class=\"container-fluid\">支持数据相关产品产品使用方案BackgroundPathwaysCitations & ReviewsOn Page MenuProductsPrimary AntibodiesPhospho-HSP27 (Ser82) AntibodyPhospho-HSP27 (Ser82) Antibody#2401Reviews ()Citations (109)Filter:WBIHCIFWestern blot 分析提取物HeLa 细胞，使用 Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody（上）或对照 HSP27 抗体（下）。如所示，HeLa 细胞在 42ºC 下孵育 0-2 小时。显示更少显示更多 使用 Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody #2401（上）或对照 HSP27 Antibody #2402 对各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析(下).秀乐ssShow More 使用 Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody (A,B) 或 HSP27 (A,B) 或 HSP27 ( G31) 单克隆抗体 #2402 (C,D)。显示更少显示更多 在对照肽（左）或抗原存在下使用 Phospho-HSP-27 (Ser82) 抗体对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析特定肽（右）。显示更少显示更多\"免疫荧光Im年龄 1：Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody\">使用 Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody（绿色）对经过茴香霉素处理（左）或未处理（右）的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 Alexa 标记Fluor® 555 鬼笔环肽（红色）。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（荧光 DNA 染料）。显示更少显示更多图片库详细了解我们如何获取图像 × Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody 2401 Toggle Between Dark and Light ModesFilter:WBIHCIF Western使用 Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody（上图）或对照 HSP27 抗体（下图）对 HeLa 细胞提取物进行印迹分析。HeLa 细胞如图所示在 42ºC 下孵育 0-2 小时。使用 Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody #2401（上）或对照 HSP27 Antibody #2402（下）对各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。免疫组化分析使用 Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody (A,B) 或 HSP27 (G31) Monoclonal Antibody #2402 (C,D) 未经处理（A、C）或经 λ 磷酸酶处理（B、D）的石蜡包埋人乳腺癌). 在对照肽（左）或抗原特异性肽（右）存在的情况下，使用 Phospho-HSP-27 (Ser82) 抗体对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。共聚焦免疫荧光分析HeLa 细胞，经过茴香霉素处理（左）或未处理（右），使用 Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody（绿色）。肌动蛋白丝已用 Alexa Fluor® 555 鬼笔环肽（红色）标记。蓝色假彩色 = DRAQ5® #4084 (荧光 DNA 染料）。购买#2401Cat.#SizeQty.Price2401S100µl$3452401L300µl$814

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抗体保证FAQTech Support-- Datasheet --Without ImagesWith ImagesSDS: Choose Your RegionAmerica - EnglishEurope - ChineseEurope - DutchEurope - EnglishEurope - FrenchEurope - GermanEurope - ItalianEurope - KoreanEurope - PortugueseEurope - SpanishEurope - SwedishCertificate of AnalysisSupporting DataRelated ProductsProduct UsageProtocolsBackgroundPathwaysCitations & ReviewsSupporting DataREACTIVITYH MR MkSENSITIVITYEndogenousMW (kDa)27SOURCERabbitApplication Key:WB-Western BlotIP-免疫沉淀IHC-免疫组织化学ChIP-染色质免疫沉淀C&R-CUT&RUNC&T-CUT&TagDB-Dot BloteCLIP-eCLIPIF-免疫荧光F-流式细胞术物种交叉反应性 Key：H-HumanM-MouseR-RatHm-HamsterMk-MonkeyVir-VirusMi-MinkC-ChickenDm-D。 melanogasterX-XenopusZ-ZebrafishB-BovineDg-DogPg-PigSc-S。酿酒酵母 Ce-C. elegansHr-HorseGP-Guinea PigRab-RabbitAll-All Species Expected相关产品

产品信息

产品使用信息ApplicationDilutionWestern Blotting1:1000免疫组织化学（石蜡）1:50免疫荧光（免疫细胞化学）1:25储存以10 mM钠HEPES提供(pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA 和 50% 甘油。储存于–20°C。不要等分抗体。方案选择您的方案Western Blotting免疫组织化学（石蜡）免疫荧光（免疫细胞化学）PRINT

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Western Blotting Protocol

对于蛋白质印迹，将膜与稀释的一抗一起孵育5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 在 4°C 下轻轻摇动，过夜。

