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TheNativeAntigenCompany/Mouse Anti-Porcine Coronavirus Spike Antibody (5B4)/500µg/MAB12431-500_蚂蚁淘,【正品极速】生物医学科研用品轻松购|ebiomall 蚂蚁淘商城
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MOUSE ANTI-PORCINE CORONAVIRUS SPIKE ANTIBODY (5B4)

Mouse porcine coronavirus antibody (5B4) is a monoclonal antibody, specific for the spike (S) protein of the swine enteropathogenic coronavirus, Transmissible Gastroenteritis Virus (TGEV). Antibody has been manufactured for use in ELISA, Western blot and immunofluorescence.

PRODUCT DETAILS – MOUSE ANTI-PORCINE CORONAVIRUS SPIKE ANTIBODY (5B4)

  • Mouse monoclonal antibody against porcine coronavirus, Transmissible Gastroenteritis Virus (TGEV).
  • Isotype – Mouse IgG2a.
  • Presented in PBS with 0.01% Sodium Azide.
  • Suitable for use in WB, ELISA and IFA.

BACKGROUND

Pig diarrhoea is responsible for considerable economic losses to the swine industry (Katsuda et al., 2006). Transmissible gastroenteritis virus or Transmissible gastroenteritis coronavirus (TGEV) is a coronavirus which infects pigs and causes severe diarrhoea. The virus is a member of the genus Alphacoronavirus, subgenus Tegacovirus, species Alphacoronavirus 1. Other coronaviruses that belong to the species Alphacoronavirus 1 are Feline coronavirus, Canine coronavirus and Feline infectious peritonitis virus. Porcine coronaviruses have been known to be circulating in swine for many decades, including Transmissible gastroenteritis (TGE, 1946), Haemagglutinating encephalomyelitis (HEV, 1962), Porcine epidemic diarrhea (PED, 1977), Porcine respiratory coronavirus (PRCV, 1984), Deltacoronavirus (PDCoV, 2009) and most recently Swine acute diarrhea syndrome coronavirus (SADS-CoV, 2018).

TGEV is an enveloped, positive-sense, single-stranded RNA virus and has three major structural proteins; phosphoprotein (N), integral membrane protein (E1), and large glycoprotein (E2). The N protein encapsulates the genomic RNA, and the Spike (S) protein projects from the viral surface. The E2 protein is thought to be involved in pathogenesis by helping the virus enter the host cytoplasm. The E1 protein is mostly embedded in the lipid envelop and hence plays an essential role in virus architecture. It may also interact with the lymphocyte membrane, resulting in the induction of IFN-coding genes. TGEV enters the host cells by first attaching to it using the spike glycoprotein. The S protein interacts with the porcine aminopeptidase N (pAPN), a cellular receptor, to facilitate its entry. Once the virus infects the host, it multiplies in the cell lining of the small intestine resulting in the loss of absorptive cells that in turn leads to shortening of villi. The infected swine then have reduced capability for digesting food and die from dehydration. The mortality rate is close to 100% in piglets less than 2 weeks of age. In adult animals, however, there is a lower mortality, although these recovered animals can spread TGE to uninfected swine for many weeks (Xia et al., 2018). Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) and transmissible gastroenteritis virus (TGEV) are both important emerging and re-emerging viruses in pigs that pose significant economic threat to the swine industry (Zhang & Yoo, 2016).

REFERENCES

  • Katsuda K, Kohmoto M, Kawashima K, Tsunemitsu H. (2006). Frequency of enteropathogen detection in suckling and weaned pigs with diarrhea in Japan. J Vet Diagn Invest. 2006 Jul; 18(4):350-4.
  • Xia L, Yang Y, Wang J, Jing Y, Yang Q. (2018). Impact of TGEV infection on the pig small intestine. Virol J. 2018;15(1):102.
  • Zhang Q. and Yoo D (2016). Immune evasion of porcine enteric coronaviruses and viral modulation of antiviral innate signaling. Virus Res. 2016;226:128–141.

