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Gentarget/NCI-H1299 / Luciferase (Puromycin) stable cells/SC053-L/1 Ea
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Gentarget/NCI-H1299 / Luciferase (Puromycin) stable cells/SC053-L/1 Ea
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Gentarget
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Transformedfromhumannon-smallcelllungcarcinomacellline, NCI-H1299 adhesivecell,usinglentivirusexpressing fireflyluciferase3gene.The Luciferase wasexpressedundertheenhancedEF1a promoter. ThePuromycinMarkerwasexpressedunderRsvpromoter.Thecelllinedemonstrateshigh levelofbioluminescence signalviafireflyluciferaseassay.Thefollowingexpresscassettewasintegratedintocellline’sgenome. 

EF-luc-Puro

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Cat#SC053-L

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稳定表达细胞株(稳转细胞株)指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。 在基因功能的 查看更多>
普通细胞,特殊细胞、特殊培养方式另计 查看更多>
各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株,都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称,即文献中常称之为已鉴定的细胞(Certified Cells)。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各 查看更多>
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。... 查看更多>
hl-60细胞是一种用于实验室研究某些血细胞如何形成的细胞株。在培养基中补充牛胎儿血清.HEPES,抗生素类化学物质,L-谷氨酰胺,通过悬浮培养,hl-60细胞能持续增殖。... 查看更多>
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刚刚到货的逆转录病毒载体,发现其中无GFP,请问大家用这种无荧光的载体包装病毒并转到细胞后,如何进行下一步的筛杀稳定转染细胞株的实验,只能通过其抗生素的抗性进行筛选,盲目挑选单克隆么?谢谢大家!
详解构建稳定细胞株实验流程123
苦也不太差°琼2021-07-30
稳定细胞系构建后可以开展哪些实验
建立稳定细胞株,一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物对靶...专注整体实验·服务生命科学已开展了数千个实验外包项目
稳定细胞株筛选是一个长期的过程,稳定细胞株筛选优化,有许多条件需要摸索,而且是从源头开始①在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证②高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白表达量③细胞的选择,筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO,中国仓鼠细胞,由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株,而HEK293细胞则常用于瞬时转染④后期的筛选,双抗预防污染,筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验,而且转染的时候不能有抗生素,关于细胞转染稳定细胞系构建的相关理论

最近因工作需要,欲购进一些生产用的细胞株和瞬转、稳转质粒,大家有什么推荐的品系和公司或网站,谢谢!!!

主要需求:

1.生产或生物制药用的,稳定细胞株如CHO-K1、GS和HEK293/HEK293T,以及与之对应的瞬转、稳转(重组整合)质粒(需详细图谱)。

2.原始或改造细胞株,以及对应质粒,改造细胞株请详述细节,原因,优缺点,安全性等。

3.希望大家积极推荐,实验用、生产用均可,原核、真核都行,网站或品系名称也行,只要大家觉得常用、稳定、安全、高产就行。

4.请有意向的同仁回帖或将详细资料发至我163邮箱:wangqiang23mars@163.com,万分感谢。

G418是常用的一种,还有很多药物可以用来筛选稳定株,比如puro等,就看你的细胞或质粒带什么抗性了。

求助各位大神

RT,找公司做的稳转Hela和HepG2细胞株拿回来以后培养总是出问题。细胞寄到后显微镜下观察,状态良好。长满传代后,一瓶出现大量漂浮不贴壁的情况,一瓶贴壁后生长出现成团,生长缓慢的情况(传代后有显微观察,分散良好没有成团),一瓶传至第三代后,14h后显微观察,大量漂浮贴壁情况差。

培养基为DMEM,10%FBS,5%CO2,是随细胞寄过来的培养基。

求各位大神帮忙分析下原因,是我毕业课题,突然出现这样的问题,不想研三再换课题了。

万分感谢!

不能,它有Neomycin基因,可以用新霉素进行稳定株筛选,获得稳定株。
基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒。
假阳性高稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,费时,但是成功率很低,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒
瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到细胞的染色体上,结果是短暂的高水平表达,可在外源基因导入细胞24~96h内检测表达效果,表达水平与位置无关,不会受到周围染色体元件的影响。超螺旋质粒转染更倾向于瞬时表达。
对于瞬时转染的检测:如果有报告基因,就通过报告基因的表达看转染成功与否;没有报告基因的话,就在24~96h内收获细胞通过RT-PCR和WB来鉴定。
6kb并不大,作为质粒转染是没有问题的。
至于到底好不好转就跟你的细胞有关了,和细胞是否是稳转株关系不大。