class=\"container-fluid\">Supporting DataRelated ProductsProduct UsageProtocolsBackgroundPathwaysCitations & ReviewsOn Page MenuProductsPrimary AntibodiesPhospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAbRecombinant：卓越的批次间一致性、连续供应和无动物制造。\"> RRecombinant×什么是重组抗体，为什么它很重要？

与传统抗体相比，重组抗体具有几个关键优势。这些包括批次间的一致性、连续供应和无动物制造。因此，重组抗体抗体越来越多地用于科学研究，尤其是作为解决持续的可重复性危机的一种手段。

什么是重组抗体？

传统的多克隆抗体和单克隆抗体是正常B细胞​​发育和遗传重组的产物组合。它们是通过用抗原对动物进行免疫以引发免疫反应而产生的。多克隆抗体由许多不同的 B 细胞克隆分泌并识别多个抗原表位，而单克隆抗体源自单个 B 细胞克隆并且仅针对一个表位。

重组抗体是单克隆抗体，但它们的产生涉及体外遗传操作。将抗体基因克隆到表达载体中后，将其转染到合适的宿主细胞系中进行抗体表达。哺乳动物细胞系最常用于重组抗体生产，尽管细菌、酵母或昆虫来源的细胞系也适用。

出色的批次间一致性

因为重组抗体生产涉及对抗体光进行测序和重型链条，这是一个高度可控且可靠的过程。相比之下，用于生产单克隆抗体的基于杂交瘤的系统容易发生遗传漂变和不稳定性，增加批次间差异或抗体表达损失的可能性。重组抗体在批次之间高度一致，从而确保可重复的实验结果。

可扩展性

用于生产抗体的体外方法适合大规模生产，这意味着抗体可用性不太可能成为限制因素。此外，由于重组抗体序列已知，供应的连续性得到保证；在抗体将用于支持大型、长期研究的情况下，这可能是一个特别关键的因素。

无动物制造

与抗体生产的传统方法不同，重组方法无需使用动物。当多克隆抗体直接从免疫宿主的血清中纯化，单克隆抗体从杂交瘤来源的组织培养上清液或腹水中纯化时，重组抗体则从组织培养上清液中纯化转染宿主细胞系的产物。无论抗体是多克隆抗体、单克隆抗体还是重组抗体，在实验使用之前，都必须始终在预期应用中对其进行适当验证。在 CST，我们遵守 Hallmarks of Antibody Validation™，这是确定抗体在任何给定测定中的特异性、灵敏度和功能的六种互补策略。通过针对每种抗体产品仔细定制这些策略，我们保证 CST 抗体将按预期发挥作用，帮助您获得值得信赖的结果。

Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb#9215Reviews ( ）引用（720）过滤器：WBIFFPhospho-Erk1/2、Phospho-p38 MAPK 和 Phospho-SAPK/JNK Rabbit mAb 的特异性：NIH/3T3 细胞提取物的蛋白质印迹分析处理过的PDGF 和 UV，使用 Phospho-p38 MAPK Rabbit mAb #9215、Phospho-SAPK/JNK Rabbit mAb 和 Phospho-Erk1/2 Rabbit mAb。显示更少显示更多 提取物的蛋白质印迹分析使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb（上）或 p38 MAPK Antibody #9212（下）来自未经处理或按说明处理的 Jurkat、C6、NIH/3T3 和 COS 细胞。显示更少显示更多 使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)(3D7) Rabbit mAb（绿色）对未经处理（左）或茴香霉素处理（右）的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 Alexa Fluor® 555 标记鬼笔环肽（红色）。显示更少显示更多图片 1: Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb\">使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) 对未经处理（蓝色）或茴香霉素处理（绿色）的 Jurkat 细胞进行流式细胞术分析) 兔单克隆抗体与非特异性阴性对照抗体（红色）相比。显示更少显示更多图片库详细了解我们如何获取图像 × Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) 兔单克隆抗体 9215 Toggle Between Dark and Light ModesFilter:WBIFF Phospho-Erk1/2、Phospho-p38 MAPK 和 Phospho-SAPK/JNK 兔单克隆抗体的特异性：对经 PDGF 和 UV 处理的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析，美国ing Phospho-p38 MAPK Rabbit mAb #9215、Phospho-SAPK/JNK Rabbit mAb 和 Phospho-Erk1/2 Rabbit mAb。 使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb（上）或 p38 对未经处理或按指示处理的 Jurkat、C6、NIH/3T3 和 COS 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析MAPK 抗体 #9212（下）。 使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)(3D7) Rabbit mAb（绿色）对未经处理（左）或茴香霉素处理（右）的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 Alexa Fluor® 555 鬼笔环肽（红色）标记。 未经处理的 Jurkat 细胞的流式细胞术分析 (蓝色）或茴香霉素处理的（绿色），使用 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) 兔单克隆抗体与非特异性阴性对照抗体（红色）进行比较。购买 #9215Cat。#SizeQty.Price9215S200µl$3729215L600µl$867

