class=\"container-fluid\">Supporting DataRelated ProductsProduct UsageProtocolsBackgroundPathwaysCitations & ReviewsOn Page MenuProductsPrimary AntibodiesGAPDH (14C10) Rabbit mAbRecombinant: Superior lot-to-lot consistency, continuous supply, and animal-free manufacturing.\">RRecombinant×什么是重组抗体和为何如此重要？

与传统抗体相比，重组抗体具有几个关键优势。这些优势包括批次间一致性、连续供应和无动物生产。因此，重组抗体在科学研究中的应用越来越多，特别是作为解决持续的可重复性危机的一种手段。

什么是重组抗体？

传统的多克隆和单克隆抗体是正常B细胞​​发育和基因重组的产物。它们是gen通过用抗原对动物进行免疫以引发免疫反应而产生。多克隆抗体由许多不同的 B 细胞克隆分泌并识别多个抗原表位，而单克隆抗体源自单个 B 细胞克隆并且仅针对一个表位。

重组抗体是单克隆抗体，但它们的产生涉及体外遗传操作。将抗体基因克隆到表达载体中后，将其转染到合适的宿主细胞系中进行抗体表达。哺乳动物细胞系最常用于重组抗体生产，尽管细菌、酵母或昆虫来源的细胞系也适用。

出色的批次间一致性

因为重组抗体生产涉及对抗体光进行测序和重型链条，这是一个高度可控且可靠的过程。相比之下，用于生产单克隆抗体的基于杂交瘤的系统易受遗传漂移和不稳定性、增加g 批次间差异或抗体表达损失的可能性。重组抗体在批次之间高度一致，从而确保可重复的实验结果。

可扩展性

用于生产抗体的体外方法适合大规模生产，这意味着抗体可用性不太可能成为限制因素。此外，由于重组抗体序列已知，供应的连续性得到保证；在抗体将用于支持大型、长期研究的情况下，这可能是一个特别关键的因素。

无动物制造

与抗体生产的传统方法不同，重组方法无需使用动物。当多克隆抗体直接从免疫宿主的血清中纯化，单克隆抗体从杂交瘤来源的组织培养上清液或腹水中纯化时，重组抗体则从转染宿主的组织培养上清液中纯化细胞系。无论抗体是多克隆抗体、单克隆抗体还是重组抗体，在实验使用之前，都必须始终在预期应用中对其进行适当验证。在 CST，我们遵守 Hallmarks of Antibody Validation™，这是确定抗体在任何给定测定中的特异性、灵敏度和功能的六种互补策略。通过针对每种抗体产品仔细定制这些策略，我们保证 CST 抗体将按预期发挥作用，帮助您获得值得信赖的结果。