注意：有关推荐的抗体稀释度，请参阅一抗产品网页。

A。溶液和试剂

从样品制备到检测，Western Blot 所需的试剂现在都在一个方便的试剂盒中：#12957 Western Blotting Application Solutions Kit

注意：用反渗透去离子（ ... (#12498) 要制备 1 L 1X TBS：将 100 ml 10X 添加到 900 ml dH2O，混合 1X SDS 样品缓冲液：蓝色上样包 (#7722) 或 Red 上样包 (#7723) 通过将 1/10 体积的 30X DTT 添加到 1 体积的 3X SDS 上样缓冲液中来制备新鲜的 3X 还原上样缓冲液。用 dH2O 稀释至 1X。10X Tris-甘氨酸 SDS 电泳缓冲液：(#4050) 要制备 1 L 1X 电泳缓冲液：将 100 ml 10X 电泳缓冲液添加到 900 ml dH2O 中，混合。10X Tris-甘氨酸转移缓冲液：(#12539)要制备 1 L 1X 转移缓冲液：将 100 ml 10X 转移缓冲液添加到 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O 中，混合。10X Tris Buffered Saline with Tween® 20 (TBST)：(#9997) 要制备 1 L 1X TBST：添加 100 ml 10X TBST 至 900 ml dH2O，混合。脱脂奶粉：(#9999)。封闭缓冲液：1X TBST 含 5% w/v 脱脂奶粉；对于 150 ml，将 7.5 g 脱脂奶粉添加到 150 ml 1X TBST 中并充分混合。洗涤缓冲液：(#9997) 1X TBST。牛血清白蛋白 (BSA)：(#9998)。一抗稀释缓冲液：1X TBST 与 5 ％牛血清白蛋白；对于 20 ml，将 1.0 g BSA 添加到 20 ml 1X TBST 中并充分混合。生物素化蛋白梯检测包：(#7727).Blue Prestained Protein Marker, Broad Range (11-250 kDa)：(#59329).Blotting 膜和纸：(#12369) 该协议已针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常建议孔径为 0.2 µm。与 HRP 偶联的二抗：抗兔 IgG，HRP 连接抗体 (#7074)。检测试剂：SignalFire™ ECL 试剂 (#6883)。B. Protein BlottingA general protocol for sample preparation. 通过在所需时间内添加含有调节剂的新鲜培养基来处理细胞。用 1X PBS 清洗细胞；吸出。通过添加 1X SDS 样品缓冲液（6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径板每孔 500 µl）来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移到微量离心管中。置于冰上。超声处理 10-15 秒以完成细胞裂解和剪切 DNA（以降低样品粘度）。将 20 µl 样品加热至 95-100°C 5 分钟；在冰上冷却。微量离心 5 分钟。

将 20 µl 上样到 SDS-PAGE 凝胶（10 厘米 x 10 厘米）上。

注意：上样预染分子量标记（#59329，10 µl/车道）到veri推荐使用 fy 电转移和生物素化蛋白质梯（#7727，10 µl/泳道）来确定分子量。

电转移至硝酸纤维素膜 (#12369).C.膜封闭和抗体孵育

注意：体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜；对于不同尺寸的膜，相应地调整体积。

I.膜封闭（可选） 转移后，在室温下用 25 ml TBS 洗涤硝酸纤维素膜 5 分钟。将膜在 25 ml 封闭缓冲液中室温孵育 1 小时。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。二。一抗孵育将膜和一抗（按照产品网页中推荐的适当稀释度和稀释剂）在 10 ml 一抗稀释缓冲液中孵育，在 4°C 下轻轻搅拌过夜。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。用 Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody (#7074 at 1:2000) 和抗生物素，HRP-linked Antibody (#7075) 孵育膜在 1:1000–1:3000）检测 10 ml 封闭缓冲液中的生物素化蛋白标记物，室温下轻轻搅拌 1 小时。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。继续检测（D 部分） .D.蛋白质检测使用说明：在 TBST 中将膜结合的 HRP（抗体偶联物）洗涤 3 次，每次 5 分钟。通过稀释一份 2X 试剂 A 和一份 2X 试剂 B（例如，用于 10毫升，加入 5 毫升试剂 A 和 5 毫升试剂 B）。充分混合。将底物与膜一起孵育 1 分钟，去除多余的溶液（膜保持湿润），用塑料包裹并暴露在 X 射线胶片上。