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原理分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。外源基因进入细胞后,部分能够通过细胞质进入细胞核内,根据细胞类型,至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时表达。极少数情况下,进入细胞的外源DNA通过系列非同源性分子间重组核连接,形成巨大的***结构最终整合进细胞染色体。细胞 查看更多>
G-aS-coupled receptors stimulate adenylyl cyclase (AC), which synthesizes cAMP from ATP. In contrast Gai-coupled receptors inhibit AC and so reduce cAMP forma 查看更多>
-Use sterile technique and sterile solutions in steps 1 to 3.- 1. Using a saturated starter culture, inoculate 25 to 30 ml of appropriate media in a 125 ml fla 查看更多>
程序性细胞凋亡配体 1(PD-L1)通路在维持机体免疫系统的动态平衡中,有着重要作用。此外,PD-L1 通路还可以保护肿瘤组织免受机体内细胞毒性 T 细胞的攻击。有研究显示,将程序性细胞凋亡 1(PD-1)阻断或者使 PD-L1 通路沉默后,可致正在快速进展的肿瘤细胞衰退,如非小细胞癌(NSCLC)等。然而,报道 PD-L1 与肺腺癌新分型不同类型之间的密切关系目前还比较少见。而且, 查看更多>
上海典奥生物科技有限公司在发布的IncuCyte Caspase-3/7 细胞凋亡红色试剂供应信息,浏览与IncuCyte Caspase-3/7 细胞凋亡红色试剂相关的产品或在搜索更多与IncuCyte Caspase-3/7 细胞凋亡红色试剂相关的内容。 查看更多>
Signalway Antibody LLC公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多>
鸡胚破骨细胞的分离培养与鉴定.pdf 查看更多>
T细胞亚群的分离分离T细胞亚群,包括各种CD抗原阳性的亚群、αβ型T细胞受体阳性的T细胞或γδ型T细胞、或者其它表面标志不同的T细胞亚群,通常需要有相应的特异性抗体。用直接或间接免疫荧光染色,通过FACS分离细胞;或用抗体包被的免疫磁珠,通过磁场分离细胞;或用抗体亲和层析柱分离细胞。 查看更多>
Protocol Wash cells with PBS and trypsinize to a single cell suspension. Count an aliquot on a hemocytometer. Meanwhile centrifuge the cells (e.g. 1000 RPM, 5 查看更多>
集中于 T 细胞的许多基础和临床免疫研究包括增殖测定,都是为了确定 T 细胞是否能够在不同的体外或体内条件下增殖。流式细胞仪术是测量 T 细 查看更多>
BrdU标记法1.细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。2.终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。3.弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。4.甲醇/醋酸固定10min。 查看更多>
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细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段:
接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→进入连续反应过程 细胞凋亡的启动是细胞在感受到相应的信号刺激后胞内一系列控制开关的开启或关闭,不同的外界因素启动凋亡的方式不同,所引起的信号转导也不相同,客观上说对细胞凋亡过程中信号传递系统的认识还是不全面的,比较清楚的通路主要有:
1)细胞凋亡的膜受体通路:各种外界因素是细胞凋亡的启动剂,它们可以通过不同的信号传递系统传递凋亡信号,引起细胞凋亡,我们以Fas -FasL为例:
Fas是一种跨膜蛋白,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,它与FasL结合可以启动凋亡信号的转导引起细胞凋亡。它的活化包括一系列步骤:首先配体诱导受体三聚体化,然后在细胞膜上形成凋亡诱导复合物,这个复合物中包括带有死亡结构域的Fas相关蛋白FADD。Fas又称CD95,是由325个氨基酸组成的受体分子,Fas一旦和配体FasL结合,可通过Fas分子启动致死性信号转导,最终引起细胞一系列特征性变化,使细胞死亡。Fas作为一种普遍表达的受体分子,可出现于多种细胞表面,但FasL的表达却有其特点,通常只出现于活化的T细胞和NK细胞,因而已被活化的杀伤性免疫细胞,往往能够最有效地以凋亡途径置靶细胞于死地。Fas分子胞内段带有特殊的死亡结构域(DD,death domain)。三聚化的Fas和FasL结合后,使三个Fas分子的死亡结构域相聚成簇,吸引了胞浆中另一种带有相同死亡结构域的蛋白FADD。FADD是死亡信号转录中的一个连接蛋白,它由两部分组成:C端(DD结构域)和N端(DED)部分。DD结构域负责和Fas分子胞内段上的DD结构域结合,该蛋白再以DED连接另一个带有DED的后续成分,由此引起N段DED随即与无活性的半胱氨酸蛋白酶8(caspase8)酶原发生同嗜性交联,聚合多个caspase8的分子,caspase8分子遂由单链酶原转成有活性的双链蛋白,进而引起随后的级联反应,即Caspases,后者作为酶原而被激活,引起下面的级联反应。细胞发生凋亡。因而TNF诱导的细胞凋亡途径与此类似
2)细胞色素C释放和Caspases激活的生物化学途径
线粒体是细胞生命活动控制中心,它不仅是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心,而且是细胞凋亡调控中心。实验表明了细胞色素C从线粒体释放是细胞凋亡的关键步骤。释放到细胞浆的细胞色素C在dATP存在的条件下能与凋亡相关因子1(Apaf-1)结合,使其形成多聚体,并促使caspase-9与其结合形成凋亡小体,caspase-9被激活,被激活的caspase-9能激活其它的caspase如caspase-3等,从而诱导细胞凋亡。此外,线粒体还释放凋亡诱导因子,如AIF,参与激活caspase。可见,细胞凋亡小体的相关组份存在于正常细胞的不同部位。促凋亡因子能诱导细胞色素C释放和凋亡小体的形成。很显然,细胞色素C从线粒体释放的调节是细胞凋亡分子机理研究的关键问题。多数凋亡刺激因子通过线粒体激活细胞凋亡途经。有人认为受体介导的凋亡途经也有细胞色素C从线粒体的释放。如对Fas应答的细胞中,一类细胞(type1)中含有足够的胱解酶8 (caspase8)可被死亡受体活化从而导致细胞凋亡。在这类细胞中高表达Bcl-2并不能抑制Fas诱导的细胞凋亡。在另一类细胞(type2)如肝细胞中,Fas受体介导的胱解酶8活化不能达到很高的水平。因此这类细胞中的凋亡信号需要借助凋亡的线粒体途经来放大,而Bid -- 一种仅含有BH3结构域的Bcl-2家族蛋白是将凋亡信号从胱解酶8向线粒体传递的信使。 尽管凋亡过程的详细机制尚不完全清楚,但是已经确定Caspase即半胱天冬蛋白酶在凋亡过程中是起着必不可少的作用,细胞凋亡的过程实际上是Caspase不可逆有限水解底物的级联放大反应过程,到目前为止,至少已有14种Caspase被发现,Caspase分子间的同源性很高,结构相似,都是半胱氨酸家族蛋白酶,根据功能可把Caspase基本分为二类:一类参与细胞的加工,如Pro-IL-1β和Pro-IL-1δ,形成有活性的IL-1β和IL-1δ;第二类参与细胞凋亡,包括caspase2,3,6,7,8,9.10。Caspase家族一般具有以下特征:
1)C端同源区存在半胱氨酸激活位点,此激活位点结构域为QACR/QG。
2)通常以酶原的形式存在,相对分子质量29000-49000(29-49KD),在受到激活后其内部保守的天冬氨酸残基经水解形成大(P20)小(P10)两个亚单位,并进而形成两两组成的有活性的四聚体,其中,每个P20/P10异二聚体可来源于同一前体分子也可来源于两个不同的前体分子。
3)末端具有一个小的或大的原结构域。
参与诱导凋亡的Caspase分成两大类:启动酶(inititaor)和效应酶(effector)它们分别在死亡信号转导的上游和下游发挥作用。向左转|向右转
细胞转染的详细过程123
dppezmiu2017-10-02
您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
激素作为信号分子,调节细胞代谢方式主要有:
1.有些激素的受体在细胞膜上,这些激素作用于细胞膜后可以改变细胞膜的通透性。
2.有些激素的受体位于细胞核或者细胞质,通过影响基因的表达来影响靶细胞内酶的活性或酶的数量来调节细胞代谢。