GAPDH (14C10) Rabbit mAb#2118Reviews ()Citations (6930)Filter:WBIHCIFF 使用 GAPDH (14C10) 兔单克隆抗体对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。 com/product/image/2118_fig09_W-S__20230123093735.png\" alt=\"Western Blotting Image 1: GAPDH (14C10) Rabbit mAb\">Simple Western™ 使用 GAPDH (14C10) Rabbit mAb #2118 对 HeLa 细胞的裂解物 (0.01 mg/mL) 进行分析。虚拟泳道视图 (左）显示在 1:10 和 1:50 稀释一抗时的单个目标条带（如图所示）。相应的电泳图视图（右）绘制了沿毛细管在 1:10（蓝线）和 1:一抗的 50（绿线）稀释度。该实验是在还原条件下使用 12-230 kDa 分离模块的 ProteinSimple 的 Jess™ Simple Western 仪器在还原条件下进行的。免疫组化分析使用 GAPDH (14C10) 兔单克隆抗体的石蜡包埋人前列腺癌。显示较少显示更多 在存在对照肽（左）或抗原特异性肽（右）的情况下，使用 GAPDH (14C10) 兔单克隆抗体对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。显示更少显示更多 使用 GAPDH 对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析 ( 14C10) 兔单克隆抗体（绿色）。肌动蛋白丝已用 Alexa Fluor® 555 鬼笔环肽（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（荧光 DNA 染料）。显示更少显示更多 流式细胞术和使用 GAPDH (14C10) Rabbit mAb（实线）与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对比分析 HeLa 细胞。 Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。显示更少显示更多图片库详细了解我们如何获取图像 × GAPDH (14C10)兔单克隆抗体 2118 在暗模式和亮模式之间切换过滤器：WBIHCIFF 使用 GAPDH (14C10) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。 使用 GAPDH (14C10) Rabbit mAb #2118 对 HeLa 细胞的裂解物 (0.01 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟 lane 视图（左）显示了在 1:10 和 1:50 稀释的一抗中的单个目标条带（如图所示）。相应的电泳图视图（右）绘制了 1:10（蓝线）沿毛细管的分子量化学发光图和 1:50（绿线）稀释的一抗。该实验在还原条件下使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行。 使用 GAPDH (14C10) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。 石蜡包埋人b的免疫组织化学分析在存在对照肽（左）或抗原特异性肽（右）的情况下，使用 GAPDH (14C10) Rabbit mAb 对乳腺癌进行分析。 使用 GAPDH (14C10) Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 Alexa Fluor® 555 鬼笔环肽（红色）标记。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（荧光 DNA 染料）。 流与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）相比，使用 GAPDH (14C10) Rabbit mAb（实线）对 HeLa 细胞进行细胞计数分析。抗兔 IgG (H+L)，F(ab\')2 片段（Alexa Fluor® 488 偶联物）#4412 用作二抗。购买#2118Cat。 #SizeQty.Price2118S100µl$3132118L300µl$754

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抗体保证FAQ技术支持--数据表--无图像有图像SDS : Choose Your RegionAmerica-EnglishChina-ChineseChina-EnglishEurope-DutchEurope-EnglishEurope-FrenchEurope-GermanEurope-ItalianEurope-PortugueseEurope-SpanishEurope-SwedishKorea-EnglishKorea-KoreanSupporting DataRelated ProductsProduct UsageProtocolsBackgroundPathwaysCitations & ReviewsSupporting DataREACTIVITYH M R Mk B PgSENSITIVITYEndogenousMW (kDa)37Source/IsotypeR 相关产品abbit应用程序密钥： WB-Western BlotIP-免疫沉淀IHC-免疫组化ChIP-染色质免疫沉淀C&R-CUT&RUNC&T-CUT&TagDB-Dot BloteCLIP-eCLIPIF-免疫荧光F-流式细胞术物种交叉反应键：H-HumanM-MouseR-RatHm-HamsterMk-MonkeyVir-VirusMi-MinkC-ChickenDm-D。 melanogasterX-XenopusZ-ZebrafishB-BovineDg-DogPg-PigSc-S。酿酒酵母 Ce-C. elegansHr-HorseGP-Guinea PigRab-RabbitAll-All Species Expected相关产品偶联物

产品信息

产品使用信息ApplicationDilutionWestern Blotting1:1000Simple Western™1:10 - 1:50Immunohistochemistry (Paraffin)1:400 - 1 :1600 免疫荧光（免疫细胞化学）1:50 - 1:200 流式细胞术（固定/透化）1:100 - 1:400存储以 10 mM 钠 HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和更少的形式提供大于 0.02% 的叠氮化钠。储存于 –20°C。不要等分抗体。有关本产品的无载体（BSA 和叠氮化物）版本，请参阅产品 #85925。方案选择您的方案Western Blotting免疫组织化学（石蜡）免疫荧光（免疫细胞化学）流式细胞术（固定/透化）打印

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Western Blotting Protocol

对于蛋白质印迹，将膜与稀释的一抗在 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中于 4°C 孵育并轻轻摇动, 过夜。

注意：推荐的抗体稀释度请参考一抗产品网页。

A.溶液和试剂

从样品制备到检测，Western Blot 所需的试剂现在都在一个方便的试剂盒中：#12957 Western Blotting Application Solutions Kit