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抗体保证FAQTech Support-- Datasheet --Without ImagesWith ImagesSDS: Choose Your RegionAmerica - EnglishEurope - ChineseEurope - DutchEurope - EnglishEurope - FrenchEurope - GermanEurope - ItalianEurope - KoreanEurope - PortugueseEurope - SpanishEurope - SwedishSupporting 数据相关产品产品使用协议背景途径引用和评论支持数据反应性H M R Mk Dm Pg SCENSITIVITY内源性MW (kDa)43Source/IsotypeRabbitIgGApplication Key:WB-Western BlotIP-免疫沉淀IHC-免疫组织化学ChIP-染色质免疫沉淀C&R-CUT&RUNC &T-CUT&TagDB-Dot BloteCLIP-eCLIPIF-免疫荧光F-流式细胞术物种交叉反应键： H-人M-小鼠R-大鼠Hm-仓鼠Mk-猴子Vir-病毒Mi-水貂C-鸡Dm-D。 melanogasterX-XenopusZ-ZebrafishB-BovineDg-DogPg-PigSc-S。酿酒酵母 Ce-C. elegansHr-HorseGP-Guinea PigRab-RabbitAll-All Species Expected相关产品偶联物

产品信息

产品使用信息ApplicationDilutionWestern Blotting1:1000免疫荧光（免疫细胞化学）1:100流式细胞术（固定/透化）1:25储存10份供应mM HEPES 钠 (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和少于 0.02% 的叠氮化钠。储存于 –20°C。不要等分抗体。协议选择您的方案蛋白质印迹免疫荧光（免疫细胞化学）流式细胞术（固定/透化）打印

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蛋白质印迹方案

对于蛋白质印迹，将膜与稀释的一抗以 5% w 孵育/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 在 4°C 下轻轻摇动，过夜。

注意：有关推荐的抗体稀释度，请参阅一抗产品网页。

A.溶液和试剂

从样品制备到检测，Western Blot 所需的试剂现在都在一个方便的试剂盒中：#12957 Western Blotting Application Solutions Kit

注意：用反渗透去离子（ ... (#12498) 要制备 1 L 1X TBS：将 100 ml 10X 添加到 900 ml dH2O，混合 1X SDS 样品缓冲液：蓝色加载包 (#7722) 或红色加载包 (#7723) 准备新鲜的 3X通过将 1/10 体积的 30X DTT 添加到 1 体积的 3X SDS 加载缓冲区来减少加载缓冲区。用 dH2O 稀释至 1X。10X Tris-甘氨酸 SDS 电泳缓冲液：(#4050) 要制备 1 L 1X 电泳缓冲液：将 100 ml 10X 电泳缓冲液添加到 900 ml dH2O 中，混合。10X Tris-甘氨酸转移缓冲液：(#12539)要制备 1 L 1X 转移缓冲液：将 100 ml 10X 转移缓冲液添加到 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O 中，混合。10X Tris Buffered Saline with Tween® 20 (TBST)：(#9997) 要制备 1 L 1X TBST：添加 100 ml 10X TBST 至 900 ml dH2O，混合。脱脂奶粉：(#9999)。封闭缓冲液：1X TBST 含 5% w/v 脱脂奶粉；对于 150 ml，将 7.5 g 脱脂奶粉添加到 150 ml 1X TBST 中并充分混合。洗涤缓冲液：(#9997) 1X TBST。牛血清白蛋白 (BSA)：(#9998)。一抗稀释缓冲液：1X TBST 与 5 ％牛血清白蛋白；对于 20 ml，将 1.0 g BSA 添加到 20 ml 1X TBST 中并充分混合。生物素化蛋白 Ladder 检测包：(#7727)。蓝色预染蛋白标记物，宽范围 (11-250 kDa)：(#59329)。印迹膜和纸：(#12369) 此专业tocol 已针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常建议孔径为 0.2 µm。与 HRP 偶联的二抗：抗兔 IgG，HRP 连接抗体 (#7074)。检测试剂：SignalFire™ ECL 试剂 (#6883)。B. Protein BlottingA general protocol for sample preparation. 通过在所需时间内添加含有调节剂的新鲜培养基来处理细胞。用 1X PBS 清洗细胞；吸出。通过添加 1X SDS 样品缓冲液（6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径板每孔 500 µl）来裂解细胞。立即从板上刮下细胞并将提取物转移到微量离心管中。保持在冰上。超声处理 10-15 秒以完成细胞裂解和剪切 DNA（以降低样品粘度）。将 20 µl 样品加热至 95-100°C 5 分钟；在冰上冷却。微量离心 5 分钟。

