瑞滨；诺安托；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素； 氨喋呤；卡培他滨；伊班膦酸盐；伊立替康(盐酸伊立替康和山梨醇注射剂 (Camptosar),CPT-11)(包括具有5-FU和甲酰四氢叶酸的伊立替康的给药方 案)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，诸如 视黄酸；卡培他滨；考布他汀；甲酰四氢叶酸(LV)；奥沙利铂,包括奥沙利铂 的治疗方案(FOLFOX)；拉帕替尼(泰克博TM)(TykerbTM)；PKC-α,Raf,H-Ras, EGFR的抑制剂(例如,埃罗替尼(特罗凯TM)(TarcevaTM))和降低细胞增殖的 VEGF-A和上述任何一个的药学上可接受的盐，酸或衍生物。

这个定义中还包括抗激素剂，起到调控或抑制肿瘤的激素活性， 诸如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERMs)，包括，例如，他莫昔芬(包 括诺瓦得士TM(NOLVADEXTM)他莫昔芬),雷洛昔芬,屈洛昔芬,4-羟基他莫昔 芬,曲沃昔芬,雷洛西芬,LY117018,奥那司酮,和法乐通(FARESTON)托瑞 米芬；抑制芳香酶的芳香酶抑制剂，调控肾上腺中的雌激素的产生,例如, 4(5)-咪唑,氨鲁米特,MEGASETM醋酸甲地孕酮,AROMASINTM依西美坦,福 美坦,法倔唑,RIVISORTM伏氯唑,弗隆TM(FEMARATM)来曲唑,和瑞宁得 TM(ARIMIDEXTM)阿纳托司唑；和抗雄激素，诸如氟他米特,尼鲁米特,比卡鲁 胺,亮丙瑞林,和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)； 反义寡核苷酸,特别是抑制与变异细胞增殖有关的信号传递通路中基因表达 的那些反义寡核苷酸，例如,PKC-α,Raf1和H-Ras；核酶，诸如VEGF表达抑 制剂(例如,ANGIOZYMETM核酶)和HER2表达抑制剂；疫苗，诸如基因治疗疫 苗,例如,ALLOVECTINTM疫苗,LEUVECTINTM疫苗,和VAXIDTM疫苗；阿地白 介素TM(PROLEUKIN)rIL-2；勒托替康TM(LURTOTECANTM)拓扑异构酶1抑 制剂；阿巴瑞克TM(ABARELIXTM)rmRH；和上述任何一个的药学上可接受的 盐，酸或衍生物。

术语\"细胞因子”是由一种细胞群体释放的蛋白质的通用术语，所 述蛋白质作为细胞间中介物作用于另一细胞。这样细胞因子的例子是淋巴因 子，单核因子，和传统多肽激素。细胞因子包括生长激素，诸如人垂体生长 激素,N-甲磺氨酰人类生长激素,和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素； 胰岛素；前胰岛素；松弛素；前松弛素；糖蛋白激素，诸如促卵泡生成激素 (FSH),促甲状腺激素(TSH),和促黄体激素(LH)；表皮生长因子；肝细胞生长 因子；成纤维细胞生长因子；催乳素；胎盘催乳激素；肿瘤坏死因子-α和-β； 苗勒抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子； 整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子，诸如NGF-α；血小板生长因子； 转化生长因子(TGFs)，诸如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；促红 细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素，诸如干扰素-α,-β和-γ集落刺激因 子(CSFs)，诸如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和 粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(ILs)，诸如IL-1,IL-1α,IL-2,IL-3,IL-4,IL-5, IL-6,IL-7,IL-8,IL-9,IL-10,IL-11,IL-12；肿瘤坏死因子，诸如TNF-α或TNF-β； 和其它多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文所用，术语细胞因子包括 来自天然来源的蛋白质或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列细胞因子 的生物活性等价的蛋白质。