在下做MTT细胞增殖实验,每组设5个复孔;

发表的文献都注明每个实验至少重复3次;

那么我这5个复孔算不算重复3次以上呢?还是说我要再做2次相同的实验?

望各位战友解答~

最近在做黄体化颗粒细胞分离培养,但是注射器吸取大卵泡液或者从下颗粒细胞离心时就会凝固成果冻状,大家有碰到过这样的事情么?已经好几次了,一直是这样,大家给支个招吧

影响转染试验的因素:

1转染试剂跟细胞系不匹配

转染试剂跟细胞系也是讲究配合默契的,使用同一种试剂,不同细胞系转染效率通常不同。但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。


2细胞状态变化

因为有些细胞系是不稳定的,可能随着培养时间的改变,培养条件的不同,不同的选择压力,可能引起不同的克隆选择。因此就算是同一个细胞系,在不同条件下转染能力的差异可能会

很大

(1)转染试剂与细胞不匹配

细胞转染最适合的不是原代细胞,也不是传代很多次的细胞。这是因为细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变,总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到对数生长期的细胞,细胞生长旺盛,最容易转染。

(2)把握时机

没错!转染也有适当的时机,相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源DNA。因此对大多数转染操作而言,细胞都在转染当天或前一天种板。

同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于过度生长的状态,如癌细胞数量过多,互相叠加,营养物质耗竭,代谢废物积聚,转染率低下也是很正常的!