将 20 µl 上样到 SDS-PAGE 凝胶（10 厘米 x 10 厘米）上。

注意：上样预染分子量标记（#59329，10 µl/泳道）以验证电转移和生物素化蛋白推荐使用 ein ladder (#7727, 10 µl/lane) 来确定分子量。

电转移到硝酸纤维素膜 (#12369).C.膜封闭和抗体孵育

注意：体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜；对于不同尺寸的膜，相应地调整体积。

I.膜封闭（可选） 转移后，在室温下用 25 ml TBS 洗涤硝酸纤维素膜 5 分钟。将膜在 25 ml 封闭缓冲液中室温孵育 1 小时。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。二。一抗孵育将膜和一抗（按照产品网页中推荐的适当稀释度和稀释剂）在 10 ml 一抗稀释缓冲液中孵育，在 4°C 下轻轻搅拌过夜。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。用 Anti-rabbit IgG、HRP-linked Antibody（#7074，1:2000）和抗生物素、HRP-linked Antibody（#7075，1:1000–1:3000）孵育膜以检测生物素化蛋白质标记物在 10 ml 封闭缓冲液中，在室温下轻轻搅拌 1 小时。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。继续检测（D 部分）。蛋白质检测使用说明：在 TBST 中将膜结合的 HRP（抗体偶联物）洗涤 3 次，每次 5 分钟。通过稀释一份 2X 试剂 A 和一份 2X 试剂 B（例如，用于 10毫升，加入 5 毫升试剂 A 和 5 毫升试剂 B）。充分混合。将底物与膜一起孵育 1 分钟，去除多余的溶液（膜保持湿润），用塑料包裹并暴露在 X 射线胶片上。

* 避免反复接触皮肤。

2005 年 6 月发布

2020 年 6 月修订

方案 ID：10

免疫荧光（免疫细胞化学）A。溶液和试剂

使用我们#12727 免疫荧光应用解决方案套件中高效且经济的预制试剂，获得更高质量的免疫荧光图像

注意：P用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

20X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：(9808) 要制备 1L 1X PBS：将 50 ml 20X PBS 添加到 950 ml dH2O 中，混合。将 pH 值调节至 8.0。甲醛：16%，不含甲醇，Polysciences, Inc.（目录号 18814），使用新鲜的并打开的小瓶在 4°C 避光条件下储存，在 1X PBS 中稀释以备使用。封闭缓冲液（1X PBS / 5 % 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，添加 0.5 ml 来自与二抗相同物种的正常血清（例如，Normal Goat Serum (#5425)）和 0.5 mL 20X PBS 至 9.0 mL dH2O，混合均匀。搅拌的同时，加入 30 µl Triton™ X-100。抗体稀释缓冲液（1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100）：要制备 10 ml，将 30 µl Triton™ X-100 添加到 10 ml 1X PBS 中。混合均匀，然后加入 0.1 g BSA (9998)，混合。