本文所用的\"生长抑制剂”是指在体外和/或体内抑制细胞生长的 化合物或组合物。因此，生长抑制剂是可以显著降低S期细胞百分比的药剂。 生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期进程的药剂(在除S期之外的其它时间)， 诸如诱导G1期停止和M-期停止的药剂。典型的M-期阻断剂包括长春胺(长 春新碱和长春碱)，泰素TM(TAXOLTM)，和拓扑II抑制剂，诸如阿霉素，表柔 比星，柔红霉素，依托泊苷，和争光霉素。阻滞G1的那些药剂还包含阻滞 进入S-期，例如，DNA烷化剂，诸如泰莫西芬，泼尼松，达卡巴嗪，二氯乙 基甲胺，顺铂，甲氨蝶呤，5-氟尿嘧啶和阿糖胞苷。在癌症分子基础，门德 尔松和伊斯雷尔主编，第1章，穆拉卡米等人的题目为\"细胞周期调控，癌基 因，和抗肿瘤药物”(WB桑德斯:费城,1995年)，特别是13页(The Molecular Basis of Cancer,Mendelsohn and Israel,eds.,Chapter 1,entitled\"Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs\"by Murakami et al.(WB Saunders: Philadelphia,1995),especially p.13)中能够找到进一步的信息。

如本文所用的术语\"前体药物”是指药学活性物质的前体或衍生 物，与母体药物相比对肿瘤细胞的细胞毒性较小，且能够酶促激活或转变为 更高活性的母体形式。可以参见威尔曼,\"癌症化学治疗中的前体药物\"英国 生物化学学会会报,14卷,375-382页,第615次贝尔法斯特会议(1986年) (Wilman,\"Prodrugs in Cancer Chemotherapy\"Biochemical Society Transactions, 14,pp.375-382,615th Meeting Belfast(1986))和斯拉特等人,\"前体药物:靶向药 物递送的化学方法,\"定向药物递送,伯哈特等人,(主编),247-267页,胡马纳 出版社(1985年)(Stella et al.,\"Prodrugs:A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery,\"Directed Drug Delivery,Borchardt et al.,(ed.),pp.247-267, Humana Press(1985))。本发明的前体药物包括，但不限于，含磷酸盐的前体 药物，含硫代磷酸盐的前体药物，含硫酸盐的前体药物，含肽的前体药物， D-氨基酸-修饰的前体药物，糖基化的前体药物，含β-内酰胺的前体药物，含 任意取代的苯氧乙酰唑胺的前体药物或含任意取代的苯乙唑酰胺的前体药 物，5-氟胞嘧啶和能够转变为更有活性的细胞毒性单体药物的其它5-氟胞嘧 啶前体药物。细胞毒素药物的例子包括，但不限于，上面描述的那些化学治 疗剂，所述细胞毒素药物能够衍生为用于本发明的前体药物形式。

\"放射疗法”意思是使用定向γ射线或β射线来诱导对细胞的充分 损害以便限制细胞正常起作用的能力或连同细胞一起破坏掉。应理解的是， 本领域内有很多已知方法可确定治疗的剂量和持续时间。给出的一般治疗是 每天给药一次且一般的剂量范围是10至200单位(戈瑞)(Grays)。

通过下面的实施例进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的 限制。

实施例

芳烃受体(AhR)的结合与激活是近端信号事件，通过该事件，各类 普遍存在的环境污染物引起了乳腺肿瘤发生。发明人已证明通过调控肿瘤生 长与侵袭，AhR在肿瘤发生的后期也起着重要的作用。在体外实验中，发现 通过分子或生物化学方法抑制组成型AhR活性可成倍地显著降低永生化肿瘤 的生长和侵袭。值得注意的是，发明人发现这种AhR-介导的肿瘤进展发生在 没有环境AhR配体的情况下，并且几乎与所有的乳腺肿瘤有关，包括不是由 环境化学物质诱导的\"自然发生的”肿瘤。这些数据进一步表明AhR在大部分 实体癌中似乎起着相似的作用。因此，本文描述的是AhR抑制剂和非组成型 AhR激动剂，以及其在作为降低肿瘤生长，侵袭和转移的疗法中的用途。本 文描述的是新型的靶向疗法，用于治疗任何时期的乳腺癌。在一些实施方式 中，这些新型的靶向疗法特别是用于常规非-靶向化疗药物或Her2/neu-,ER- 或PR-依赖型治疗对他们的治疗已经失败的患者。