注意：用反渗透去离子（ ... (#12498) 要制备 1 L 1X TBS：将 100 ml 10X 添加到 900 ml dH2O，混合。1X SDS 样品缓冲液：蓝色上样包 (#7722) 或红色上样包 (#7723) 通过添加准备新鲜的 3X 还原上样缓冲液1/10 体积的 30X DTT 到 1 体积的 3X SDS 加载缓冲液。用 dH2O.10X Tris 稀释至 1X-甘氨酸 SDS 电泳缓冲液：(#4050) 要制备 1 L 1X 电泳缓冲液：将 100 ml 10X 电泳缓冲液添加到 900 ml dH2O 中，混合。10X Tris-甘氨酸转移缓冲液：(#12539) 要制备 1 L 1X 电泳缓冲液：将 100 ml 10X 转移缓冲液添加至 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O，混合。10X Tris 缓冲盐水与 Tween® 20 (TBST)：(#9997) 要制备 1 L 1X TBST：将 100 ml 10X TBST 添加至 900 ml dH2O，混合脱脂奶粉：(#9999)。封闭缓冲液：1X TBST 含 5% w/v 脱脂奶粉；对于 150 ml，将 7.5 g 脱脂奶粉添加到 150 ml 1X TBST 中并充分混合。洗涤缓冲液：(#9997) 1X TBST。牛血清白蛋白 (BSA)：(#9998)。一抗稀释缓冲液：1X TBST 与 5 ％牛血清白蛋白；对于 20 ml，将 1.0 g BSA 添加到 20 ml 1X TBST 中并充分混合。生物素化蛋白 Ladder 检测包：(#7727)。蓝色预染蛋白标记物，宽范围 (11-250 kDa)：(#59329)。印迹膜和纸：(#12369) 该方案已针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常建议使用 0.2 µm 的孔径。二抗结合物检测到 HRP：抗兔 IgG，HRP 连接抗体 (#7074)。检测试剂：SignalFire™ ECL 试剂 (#6883).B. Protein BlottingA general protocol for sample preparation. 通过在所需时间内添加含有调节剂的新鲜培养基来处理细胞。用 1X PBS 清洗细胞；吸出。通过添加 1X SDS 样品缓冲液（6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径板每孔 500 µl）来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移到微量离心管中。置于冰上。超声处理 10-15 秒以完成细胞裂解和剪切 DNA（以降低样品粘度）。将 20 µl 样品加热至 95-100°C 5 分钟；在冰上冷却。微量离心 5 分钟。

将 20 µl 上样到 SDS-PAGE 凝胶（10 厘米 x 10 厘米）上。

注意：上样预染分子量标记（#59329，10 µl/推荐使用 lane) 验证电转移和生物素化蛋白质 ladder（#7727, 10 µl/lane）以确定分子量。

电转移至硝化纤维素 m膜 (#12369).C.膜封闭和抗体孵育

注意：体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜；对于不同尺寸的膜，相应地调整体积。

I.膜封闭（可选） 转移后，在室温下用 25 ml TBS 洗涤硝酸纤维素膜 5 分钟。将膜在 25 ml 封闭缓冲液中室温孵育 1 小时。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。二。一抗孵育将膜和一抗（按照产品网页中推荐的适当稀释度和稀释剂）在 10 ml 一抗稀释缓冲液中孵育，在 4°C 下轻轻搅拌过夜。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。将膜与 Anti-rabbit IgG、HRP-linked Antibody（#7074，1:2000）和抗生物素、HRP-linked Antibody（#7075，1:1000–1:3000）一起孵育，以检测 10 ml 中的生物素化蛋白质标记物封闭缓冲液在室温下轻轻搅拌 1 小时。洗涤 3 次，每次 5 分钟每个 15 毫升 TBST。继续检测（D 部分）。蛋白质检测使用说明：在 TBST 中将膜结合的 HRP（抗体偶联物）洗涤 3 次，每次 5 分钟。通过稀释一份 2X 试剂 A 和一份 2X 试剂 B（例如，用于 10毫升，加入 5 毫升试剂 A 和 5 毫升试剂 B）。充分混合。将底物与膜一起孵育 1 分钟，去除多余的溶液（膜保持湿润），用塑料包裹并暴露在 X 射线胶片上。