推荐的荧光染料偶联的抗兔二抗：

抗兔 IgG (H+L)，F(ab\')2 片段（Alexa Fluor ® 488 Conjugate) #4412Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #4413Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8889Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 647)偶联物）#4414Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961).B.标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意：细胞应直接在多孔板、腔室载玻片或盖玻片上生长、处理、固定和染色。

吸出液体，然后用在 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛覆盖细胞至 2–3 mm 的深度。

注意：甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

让细胞固定 15 分钟在室温下吸出固定剂，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。继续进行免疫染色（C 部分）。免疫染色

注意：除非另有说明，否则所有后续孵育均应在室温下进行，以防止干燥和荧光染料褪色。

在封闭缓冲液中封闭样本 60 分钟.虽然e 封闭，按照产品网页上的说明在抗体稀释缓冲液中稀释制备一抗。吸出封闭溶液，应用稀释的一抗。在 4°C 下孵育过夜。在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。在荧光染料中孵育样本-在抗体稀释缓冲液中稀释的偶联二抗在室温下避光处理 1-2 小时。在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent 和DAPI (#8961)。为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。对于长期储存，请将载玻片平放于 4°C 避光保存。

2006 年 11 月发布

2013 年 11 月修订

方案 ID： 24

流式细胞术，兔抗体 A 的甲醇透化协议。溶液和试剂

本方案所需的所有试剂都可以在我们的细胞内流式细胞术试剂盒（甲醇）中一起购买#13593，或单独使用下面列出的目录号。

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。

1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：制备 1 L 1X PBS：将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水混合物中。4% 甲醛，无甲醇 (#47746)100% 甲醇 (#13604)：使用前冷藏抗体稀释缓冲液：购买即用型 Flow细胞计数抗体稀释缓冲液 (#13616)，或通过将 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 溶解在 100 ml 1X PBS 中来制备 0.5% BSA PBS 缓冲液。储存在 4°C。推荐的抗兔二抗::抗兔 IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412Anti-Rabbit IgG (H+L), F (ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 594 Conjugate) #8889Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab\')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #4414Anti-Rabbit IgG (H+L), F (ab\')2 Fragment (PE Con​​jugate) #79408

注意：当您的实验中包含荧光细胞染料时（包括活力 d是的，DNA 染料等），请参阅染料产品页面以了解推荐的方案。请访问 www.cellsignal.com 以获取经过验证可用于流式细胞术的细胞染料的完整列表。

B.固定

注意：贴壁细胞或组织应在固定前解离并置于单细胞悬液中。

注意：最佳离心条件将因细胞类型和试剂体积而异。通常，150-300g 1-5 分钟就足以沉淀细胞。

注意：如果使用全血，裂解红细胞并在固定前离心洗涤。

注意：如果表位被甲醛和/或甲醇破坏，则可以在固定前添加靶向 CD 标记或其他细胞外蛋白的抗体。在固定和透化过程中，抗体将保持与目标靶标的结合。但是，请注意，某些荧光团（包括 PE 和 APC）会被甲醇损坏，因此不应在透化之前添加。如果您不确定，请进行小规模实验。

离心沉淀细胞并去除上清液。每 100 万个细胞用大约 100 µl 4% 甲醛重悬细胞。充分混合以分离沉淀并防止单个细胞交联。在室温 (20-25°C) 下固定 15 分钟。用过量的 1X PBS 离心洗涤。在适当的废物容器中丢弃上清液。在 0.5-1 ml 1X PBS 中重悬细胞。继续进行透化步骤。或者，细胞可以在 4°C 的 1X PBS.C 中储存过夜。通透化通过将冰冷的 100% 甲醇缓慢加入预冷的细胞中来通透细胞，同时轻轻涡旋，使甲醇的最终浓度达到 90%。在冰上通透化至少 10 分钟。继续进行免疫染色（D 部分）或储存细胞在 -20°C 的 90% 甲醇中。免疫染色