对超过4000种化合物的高通量筛选鉴定了几种AhR调节剂，包 括AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂，其中至少有3种可抑制肿瘤侵袭。本 文描述的肿瘤侵袭的新型生物检测方法可应用从命中化合物到先导化合物筛 选的(Hit-to-lead)化学，以便研发一系列高度有效和特异性的AhR抑制剂， 用于临床前动物研究中的评价。使用基于形状和电性的筛选法，骨架迁移和 计算机药物化学，可在商品的化学库中鉴别出AhR抑制剂和非组成型AhR 激动剂。通过HTS可评价这样的AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂，并且 在迭代过程中，可对所述AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂进行化学改变以 生产具有改进的AhR-结合亲和性，效价，稳定性和溶解性的配体。在体外毒 性，特异性，稳定性和吸收实验之前，使用本文描述的二级乳腺肿瘤生长与 侵袭检测来评价新型的合成AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂。本文描述的 合成AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂能够用于合成先导化合物，所述先导 化合物在体外测定具有显著阻断肿瘤进展并且临床前动物测试中展示出高水 平的疗效和特异性。合成AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂用于治疗晚期乳 腺癌，作为高危患者的预防药物，并且适合用于治疗各种实体瘤。

背景

通过激活芳烃受体/转录因子，普遍存在的AhR配体引发乳房肿 瘤发生。在正常细胞中，细胞溶质的AhR能够被诸如二噁英、非邻位取代的 多氯联苯和多环芳香烃的污染物\"激活”，导致AhR易位至细胞核以及基因调 控。发明人调查研究了恶性肿瘤细胞中这种受体/转录因子的激活和功能，并 首先证实了大鼠乳房肿瘤中AhR mRNA的增加惊人的是正常组织(2)相比的 50-倍，这与其它描述了正常细胞中AhR激活的急性毒理学结果的研究形成了 对比。发明人已鉴定了在小鼠乳房肿瘤，人类和小鼠肿瘤细胞系，和原发性 人类乳房肿瘤中AhR过量表达(3-15)。发明人证明了在所有这些系统中，在 没有环境刺激的情况下，AhR是有持续激活的，这表明AhR有助于乳腺癌的 引发，生长，和侵袭。其它数据将组成型AhR转录活性与肿瘤生长率和侵袭 力，以及与肿瘤的生长和侵袭相关(9,12,16)的上调的致癌基因相联系，并 且直接证实了分子生物学技术敲低的AhR在体外抑制了永生化细胞生长(通 过p21上调)以及肿瘤侵袭(8,12,14,17)(图1-3)。考虑到人们对AhR生物学 已知的内容以及肿瘤中AhR超表达所带来的大治疗窗，基于机理的毒性是降 低了风险，并且AhR抑制剂和非组成型AhR激动剂能够对高风险个体起到保 护作用，所述高风险是由遗传易感性或环境接触造成的。

结果

使用高通量的基于报道分子的AhR生物检测和细胞活性检测，对 超过4000个CMLD化合物，FDA药物，和NCI-生成的提取物进行了筛选， 并鉴定了8个无毒AhR抑制剂(2种来自CMLD)和19个AhR激动剂(14个来 自CMLD)(如图4A-4B所示)。测定了抑制剂的IC50值和激动剂的EC50值(表 1)。这些发现的抑制剂中的一个(CMLD-2166)，它的对映体(CMLD-2186)，和 先前描述的脂溶性AhR抑制剂(CH223191)阻断了肿瘤生长与侵袭(图5A-5B 和7A-7B)。

为了确定CB7993113的抑制作用是否涉及参与结合至AhR和阻 断它向细胞核的易位，使用1-10uM CB7993113处理Hepa-1细胞。1小时后， 用强AhR激动剂和原型PAH,DMBA(1uM)激发它们。30分钟的培养期之后， 收获细胞并得到细胞核和细胞质的提取物。然后，采用蛋白免疫印迹法，测 定这些提取物和以β-肌动蛋白作为内参照的的AhR水平。

从图6中可以看出，单独用AhR抑制剂处理细胞对AhR向细胞 核的易位没有影响(第3泳道和第6泳道)，这证明AhR激动剂活性的缺乏。 相反，单独用DMBA处理则显著诱导了核易位(第5泳道)。1-10uM CB7993113 的加入完全阻断了DMBA-诱导的AhR易位(第4泳道和第7泳道)。这些结果 与以下假设一致：通过阻止AhR向细胞核的易位，CB7993113和类似的竞争 性AhR抑制剂阻断了AhR转录活性。