* 避免反复接触皮肤。

2005 年 6 月发布

2020 年 6 月修订

方案 ID：10

免疫组织化学（石蜡）A。溶液和试剂

注意：用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

二甲苯。乙醇，无水变性，组织学级（100% 和 95%）。去离子水 (dH2O)。苏木精（可选）。洗涤缓冲液：1X Tris Buffered Saline with Tween® 20 (TBST)：要制备 1L 1X TBST，添加 100ml 10X Tris B用含 Tween® 20 (#9997) 的生理盐水加入 900 ml dH20，混合。SignalStain® 抗体稀释剂 (#8112)。1X 柠檬酸盐暴露溶液：要制备 250 mL 1X 柠檬酸盐暴露溶液，请稀释 25 ml SignalStain® 柠檬酸盐暴露溶液（ 10X) (#14746) 和 225 mL dH2O.3% 过氧化氢：要制备 100 ml，请将 10 ml 30% H2O2 添加到 90 mldH2O。封闭液：TBST/5% 正常山羊血清或 1X 无动物封闭液。 TBST/5% Normal Goat Serum：向 5 ml 1X TBST 添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。1X Animal-Free Blocking Solution：向 4 mL dH2O 添加 1 ml Animal-Free Blocking Solution (5X) (# 15019)。检测系统：SignalStain® Boost IHC 检测试剂（HRP，兔 #8114）。底物：SignalStain® DAB 底物试剂盒 (#8059)。苏木精：苏木精 (#14166)。封固剂：SignalStain® 封固剂 (#14177 ).B.脱蜡/再水化

注意：在此过程中任何时候都不要让载玻片变干。

脱蜡/水化切片：孵育切片三次洗涤 of 二甲苯每次​​ 5 分钟。在 100% 乙醇中孵育切片两次，每次 10 分钟。在两次 95% 乙醇中孵育切片，每次 10 分钟。在 dH2O 中洗涤切片两次，每次 5 分钟。抗原去掩蔽

对于柠檬酸盐：在微波中加热载玻片，浸没在 1X 柠檬酸盐去掩蔽溶液中，直到开始沸腾；随后在亚沸腾温度 (95°-98°C) 下 10 分钟。在工作台上冷却载玻片 30 分钟。

D.染色 在 dH2O 中洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。在 3% 过氧化氢中孵育切片 10 分钟。在 dH2O 中洗涤切片两次，每次 5 分钟。在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。用 100–400 µl 封闭每个切片1 小时的首​​选封闭溶液在室温下处理 1 小时。去除封闭溶液并向每个切片添加 100–400 µl 用 SignalStain® AntibodyDiluent (#8112) 稀释的一抗。在 4°C 下孵育过夜。将 SignalStain® Boost 检测试剂（HRP，兔 #8114）平衡至室温。去除抗体溶液并洗涤 s用洗涤缓冲液清洗 3 次，每次 5 分钟。根据需要用 1–3 滴 SignalStain® Boost 检测试剂（HRP，兔 #8114）覆盖切片。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。将 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB 显色剂浓缩液加入 1 ml SignalStain® DABDiluent 中，并在使用前充分混合。应用 100–将 400 µl SignalStain® DAB 加入每个切片并密切监测。 1–10 分钟通常可提供可接受的染色强度。将载玻片浸入 dH2O 中。如果需要，用苏木精 (#14166) 对切片进行复染。在 dH2O 中洗涤切片两次，每次 5 分钟。脱水切片：将切片在 95% 乙醇中孵育两次每次 10 秒。在 100% 乙醇中重复，将切片孵育两次，每次 10 秒。在二甲苯中重复孵育切片两次，每次 10 秒。用盖玻片和封固剂 (#14177) 封固切片。检测试剂/底物相容性推荐检测试剂SignalStain®Boost IHC 检测试剂（HRP，兔）#8114SignalStain® Boost IHC 检测试剂（AP，兔）#18653COMPATIBLE CHROMOGENSignalStain® DAB Substrate Kit #8059SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632Signal Stain® 超蓝碱性磷酸酶底物试剂盒 #12824SignalStain® 深黑过氧化物酶底物试剂盒 #72986SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644检测试剂的灵敏度。

