
Tumornecrosisfactor-alpha(TNF-alpha)isapleiotropicinflammatorycytokineproducedpredominantlybyinflammatorymonocytesandmacrophages,butothercelltypes,includingneutrophils,endothelialcells,lymphocytes,andactivatedtissuecells,canalsobeasourceduringoverwhelminginflammatoryresponses.TNF-alphahasbothbeneficialanddestructivepropertiesforthecentralnervoussystemandaffectslipidmetabolism,coagulation,andendothelialfunction.TheincreasingreleaseofTNF-alphamaycontributetotheoddsofischemicstrokeinpatients.TNF-alphaisaprimarymediatorofnumerousimmunologicfunctions,whichincludestimulatingphagocytosisinmacrophages,chemoattractionofneutrophils,increasedinsulinresistance,andinducingfever.Asacentralplayerinthecytokinenetwork,TNF-alphahasbeenimplicatedinavarietyofdiseasestates,includingcachexia,septicshock,acuterespiratorydistresssyndrome,andanumberofnecrotic,proliferativeandautoimmunediseases.TNF-alphaactivatessignalsthroughtworeceptors,TNFR1,whichisexpressedonmostcelltypes,andTNFR2,whichisexpressedmainlyonimmunecells.TNF-alphaexistsinbothsecretedandmembraneboundforms,bothbioactive(1-5).RecombinantHumanTNF-alphaisanon-glycosylatedprotein,containing158aminoacids,withamolecularweightof17.5kDa.
•AccessionNumber:P01375•Synonyms:TNFSF2,Cachectin,DIF,Necrosin,Cytotoxin,Cachexin,TNF,TNF-α•Purity:≥96%purity.Determinedbyreducingandnon-reducingSDS-PAGEanalysis.•Bioactivity:ED50isdeterminedbythecytolysisofmouseL929cellsinthepresenceofActinomycinD.TheED50istypicallylessthan0.8ng/mL.•Animalcomponent-freeandcarrier-free•Custompackagingavailable
Forresearchorfurthermanufacturinguseonly.
Alsoavailableinothersizes.
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1、常用玻璃仪器的准备制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净,晾干后备用。
(1)平皿用纸或布包好,或装在金属盒内,于121℃高压蒸汽菌3min后烘干,备用。
(2)试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好,再用布或报纸包扎好,121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干,备用。
(3)吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽内的气体污染),然后用纸包后或装入金属吸管筒内,于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干,备用。其他玻璃器皿均应按上法处理,也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后,备用。
2、培养基的制备及储存
(1)溶化:一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内。加入蒸馏水,隔水加热以促其溶解,加热时应经常搅拌,防止焦结,待其溶解后补足水分。
在使用干燥培养基时,先将蒸馏水按定量加入容器中,然后称取一定量培养基干粉放入水中,静置10—15min,搅拌,振荡,或延长时间以促进溶解,一般不要热,必要时加热,但时间不宜过长,温度不宜过高,避免某些营养成分被破坏。
(2)校正酸碱度(调节pH):培养基必须有适当的pH。因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一,测定pH的标准温度为25士2℃。调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液。当调节缓冲液的pH时,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液。灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低,一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右,灭菌后基本合适。因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定,并记下每次pH的测定结果,有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性,从而指导灭菌前pH的调节。干燥培养基一般已校正过pH,用时也必须再验证。测定时,一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化,或用pH计校正,如与所需pH不符,可用以上的酸或碱液加以校正。调整pH后要加热过滤,使培养基澄清。( 更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考中国标准物质 www.rmhot.com)
(3)培养基的分装:大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后,均要对分配器的管道系统进行冲洗,在分装无菌培养基前,则要采用无菌硅胶管。
固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中,高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。
平皿:倾注平皿,应在无菌室中放置3—4h,如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min。让水蒸汽自然蒸发。
斜面:制备低层斜面分装于试管,约占容积1/5,灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上,使成斜度,分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基,如沾有培养基应用布抹去,以避免污染。
高层斜面:制备高层斜面分装于试管,约占试管容积的1/3,灭菌后趁热放置成高层短斜面,待其凝固后应用。
分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天(2h内最佳)进行灭菌处理。液体、半固体培养基一般在高压灭前分装,约装试管容积的1/3,在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基,灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中。
培养基的灭菌:培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌,各种培养基的灭菌时间和压力,按其成分不同而定。普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min,但容器和装量较大时,应延长至20min。含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min。含糖、血清、 鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,连续3d,间歇灭菌。血清或组织液,采用低热56—58水浴1h,连续5—6d灭菌,一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等,可用细菌过滤器,过滤除菌。高压灭菌应严格按照操作规程执行,必须逐渐加热,彻底排除灭菌器内的空气,再逐渐升压保持预定的压力和时间,达到全部杀灭微生物。以上的灭菌时间和温度要经过验证确认,如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好。
通过无菌技术为测试制备的每一批培养基其PH在放冷至室温(25°)后,都应测定。一个扁平的pH计用于培养基表面pH值的测定,浸入式的pH计用于液体的测定。各供应商提供的培养基的pH应该在规定的±0.2的范围内,除非通过验证得到更宽的范围
注意:按配方计算培养基中各种成分的用量→称量,(一般动作要迅速一些,因为其中可能有些成分容易吸潮)→溶化(将称好的各种成分溶解在水中,如果是固体培养基,需要使用凝固剂,如琼脂等,熔化时,注意搅拌,防止糊底)→调pH→灭菌(高压蒸汽灭菌)→倒平板
1)确认培养基的成分,并精确称量;
2)加入各个成分的顺序;
3)准确调pH;
4) 适当的灭菌方法;
5)无菌条件下分装.
琼脂,学名琼胶,英文名(agar),又名洋菜(agar-agar)、海东菜、冻粉、琼胶、石花胶、燕菜精、洋粉、寒天、大菜丝,是植物胶的一种,常用海产的麒麟菜、石花菜、江蓠等制成,为无色、无固定形状的固体,溶于热水。在食品工业中应用广泛,亦常用作细菌培养基。为什么叫琼脂,主要是用海南的麒麟菜或石花菜制作出来的。海南的简称就是琼。琼脂特性:琼脂的最有用特性是它的凝点和熔点之间的温度相差很大。它在水中需加热至95℃时才开始熔化,熔化后的溶液温度需降到40℃时才开始凝固,所以它是配制固体培养基的最好凝固剂。用琼脂配制的固体培养基,可用以进行高温培养而不熔化,在凝固之前接种时,也不致将培养物烫死。因此,琼脂是制备各种生物培养基中应用最广泛的一种凝固剂。琼脂的浓度,通常是液体培养基的1~1.5%。向左转|向右转
HT培养基添加剂(HT Supplement)为粉剂,经照射灭菌。每个包装可配制成10ml浓缩液(50X),用于杂交瘤细胞的筛选。
用于酵母繁殖和筛选的培养基
SD是含有盐类、微量元素、维生素、氮源(不含氨基酸的酵母氮碱)和葡萄糖的合成基本培养基。
注意:氮源(不含氨基酸的酵母氮碱)是这种培养基用于筛选的关键,LB,YPD这种复合培养基因为用到了酵母提取物,蛋白胨,基本是氮源全营养的,肯定是不能用来做氮源筛选的