为了测试本文描述的一个先导化合物，CB7993113，在体内被吸 收与有效发挥作用的能力，在CB7993113或另一种AhR抑制剂CH223191存 在或缺少的情况下，用急性毒性剂量(50mg/kg)的DMBA，一种强效AhR激 动剂，处理C57BL/6小鼠。我们先前已证明用50mg/kg DMBA处理小鼠可诱 导骨髓造血细胞的快速损耗(48小时内)。在此，通过腹腔注射DMBA 48小时 后，DMBA处理导致了骨髓细胞总数的显著减少(图8A)的证明确认了这些研 究。通过腹腔注射50mg/kg CH223191或CB7993113，可阻止这种骨髓细胞 总数的减少。

此外，通过证实DMBA急性处理导致了B细胞，前B细胞，和 中性粒细胞的特异性损耗(图8B)，之前的实验进行了扩展。重要地，CH223191 或CB7993113的同时给药完全阻断了pro B细胞，pre B细胞和中性粒细胞中 的这种减少。这些是重要的发现，因为它们证实了本文描述的AhR抑制剂在 体内被吸收，并且其在诸如骨髓的外周器官中能够达到药理学有效剂量。

已确立了AhR配体的初始数据集(表1)，这些化学结构可用来预 测并最终重新设计高活性AhR抑制剂，目的是得到在10-100纳摩尔范围内有 效的高特异性和可溶性的抑制剂。为了达到这个目的，可对商品的化学库进 行筛选以鉴定AhR配体，然后，在迭代过程中，可集中在以下的化学特性： 改善AhR抑制剂效价而同时保持或改善特异性，稳定性和可溶性。

基于计算的形状和静电学的骨架迁移技术经常用于以下情况：其 中，由于缺少X-射线晶体学数据(18-22)，配体对接模型是不可行的，如同AhR 的情况。为了设计更有效AhR抑制剂而获得所需的关键化学结构信息，基于 形状的筛选和骨架迁移可用于鉴定商品化学库中额外的新型AhR配体(参见 图9，作为实例性说明)。含有超过700,000个化合物的库可从ASDI和恒桥 (ChemBridge)得到。这些库化合物代表覆盖了广泛的药效团空间，同时保持良 好的先导化合物的性质和类药性。使用我们已知的AhR配体作为训练集， OpenEye程序OMEGA版本2.2(23)可用于这种计算机方法。激动剂以及拮 抗剂的鉴定是重要的，因为激动剂结构有助于限定对AhR结合的重要部分， 而激动剂与拮抗剂的比较有助于鉴定用于受体抑制的残基。

药效团模型也可作为互补的计算机方法进行。使用Accelrys Discovery Studio计算软件包，使用我们的AhR配体训练集可以输入结构与构 建药效团。具有相关功能性的部分(氢键受体/供体，亲脂性区域)的各种结构 的三维图产生。然后，从商品化学集中可重新选择候选化合物。虽然非重叠 命中集在从基于形状的和药效团模型的筛选中有可能被选出，但是用两种方 法对这些化合物进行预测，就可对其购买进行排序，并在AhR生物检测中 进行高通量筛选确定的命中化合物将被滴定以确定IC50/EC50s。通过替代我 们描述的放射性标记的TCDD的能力，拮抗剂被表征为竞争性的，与非竞争 性的进行比较(24)。

从这个第一轮预测/测试收集的信息能够用来定制的设计较高亲 和力的AhR调节剂。使用CMLD-BU或商品化合物支架可以合成修饰的，第 二代化合物。合成的化合物可在AhR报道分子生物检测中评价效价(和毒性)， 后通过经验结果和药效团模型所指示的进行再次修饰，以及在报道分子测定 中进行重复测试。

二级检测和体外ADMET。使用基于活体染料和发明人可得到的各 种初级人类细胞和细胞系的流式细胞仪，可进一步详细检查生物检测中显示 有活性但无毒的先导化合物的可能毒性，所述各种初级人类细胞和细胞系包 括初级人类乳腺上皮细胞，淋巴细胞，和造血干细胞。使用发明人可用的ERα-, PPARγ-,和NF-κB-驱动的报道分子检测，可用于评价多达10个无毒先导化 合物的特异性。然后，使用来自活性基序(Active Motif)的TransAm商业转 录因子对先导化合物全面筛选脱靶效应。为了确认人类乳房肿瘤细胞中AhR 抑制，可将先导化合物滴入BP1和Hs578T人类乳房肿瘤细胞的培养物中， 如所描述(24)的对核AhR易位的抑制进行检测。化合物CMLD-21 66，显示抑 制肿瘤侵袭(图7A-7B)，可用作阳性对照。然后，在针对肿瘤生长(3H-胸苷掺 入)和侵袭(在基质胶形态学变化和博伊登室中的转移)(morphology in Matrigel and migration in Boyden Chambers)的抑制进行的二级检测中，可对抑制组成型 AhR核易位的化合物进行评价，如本文所描述(参见图5A-5B和7A-7B)。