注意：使用血细胞计数器或替代方法对细胞进行计数。

将所需数量的细胞等分到试管或孔中。 （通常，5x105 到每次测定 1x106 个细胞。）通过在过量的 1X PBS 中离心以去除甲醇来洗涤细胞。将上清液丢弃在适当的废液容器中。必要时重复。在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞，该抗体在抗体稀释缓冲液中按推荐稀释度制备或通过滴定确定。在室温下孵育 1 小时。在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中离心洗涤。丢弃上清液。重复。在 100 µl 稀释的荧光染料偶联二抗中重悬细胞（按推荐稀释度在抗体稀释缓冲液中制备）。在室温下孵育 30 分钟。避光。在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中离心洗涤。丢弃上清液。重复。在 200-500 µl 1X PBS 中重悬细胞并在流式细胞仪上进行分析。

2009 年 7 月发布

2020 年 6 月修订

Protocol Id : 404

Specificity / SensitivityPhospho-p38 MAP Kinase (Thr180/Tyr182) (3D7) 兔单克隆抗体检测仅当在 Thr180 和 Tyr182 处双重磷酸化时，s 内源水平的 p38 MAPK。该抗体不会与 p42/44 MAPK 或 SAPK/JNK 的磷酸化形式发生交叉反应。物种反应性：

人类、小鼠、大鼠、猴子、黑腹果蝇、猪、S . cerevisiae

根据 100% 序列同源性预测会发生反应的物种：用于生产该抗体的抗原序列与此处列出的物种具有 100% 序列同源性，但 CST 尚未测试或确认反应性有效。使用此抗体这些物种的产品不在我们的抗体性能保证范围内。

仓鼠、水貂、斑马鱼、牛

来源/纯化

产生单克隆抗体通过使用与人 p38 MAPK 的 Thr180/Tyr182 周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫。

背景

p38 MAP 激酶 (MAPK)，也称为 RK (1) 或 CSBP (2)，是哺乳动物直系同源物酵母 HOG 激酶参与信号级联控制细胞对细胞因子和压力的反应 (1-4)。已鉴定出 p38 MAPK 的四种亚型，p38α、β、γ（也称为 Erk6 或 SAPK3）和 δ（也称为 SAPK4）。与 SAPK/JNK 通路类似，p38 MAPK 被多种细胞应激激活，包括渗透压休克、炎性细胞因子、脂多糖 (LPS)、紫外线和生长因子 (1-5)。 MKK3、MKK6 和 SEK 通过 Thr180 和 Tyr182 磷酸化激活 p38 MAPK。激活的 p38 MAPK 已显示可磷酸化和激活 MAPKAP 激酶 2 (3) 以及磷酸化转录因子 ATF-2 (5)、Max (6) 和 MEF2 (5-8)。 SB203580 (4-(4-fluorophenyl)-2-(4-methylsulfinylphenyl)-5-(4-pyridyl)-imidazole) 是 p38 MAPK 的选择性抑制剂。该化合物通过 p38 MAPK 抑制 MAPKAPK-2 的激活和随后的 HSP27 磷酸化 (9)。 SB203580 通过结合 ATP 结合口袋抑制 p38 MAPK 催化活性，但不抑制t 上游激酶对 p38 MAPK 的磷酸化 (10)。

Rouse, J. 等人。 (1994) Cell 78, 1027-37.Han, J. 等。 (1994) 科学 265, 808-11.Lee, J.C. 等。 (1994) Nature 372, 739-46.Freshney, N.W.等。 (1994) Cell 78, 1039-49.Raingeaud, J. 等人。 (1995) J Biol Chem 270, 7420-6.Zervos, A.S.等。 (1995) Proc Natl Acad Sci U S A 92, 10531-4.Zhao, M. 等。 (1999) Mol Cell Biol 19, 21-30.Yang, S.H.等。 (1999) Mol Cell Biol 19, 4028-38.Cuenda, A. 等人。 (1995) FEBS Lett 364, 229-33.Kumar, S. 等。 (1999) Biochem Biophys Res Commun 263, 825-31.Pathways

探索与该产品相关的通路。

选择您的通路血管生成B 细胞受体信号转导NF-kB 信号转导磷脂酶信号转导调节P38 MAPKsT 细胞受体转导信号TGF-ß 信号转导Toll 样受体SignalingTranslation：eIF4E 和 p70S6K×上游/下游蛋白质

STRING - 已知和预测的蛋白质-蛋白质相互作用ons.

关闭数据库链接

UniProt ID:Q16539, O15264, P53778, Q15759

Entrez-Gene Id :1432, 5603, 6300, 5600

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