* 避免反复接触皮肤。

2005 年 6 月发布

2020 年 6 月修订

方案 ID：10

免疫组织化学（石蜡）A。溶液和试剂

注意：用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

二甲苯。无水变性乙醇，组织学级（100% 和 95%）。去离子水 (dH2O)。苏木精（可选）。洗涤缓冲液：1X Tris Buffered Saline with Tween® 20 (TBST)：要制备 1L 1X TBST，添加 100ml 10X Tris Buffered Saline with Tween® 20 ( #9997) 至 900 ml dH20，混合。SignalStain® 抗体稀释剂 (#8112)。1X 柠檬酸盐暴露溶液：要制备 250 mL 1X 柠檬酸盐暴露溶液，请用 25 ml SignalStain® 柠檬酸盐暴露溶液 (10X) (#14746) 稀释225 mL dH2O.3% 过氧化氢：要制备 100 ml，将 10 ml 30% H2O2 添加到 90 mldH2O。封闭溶液：TBST/5% 正常山羊血清或 1X 无动物封闭溶液。TBST/5% 正常山羊血清：向 5 ml 1X TBST 添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。1X Animal-Free Blocking Solution：向 4 mL dH2O 添加 1 ml Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。检测系统：SignalStain ® Boost IHC 检测试剂（HRP，兔 #8114）。底物：SignalStain® DAB 底物试剂盒 (#8059)。苏木精：苏木精 (#14166)。封固剂：SignalStain® 封固剂 (#14177)。B.德帕拉固定/再水化

注意：在此过程中任何时候都不要让载玻片变干。

切片脱蜡/水合：切片在二甲苯中洗涤 3 次，每次 5 分钟。切片在 100% 的 100% 洗涤中孵育两次乙醇每次 10 分钟。在 95% 乙醇中孵育切片两次，每次 10 分钟。在 dH2O 中洗涤切片两次，每次 5 分钟。C。抗原去掩蔽

对于柠檬酸盐：在微波中加热载玻片，浸没在 1X 柠檬酸盐去掩蔽溶液中，直到开始沸腾；随后在亚沸腾温度 (95°-98°C) 下 10 分钟。在工作台上冷却载玻片 30 分钟。

D.染色 在 dH2O 中洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。在 3% 过氧化氢中孵育切片 10 分钟。在 dH2O 中洗涤切片两次，每次 5 分钟。在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。用 100–400 µl 封闭每个切片室温下 1 小时的首​​选封闭溶液。去除封闭溶液并添加 100–400 µl 一抗稀释在 SignalStain® AntibodyDiluent (#8112) 中每个部分。在 4°C 下孵育过夜。将 SignalStain® Boost 检测试剂（HRP，兔 #8114）平衡至室温。去除抗体溶液并用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。用 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection 覆盖切片根据需要使用试剂（HRP，兔 #8114）。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。将 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB 显色剂浓缩液加入 1 ml SignalStain® DABDiluent 中，并在使用前充分混合。应用 100–将 400 µl SignalStain® DAB 加入每个切片并密切监测。 1–10 分钟通常可提供可接受的染色强度。将载玻片浸入 dH2O 中。如果需要，用苏木精 (#14166) 对切片进行复染。在 dH2O 中洗涤切片两次，每次 5 分钟。脱水切片：将切片在 95% 乙醇中孵育两次每次 10 秒。在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。在二甲苯中重复，孵育切片两次每次 10 秒。用盖玻片和封固剂 (#14177) 安装切片。检测试剂/底物相容性推荐检测试剂 SignalStain® Boost IHC 检测试剂（HRP，兔）#8114SignalStain® Boost IHC 检测试剂（AP，兔）#18653COMPATIBLE CHROMOGENSignalS田® DAB 底物试剂盒 #8059SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #6 9644