确定体外的效价、毒性、特异性和效能后，先导化合物的进一步 吸收、分布、代谢、排泄和毒性(ADMET)检测可外包给外包公司完成，诸如 Apredica公司(Apredica Inc)。在其它结果中，可评价的参数包括，但不限 于，1)化合物渗透性，使用Caco-2单分子层来预测人类口服生物利用度；2) 在肝微粒体或小鼠/人类血浆中存在的代谢分解；和3)在胃液和肠液中存在的 稳定性。此外，化合物溶解性的实验测量可在化合物设计和优化循环过程中 用来补充所利用的计算值。

本文描述的研究对于推动生物发现向先导物优化阶段的产品研 发是有用的。此外，可使用例如人类乳房肿瘤异种移植模型来进行体内药物 代谢动力学和效能方面研究以便在三维上实时定量活小鼠中肿瘤生长与转 移。

在美国，乳腺癌年龄调整的发病率在1940年至1990年之间每年 增加～1％(27,28)，且在1987年至2002年之间每年增加0.4％(29)，不希望受 到理论的束缚或限制，这可能是由于接触包括AhR配体在内的环境致癌物 (30-33)。现在，乳腺癌是女性中第二大最常见的癌症(仅次于皮肤癌)，美 国每年有225,000例新增病例和40,000例乳腺癌相关的死亡病例。今年出生 的女性每8人中有1人在她们的一生中将被诊断患有乳腺癌(34)。诊断患有乳 腺癌的女性的总数在未来20年极有可能显著增加，因为人口结构特征朝着老 龄化方向发展(34)。因此，即使是接受靶向治疗的乳腺癌亚型患者也代表着相 对庞大的群体，靶向疗法诸如本文所描述的那些。

虽然靶向疗法适合用于所有乳腺癌患者，但是本文描述的化合物 能够靶向于患进攻性的\"三阴性”乳腺癌，例如，常规化学治疗或Her2/neu-,ER- 或PR-依赖型治疗已失败的那些患者，因为组成型AhR活性随之增加，且有 可能有助于增加肿瘤侵袭水平(8)。本文描述的通式(I)和通式(II)小分子化合物 可用作靶向疗法，特异性针对癌中极其高水平表达的蛋白(AhR)，并且因为 AhR调节剂预期不会与基于机理的显著毒性有关，在一些实施方式中，通式 (I)和通式(II)小分子化合物可被用作例如佐剂(例如手术后)治疗需要无毒治疗 替代以改善生活质量的患者，或治疗由于累积的器官毒性而需要靶向疗法的 患者。

除了促进进行性肿瘤向晚期进展，本文描述的以及大鼠和小鼠的 乳房肿瘤发生模型的研究表明在明显的肿瘤形成之前，AhR在肿瘤发生的早 期起到了作用(2-4,8,13)。因此，在一些实施方式中，使用本文描述的通式(I) 和通式(II)小分子化合物的AhR治疗可用作对患乳腺癌风险高的妇女的长期 的预防措施。例如，在一些实施方式中，本文描述的化合物用作对妇女的预 防性疗法，由于变异的BRCA1,BRCA2,CHEK2,ATM,BRIP1,或PALB2基 因的遗传性，生殖器官癌症家族病史，或长期接触环境致癌物(36)而导致这些 妇女具有高的或增加的乳腺癌遗传风险或环境带来的风险。在其它实施方式 中，本文描述的通式(I)和通式(II)小分子化合物可用作每年42,000名诊断为癌 前病变(原位导管癌/DCIS)的高危妇女的长期预防措施，她们大多数将发展为 侵袭性腺癌(37)。重要的是，本文描述的研究进一步表明AhR在几乎所有癌 症类型中都是超表达的且具有组成型活性的，所述癌症类型包括其它的上皮 细胞瘤，诸如前列腺，肺和胰腺导管细胞癌。因此，在一些实施方式中，本 文描述的化合物可用于治疗癌症。