因此,一定要在最适细胞密度时转染,才能获得较高的转染率。不同的转染试剂,要求转染时的最适细胞密度各不相同,即使同一种试剂,也会因不同的细胞类型或应用而异。

(3)微生物来捣乱

培养物可被细菌、酵母、真菌、病毒、支原体、甚至其他细胞种类所污染。各种污染都会导致产生错误的结果。

(4)交叉污染

如果同一个实验室同时培养不同种类的细胞,很同意发生“细胞串门”的现象,造成交叉污染。


3转染方法

不同转染试剂有不同的转染方法,但大多大同小异。转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法,但也要注意,因不同实验室培养的细胞性质不同,质粒定量差异,操作手法上的差异等,其转染效果可能不同,应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。

(1)血清

转染后未及时加入血清,会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候,最好不要换液,不要打扰细胞,让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话,会引起未转染的细胞疯狂生长。那么,什么是最佳时机呢?在20%的细胞变圆的时候,就是加血清的最佳时机。

不过要特别注意:血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物,对不同细胞的生长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响细胞生长,因此也会影响转染效率。新加培养基的预热对细胞转染很有帮助。

(2)DNA质量

DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术(如脂质体等)基于电荷吸引原理,如果DNA不纯,如带少量的盐离子,蛋白,代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的进行。


4载体构建

转染载体的构建(病毒载体,质粒DNA,RNA,PCR产物,寡核苷酸等)也影响转染结果。因此选择组成或可调控,强度合适的启动子也很重要,同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。

所以转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质,也会影响转染效率。这个时候,就应该对质粒进行纯化和浓缩。

以上就是细胞转染率低的主要原因了,在实验过程中有没有遇到什么棘手的问题呢,欢迎留言讨论


目前标记干细胞的MRI 对比剂主要有两类: 一类是以Gd3+对比剂即所谓顺磁性对比剂,主要产生T1 正性对比效应,目前有关的应用报道不多,主要是因为在目前MRI 场强下Gd3+的量需要达到相当程度,这在技术上尚有难度。
  当然也有几项研究成功地应用Gd3+复合物通过胞饮作用或细胞内吞作用进入细胞内而后行MRI 的报道。Modo 等应用右旋糖酐聚合物连接的Gd-DTPA 与若丹明颗粒(gadolinium rhodamine dextran,GRID )可同时提供MRI 和荧光组织显像,将之标记永生化小鼠神经干细胞MHP36 细胞后移植至脑缺血大鼠的海马后进行4.7 T MR 离体成像, 证实MRI 能可靠分辨移植细胞以及示踪细胞迁移。
  另一类是通过葡聚糖生物高分子包裹Fe3O4 晶体形成核壳式结构的超顺磁性氧化铁(superpara-magnetic iron oxide,SPIO) 纳米材料对比剂, 主要产生较强的T2 负性对比效应。其特点是粒径小、穿透力强且弛豫率约为同样 564 国际医学放射学杂志International Journal of Medical Radiology 2009 Nov; 32(6) 条件下Gd3+的7~10 倍,在很低浓度(nmol)时即可在 MRI 上形成对比且具有生物可降解性,能被细胞代谢后进入正常血浆铁池与红细胞血红蛋白结合或用于其他代谢过程。
  以上特点使氧化铁类对比剂更受关注,是目前较理想的磁共振示踪剂。近年来,间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)磁标记后MRI 示踪已成功应用于中枢神经系统和心脏等器官。Jendelova 等[21]将SPIO 和BrdU 双重标记的MSCs 经对侧脑半球局部移植入大鼠脑皮质损伤模型, 术后28 d 常规1.5 T MRI 显示MSCs 从注射点向对侧脑损伤区域迁移,脑损伤区域内见特异性低信号分布持续至术后50 d。
  切片BrdU 免疫组化分析显示移植的MSCs 分化为神经元细胞,术后大鼠的神经功能改善,因此认为损伤组织可产生丰富的化学因子促使移植的MSCs 进行靶向迁移性修复。Kraitchman 等[22]利用Feridex 标记MSCs 经导管注入犬心肌梗死模型周边区域, 术后持续8 周,1.5 T MRI 明确观察到移植部位发出一条低信号线指向心肌梗死区域,心肌梗死面积逐渐减小。活体MRI 示踪磁标记MSCs 在骨关节领域也显示出重要的应用前景。
  Mayer-Kuckuk 等应用与荧光基团结合的氧化铁粒子标记7F2 细胞和MC3T3-E1#4 细胞, 从股骨干骨骺端注射30 μL 含1×105 个磁标记细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)至小鼠股骨髓腔,7 T MR 活体成像显示骨髓腔内见特异性低信号持续至术后第9 天,此后髓腔内信号增高,提示移植MSCs 在股骨髓腔内部分丢失。
  居等应用磁性氧化铁纳米粒子和多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine, PLL) 的偶联物 Fe2O3-PLL , 有效地标记了人脐血间充质干细胞,成功地进行了磁共振标记细胞成像, 且对细胞的活力、凋亡等生物学特性无明显影响。
  国内一些研究者进行的实验室结合前期间充质干细胞的磁标记工作,正在进行肝干细胞、神经干细胞的磁探针标记, 评价其对细胞活力增殖与凋亡代谢分化的影响,评价MRI 不同序列上不同浓度标记细胞的信号特点,并将标记后的肝干细胞进行正常及肝衰大鼠体内移植,神经干细胞标记后进行正常及大脑半球缺血大鼠体内移植,用MRI 动态示踪移植细胞分析移植细胞的生存状态,总结MRI 示踪干细胞的理论依据、技术方法及影像学表现特征,达到活体下追踪干细胞存活迁移的目的[24-27]。虽然MRI 示踪干细胞已经显示出了良好的应用前景,但磁标记会随着细胞分裂而稀释,在监测移植后干细胞的分化方面尚存在不足[28],有待进一步改进。
  综上所述,有关干细胞标记和活体示踪方面的研究虽然取得了重要进展,但尚有许多问题需要解决,目前应用的各种标记示踪方法都有自己的优缺点, 但是随着科技的发展以及相关实验的不断深入,各种标记示踪方法目前存在的问题必定能够得到解决,其中尤其以MRI 活体示踪磁标记干细胞技术值得期待。利用无创伤性影像学技术活体示踪干细胞的研究将会取得重大突破。
代谢随时都在进行啊。
急,肺泡上皮细胞的标记抗体有什么?