注意：使用本协议中指定以外的检测试剂可能需要进一步优化一抗以考虑检测试剂的不同敏感性。

2010 年 2 月发布

已修订2020 年 6 月

方案 ID：283

免疫荧光（免疫细胞化学）A。溶液和试剂

A使用我们的 #12727 免疫荧光应用解决方案套件中高效且具有成本效益的预制试剂获得更高质量的免疫荧光图像

注意：使用反渗透去离子 (RODI) 水或同等等级的水制备溶液。

p>20X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：(9808) 要制备 1L 1X PBS：将 50 ml 20X PBS 添加到 950 ml dH2O 中，混合。将 pH 值调节至 8.0。甲醛：16%，不含甲醇，Polysciences, Inc.（目录号 18814），使用新鲜的并打开的小瓶在 4°C 避光条件下储存，在 1X PBS 中稀释以备使用。封闭缓冲液（1X PBS / 5 % 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，添加 0.5 ml 来自与二抗相同物种的正常血清（例如，Normal Goat Serum (#5425)）和 0.5 mL 20X PBS 至 9.0 mL dH2O，混合均匀。搅拌的同时，加入 30 µl Triton™ X-100。抗体稀释缓冲液（1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100）：要制备 10 ml，将 30 µl Triton™ X-100 添加到 10 ml 1X PBS 中。混合均匀，然后加入 0.1 g BSA (9998)，混合。

推荐荧光染料偶联抗兔二抗：

抗兔 IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\') 2 片段（Alexa Fluor® 555 偶联物）#4413Anti-Rabbit IgG (H+L)，F(ab\')2 片段（Alexa Fluor® 594 偶联物）#8889Anti-Rabbit IgG (H+L)，F(ab\') 2 片段（Alexa Fluor® 647 偶联物）#4414Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961).B.标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意：细胞应直接在多孔板、腔室载玻片或盖玻片上生长、处理、固定和染色。

吸出液体，然后用在 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛覆盖细胞至 2–3 mm 的深度。

注意：甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

让细胞固定 15 分钟在室温下吸出固定剂，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。继续进行免疫染色（C 部分）。免疫染色

注意：所有后续孵育均应在室温下进行除非另有说明，否则应在潮湿的、不透光的盒子或带盖的培养皿/平板中保持温度，以防止干燥和荧光染料褪色。

在封闭缓冲液中封闭样品 60 分钟。封闭时，按照产品网页上的说明稀释一抗抗体稀释缓冲液。吸出封闭液，应用稀释的一抗。在 4°C 下孵育过夜。在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。在抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中孵育样本 1-2 小时室温避光。用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) 盖玻片。为获得最佳效果，让封固剂固化在室温下过夜。对于长期储存，请将载玻片平放于 4°C 避光保存。

2006 年 11 月发布

2013 年 11 月修订

方案 ID： 24

特异性/灵敏度Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody 仅在丝氨酸 82 磷酸化时检测内源性 HSP27。抗体不识别其他热休克蛋白。物种反应性：

Human, Mouse, Rat, Monkey

Source / Purification

使用与人 HSP27 的 Ser82 周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体。抗体通过蛋白A和肽亲和层析纯化。

研究背景

热休克蛋白(HSP) 27是一种小HSP，在各种细胞类型和组织中以不同水平组成型表达。与其他小型 HSP 一样，HSP27 在转录和翻译后水平均受到调节 (1)。为了应对压力，HSP27 表达增加数倍，以赋予细胞对不利环境变化的抵抗力。作为 p38 MAP 激酶通路激活的结果，HSP27 在 Ser15、Ser78 和 Ser82 位点被 MAPKAPK-2 磷酸化 (2,3)。的磷酸化HSP27 导致其三级结构发生变化，从大型同型多聚体转变为二聚体和单体 (4)。已经表明，HSP27 的磷酸化和浓度增加可调节肌动蛋白聚合和重组 (5,6)。

Arrigo, A.P. 和 Landry, J.（1994 年）冷泉港实验室出版社，纽约，335-373.Landry , J. 等人。 (1992) J. Biol。化学。 267, 794-803.Rouse, J. 等人。 (1994) Cell 78, 1027-1037.Rogalla, T. 等人。 (1999) 生物学杂志。化学。 274, 18947-18956.Lavoie, J. 等人。 (1993) J. Biol。化学。 268, 24210-24214.Rousseau, S. 等人。 (1997) Oncogene 15, 2169-2177.Pathways

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Select Your Pathway抑制细胞凋亡调节 P38 MAPKs×上游/下游蛋白质

STRING - 已知和预测的蛋白质-蛋白质相互作用。

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UniProt ID:P04792

Entrez-Gene Id:3315

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