图1显示AhRR对AhR的抑制上调p21并减小MCF-10F的生长。 编码GFP或GFP的慢病毒载体和AhR阻抑物(AhRR)稳定转导到MCF-10F 细胞用以抑制AhR活性。通过流式细胞计量仪选择低AhRR-GFP和高 的细胞。以相等数目接种细胞，1-6天后测定细胞数目。插入：对 照或AhRR-转导细胞中p21蛋白水平。

图2证实AhRR对AhR的抑制可以抑制基质胶中肿瘤侵袭。对照 (pSport)或AhR阻抑物质粒瞬时转染恶性BP1和Hs578T细胞，用以抑制AhR 活性，并接种于基质胶。5-7天后进行拍照。

图3证实AhR siRNA对AhR的下调可以抑制博伊登室中的侵袭。 对照或AhR-特异性siRNA瞬时转染恶性BP1和Hs578T细胞，并接种于无血 清培养基的上闸室(upper chamber)。将含血清培养基加入到下闸室。48小时 后测定含基质胶的膜上方和下方的细胞数目，并计算下闸室(lower chamber) 中细胞百分比。*p 0.04；**p 0.03。

图4A-4B显示对AhR激动剂和拮抗剂的高通量筛选。图4A显示 将表达AhR-驱动的GFP报道分子构建体的H1G1细胞接种至384孔板，并单 独用候选AhR调节剂(黑线)或者与BNF(亮线)一起对H1G1细胞进行处理， 其中BNF是一种已知的AhR激动剂。24小时后，测量GFP荧光性，细胞染 色测生活力。黑圈表示为AhR抑制剂而亮圈表示为激动剂。图4B显示来自\"A” 中鉴定的无毒化合物的数据，在BNF存在下，滴定所述化合物以计算IC50。 在这种半自动化检测中筛选了超过4,000化合物。

图5A-5B证实CH223191和CMLD 2166抑制组成型AhR活性和 细胞生长。图5A显示来自恶性BP1和永生化MCF-10F细胞的数据，这些细 胞用AhR-响应的pGudLuc瞬时转染，并用载体(DMSO)，CH2231 91或2166 处理。24小时后测定pGudLuc的活性。图5B显示来自BP1和MCF-10F细 胞的数据，这些细胞在DMSO,CH2231 91或2166存在下生长18小时，并用 3H-胸苷掺入测定。*p 0.05。

图6证实了用DMBA，一种AhR激动剂，刺激细胞之后， CB7993113阻断了AhR向细胞核的易位。用载体或1-10μM CH223191处理 Hepa-1细胞。1小时后，用0.1μM DMBA(其上表示的)处理细胞，并培养30 分钟。收获细胞，并从细胞质和细胞核中提取蛋白质。提取的蛋白质接受AhR 或β-肌动蛋白作为内参照的特异性免疫印迹检测。数据代表3个独立的实验。

图7A-7B证实CH223191,CMLD-2166和CMLD-2186抑制肿瘤 侵袭。在DMSO，10-5M CMLD-2166，(2166的对映异构体)或 CH223191存在下，Hs578T细胞培养于博伊登室(图7A)或基质胶(图7B)中， 在2天(博伊登室)或7天(基质胶)后检测侵袭力。

图8A-8B证实CB7993113能够在体内阻断有效价的AhR配体和 原型PAH，DMBA的急性毒性作用，并且通过用CB7993113处理，受DMBA 影响的骨髓细胞的3个亚群都被复活。图8A显示来自C57BL/6小鼠(6/组)的 数据，这些小鼠在-1天和0天给予腹腔注射载体(油)或50mg/kg CB7993113。 然后，给予小鼠注射50mg/kg DMBA。48小时后处死小鼠。将骨髓造血干细 胞从骨骼中去除，并对有生命力的细胞进行计数。数据表示为有生命力的白 血细胞的平均数+SE。**p 0.01,***P 0.001，学生t-检验。图8B确认了图 8A所示的数据，并进一步证实通过用CB7993113处理，受DMBA影响的骨 髓细胞的3个亚群都被复活。如图8A处理C57BL/6小鼠(6/组)。48小时后， 用流式细胞计量仪测定有生命力的骨髓pro B细胞，pre B细胞，和中性粒细 胞的百分比和数目。数据表示为每个亚型有生命力的细胞的平均数+SE。 (*p 0.05,**P 0.01，学生t-检验)。