2010 年 2 月发布

2020 年 6 月修订

方案 ID：283

免疫荧光（免疫细胞化学）A.溶液和试剂

使用我们的 #12727 免疫荧光应用解决方案套件中高效且经济的预制试剂获得更高质量的免疫荧光图像

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

20X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：(9808) 要制备 1L 1X PBS：将 50 ml 20X PBS 添加到950 ml dH2O，混合。将 pH 值调节至 8.0。甲醛：16%，不含甲醇，Polysciences, Inc.（目录号 18814），使用新鲜的并打开的小瓶在 4°C 避光条件下储存，在 1X PBS 中稀释以备使用。封闭缓冲液（1X PBS / 5 % 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，添加 0.5 ml 来自与二抗相同物种的正常血清（例如，Normal Goat Serum (#5425)）和 0.5 mL 20X PBS 至 9.0 mL dH2O，混合均匀。搅拌的同时，加入 30 µl Triton™ X-100。抗体稀释缓冲液（1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100）：要制备 10 ml，将 30 µl Triton™ X-100 添加到 10 ml 1X PBS 中。混合均匀，然后加入 0.1 g BSA (9998)，混合。

推荐的荧光染料偶联的抗兔二抗：

抗兔 IgG (H+L)，F(ab\')2 片段（Alexa Fluor ® 488 Conjugate) #4412Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #4413Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8889Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071), Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961).B.标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意：细胞应直接在多孔板、腔室载玻片或盖玻片上生长、处理、固定和染色。

吸出液体，然后用在 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛覆盖细胞至 2–3 mm 的深度。

注意：甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

让细胞固定 15 分钟在室温下吸出固定剂，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。继续进行免疫染色（C 部分）。免疫染色

注意：除非另有说明，否则所有后续孵育均应在室温下进行，以防止干燥和荧光染料褪色。

在封闭缓冲液 f 中封闭样品或 60 分钟。在封闭时，按照产品网页上的说明在抗体稀释缓冲液中稀释以制备一抗。吸出封闭溶液，应用稀释的一抗。在 4°C 下孵育过夜。在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。孵育在抗体稀释缓冲液中室温避光稀释荧光染料偶联二抗中的样本 1–2 小时。在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® 盖玻片Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961)。为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。对于长期储存，请将载玻片平放于 4°C 避光保存。

2006 年 11 月发布

2013 年 11 月修订

方案 ID： 24

流式细胞术，兔抗体 A 的甲醇透化协议。溶液和试剂

本方案所需的所有试剂均可在我们的细胞内流式细胞仪中一起高效购买试剂盒（甲醇）#13593，或单独使用下面列出的目录号。

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：要制备 1 L 1X PBS：将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水混合物中。4% 甲醛，无甲醇 (#47746)100% 甲醇 (#13604)：使用前冷藏抗体稀释缓冲液：购买现成的-使用流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616)，或通过将 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 溶解在 100 ml 1X PBS 中来制备 0.5% BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。推荐的抗兔二抗::抗兔 IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412Anti-Rabbit IgG (H+L), F (ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8889Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414Anti-Rabbit IgG (H+L), F (ab\')2 Fragment (PE Con​​jugate) #79408

注意：当您的实验中包含荧光细胞染料时（包括ng 活力染料、DNA 染料等），请参阅染料产品页面以了解推荐的方案。请访问 www.cellsignal.com 以获取经过验证可用于流式细胞术的细胞染料的完整列表。