最近在Raw264.7细胞上进行干扰和用质粒进行过表达实验,脂质体根本转不进去,后来又换了一个国产的转染试剂转染效率也很低,现在考虑用电转。
我们实验室有Lonza电转仪,有没有好一点的电转染试剂或者细胞转染试剂?

通常指神经胶质细胞.
神经胶质细胞(neuroglia cell)简称神经胶质(neuroglia ),广泛分布于中枢和周围神经系统.普通染色只能显示胞核,用特殊银染方法才能显示神经胶质细胞整体形态.神经胶质细胞一般较神经细胞小,突起多而不规则,数量约为神经细胞的十倍.多分布在神经元胞体、突起以及中枢神经毛细血管的周围.神经胶质细胞具有支持.一营养、保护、髓鞘形成及绝缘,并有分裂增殖与再生修复等多种作用.
(-)中枢神经系统的神经胶质细胞
1.星形胶质细胞(astrocyte)是胶质细胞中最大的一种,胞体呈星形,核大呈圆形或椭圆形,染色较浅.胞质内有交织走行的神经胶质丝(neuroglial filament).由胞体伸出许多呈放射状走行的突起,部分突起末端膨大形成脚板(end foot),附着在毛细血管基膜上,或伸到脑和脊髓的表面形成胶质界膜(gliolimitan).星形胶质细胞约占全部胶质细胞的20%.星形
胶质细胞依其分布及结构又可分为两种.
(1)原浆性星形胶质细胞(protoplasmie astrocyte):分布于中枢神经系统的灰质内,位于神经细胞体及其突起的周围.原浆性星形胶质细胞的突起不规则,分支多而短曲,表面不光滑.胞质内的神经胶质丝少.
(2)纤维性星形胶质细胞(fibrous astrocyte):分布于白质内,位于神经纤维之间.其突起呈放射状,细长而直,分支少,表面光滑.胞质内有许多交织排列的原纤维,其超微结构是一种中间丝,称神经胶质丝,其内含有胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein GFAP),用免疫细胞化学染色技术能特异性地显示出这类细胞.
星形胶质细胞含有高浓度的K+,并能摄取某些神经递质(如γ-氨基丁酸).它通过调节细胞间隙的K+和神经递质浓度,来影响神经元的功能活动.因此,星形胶质细胞对维持神经细胞微环境的稳定和调节代谢过程起重要作用.当中枢神经系统损伤时,星形胶质细胞迅速分裂增殖,以形成胶质瘢痕形式进行修复.
CCK8细胞增殖检测123
小满刚至2021-07-29

在课题组例会上做汇报时,有老师对我用CCK-8做细胞增殖实验提出质疑,他说CCK-8是测细胞活力的

想听听大家的意见,不胜感激

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