图9描述了形状-和电性相似性搜索的计算机策略。使用OpenEye 程序OMEGA(版本2.2.1)可将SMILES字符串扩展至3D构象数据库，使在 (1)中描述的每种方法在基态之上8kcal/mol的能量窗和and 的msd 截断值(msd cutoff)。这些实验中的最大可旋转键达到16个。为了加速这 种运算，使用程序makefragmentlib可预先生成片段库。然后，使用ROCS(版 本2.3.1)搜索3D构象数据库，询问前20位最低能量构象最大效价的HTS命 中化合物(hits)，使用OMEGA进行确定。使用内置彩色力场可运行形状比 较程序ROCS，基于它们的形状的谷本(Tanimoto)总数和色彩分值(公认为\"组 合得分”(\"combo score”))，可对命中化合物进行分级。使用EON可对ROCS 的最高分值重叠进行静电重叠比较。对于命中化合物表的分级，静电谷本组 合分值(Tanimoto combo score)可用于分级。这是形状谷本和泊松-波尔茨曼 (Poisson-Boltzman)静电谷本的总数。来自每个商品集的前200化合物可被获 得，并在AhR高通量功能检测中进行筛选。

图10证实化合物CMLD-2166和CB7993113结合人类AhR。化合 物CMLD-2166和CB7993113与翻译的人类AhR和放射性标记的TCDD(二 噁英)，一种高亲和力AhR配体，在体外混合。然后，复合物在蔗糖密度梯度 中分离并检测其片段的放射性。片段13-16中可见信号的减弱(放射性标记的 TCDD的代替)，表明受测化合物结合到了AhR且TCDD被代替。这些结果 证实这些化合物是竞争性AhR抑制剂。

图11证实AhR抑制剂不阻断PPARγ-介导的转录。过氧化物酶 体增殖子激活受体-γ(PPARγ)，它的二聚化伴侣，RXR，PPARγ-驱动的荧 光素酶报道分子构建体，和对照CMV-驱动的GFP报道分子都分别转染Cos7 细胞24小时。然后，用载体，10μM AhR抑制剂CH223191，50μM AhR抑 制剂CMLD-2166，或10μM AhR抑制剂CB7993113(这些代表AhR抑制剂的 高剂量)处理细胞。1小时后加入罗格列酮(1μM)，一种强PPARγ激动剂， 18-24小时之后，对PPAR-驱动的报道分子活性(荧光素酶强度)进行细胞检测， 标准化为GFP信号。从4个实验汇集数据。与它们阻断AhR-驱动的报道分 子活性的能力不同的是，AhR抑制剂对PPAR-驱动的报道分子活性没有影响。

图12证实AhR siRNA转染阻在断基质胶中肿瘤侵袭。对照siRNA 或AhR siRNA瞬时转染BP1或Hs578T人类乳房肿瘤细胞以敲低AhR表达， 且细胞在基质胶中培养6天。所显示的是单细胞在那6天中由生长的肿瘤细 胞克隆。

图13证实多西环素-诱导的AhR shRNA阻断基质胶中肿瘤侵袭。 用多西环素-诱导的对照(乱序的/非沉默的)shRNA(左)或AhR-特异性 shRNA(右)稳定转导Hs578T细胞。用多西环素处理细胞以激活对照和AhR shRNA载体，且细胞在基质胶中培养5天。

图14证实AhR抑制剂CB993113阻断在基质胶中BP1肿瘤侵袭。 在载体(左)或5uM CB7993113存在下，BP1细胞在基质胶中培养5天。在最 高测试剂量，在10uM下，CB7993113是无毒的。

图15是简略地描绘了AhR抑制剂和激动剂如何能够抑制肿瘤侵 袭。

图16A-16B证实AhR激动剂降低了基质胶中人类乳房肿瘤细胞(BP1)侵袭。在载体，5uM DIM(16A)，载体或5uM CB7950998(16B)存在下， BP1细胞在基质胶中培养5天。

希望不受理论的束缚或限制，本文描述的数据也表明一些组成型 AhR激动剂上调CYP1A1和CYP1B1表达，其中CYP1A1和CYP1B1二者都 与增加的人类乳腺癌、卵巢癌和肺癌感染的风险有关(36,39-44)。

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