B.固定

注意：贴壁细胞或组织应在固定前解离并置于单细胞悬液中。

注意：最佳离心条件将因细胞类型和试剂体积而异。通常，150-300g 1-5 分钟就足以沉淀细胞。

注意：如果使用全血，裂解红细胞并在固定前离心洗涤。

注意：如果表位被甲醛和/或甲醇破坏，则可以在固定前添加靶向 CD 标记或其他细胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中，抗体将保持与目标靶标的结合。但是，请注意，某些荧光团（包括 PE 和 APC）会被甲醇损坏，因此不应在进行之前添加稳定化。如果您不确定，请进行小规模实验。

离心沉淀细胞并去除上清液。每 100 万个细胞用大约 100 µl 4% 甲醛重悬细胞。充分混合以分离沉淀并防止单个细胞交联。在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。用过量的 1X PBS 离心洗涤。在适当的废物容器中丢弃上清液。在 0.5-1 ml 1X PBS 中重悬细胞。继续进行透化步骤。或者，细胞可以在 4°C 的 1X PBS.C 中储存过夜。通透化通过将冰冷的 100% 甲醇缓慢加入预冷的细胞中来通透细胞，同时轻轻涡旋，使甲醇的最终浓度达到 90%。在冰上通透化至少 10 分钟。继续进行免疫染色（D 部分）或储存细胞在 -20°C 的 90% 甲醇中。免疫染色

注意：使用血细胞计数器或替代方法对细胞进行计数。

将所需数量的细胞等分到试管或孔中。 （生成器盟友，每次测定 5x105 至 1x106 个细胞。）通过在过量的 1X PBS 中离心以去除甲醇来洗涤细胞。将上清液丢弃在适当的废液容器中。必要时重复。在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞，该抗体在抗体稀释缓冲液中按推荐稀释度制备或通过滴定确定。在室温下孵育 1 小时。在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中离心洗涤。丢弃上清液。重复。在 100 µl 稀释的荧光染料偶联二抗中重悬细胞（按推荐稀释度在抗体稀释缓冲液中制备）。在室温下孵育 30 分钟。避光。在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中离心洗涤。丢弃上清液。重复。在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞并在流式细胞仪上进行分析。

2009 年 7 月发布

2020 年 6 月修订

Protocol Id : 404

Specificity / SensitivityGAPDH (14C10) 兔单克隆抗体检测内源性水平总 GAPDH 蛋白的 ls。物种反应性：

Human, Mouse, Rat, Monkey, Bovine, Pig

根据 100% 序列同源性预测反应的物种：抗原序列用于生产此抗体与此处列出的物种具有 100% 的序列同源性，但反应性尚未经过 CST 测试或确认有效。我们的抗体性能保证不涵盖对这些物种使用此产品。

Pig

Source / Purification

单克隆抗体是通过使用人 GAPDH 羧基末端附近的合成肽对动物进行免疫接种而产生的。

背景

Glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶 (GAPDH) 在糖酵解过程中催化 3-磷酸甘油醛的磷酸化。尽管在组织与组织之间存在差异表达 (1)，但 GAPDH 被认为是一种组成型表达的管家蛋白。出于这个原因，GAPDH mRNA 和蛋白质水平通常在实验中作为对照进行测量 qu对抗其他目标表达的特定变化。最近的工作阐明了 GAPDH 在细胞凋亡 (2)、基因表达 (3) 和核转运 (4) 中的作用。 GAPDH 还可能在亨廷顿病和阿尔茨海默病等神经退行性疾病中发挥作用 (4,5)。

Barber, R.D. 等人。 (2005) 生理学。基因组学 21, 389-95.Hara, M.R. 和 Snyder, S.H. (2006) 细胞分子。神经生物学。 26, 527-38.Zheng, L. 等。 (2003) Cell 114, 255-66.Bae, B.I.等。 (2006) 过程。国家队。学院。科学。美国 103, 3405-9.Wang, Q. 等。 (2005) FASEB J. 19, 869-71.数据库链接

UniProt ID:P04406

Entrez-Gene Id :2597

®\">在 PhosphoSitePlus®

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