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ImmunoChem/SGK Kinase Assay Kits, Type II/96 Assays/Kit/ICP0242
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SGK Kinase Assay Kits, Type II
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DESCRIPTION
Serum and glucocorticoid induced protein kinase(SGK) is a family of serine/threonine kinase. The SGK kinase assay kit (Type II) is a non-radioactive, homogenous, simple, immunoblot type assay. It is designed for the assay of SGK kinase on solid affinity matrices such as IP kinases or GST-SGKs on GSH beads. It is also useful for the activity analysis of SGK in the solution phase. The principle of the assay is simple. Purified SGK on the solid matrix will phosphorylate the kinase substrate-BSA conjugates (component C) in the solution, in the presence of ATP. The phosphorylated BSA-substrate is then analyzed using SDS-PAGE resolution and immunoblotting technique.
QUALITY CONTROL
The kits were tested using SGK 1, 2 and 3.Sensitivity is approximately 20 ng of active GST-SGK1/assay.
Assay for activity of GST-SGK1 using the type II kit (ICP0242)
A,250 ng; B, 125 ng; C,60 ng; D,30 ng; E, 15 ng; F, 0.00 ng
STORAGE STABILITY
Stable for 6 months at 4oC from date of shipment.
KIT COMPONENTS
A.Rabbit anti-phosphoSubstrate (anti-pSubstrate): 250 µg/mL in 200 µL of Tris acetate buffer, affinitypurified rabbit polyclonal, anti-phosphopeptide substrate (RPRAApTF-NH2) antibodies (catalog# ICP0190). The anti-pSubstrate antibodies recognize specifically the phosphorylated form of the substrate (RPRAApTF-NH2) but not the non-phosphorylated form (RPRAATF-NH2). Dilute the antibody to 0.25-0.5 µg/mL with antibody dilution buffer (B) for working solution (enough to prepare 100 mL of working antibody solution).
B.10 x Antibody Dilution Buffer (AbDB): Catalog# ICP0242b, 2x10 mL. Dilute 10 mL of AbDB to 100 mL with distilled water asworking buffer solution
C.BSA-Substrate Conjugates (BSA-Sub): Catalog# ICP0242c, 250 µg/mL in 500 µL kinase assay dilutionbuffer (D). Approximately 10 molecules of kinase substrate peptide (RPRAATF-NH2) were conjugated to one molecule of BSA. Apparent molecular weight of the major conjugate is 70-80 kDa. The apparent MW for the aggregated form is approximately 150 kDa (enough for more than 100 assays).
D.Kinase Assay Dilution Buffer (ADB): Catalog# ICP0242d, 10 mL. 20 mM MOPS, pH7; 25 mM beta-Glycerolphosphate; 1 mM EGTA; 1 mM sodium orthovanadate; 1 mM DTT; and 2 mM MgCL.
E.Adenosine Triphosphate (ATP): Catalog# ICP0242e, 2x2 mg, Dissolve in 2 mL kinase assay dilution buffer (D) as working solution. Aliquot as 100 µL/vial and store at -20oC if not used all at once.
Additional Reagents required but not Supplied:
1. Anti-rabbit Ig"s secondary antibodies.
2. PBSt washing buffer
3. 3% BSA or 3% skimmed milk as blocking buffer
4. All reagents and materials for SDS-PAGE, transfer materials, and signal generating system (such as BCIP/NBT or ECL)
PROTOCOL
Stage One: Preparation of kinase
1. Preparation of Kinase in Solution: Prepare the purifiedor partially purified (fractionated) kinase SGK in 10 µL of the kinase assay dilution buffer (component D) with the required concentration in microcentrifuge tubes. For inhibitor screening, serial dilutions (range from 1000 to 50ng/assay) of kinase should be tested for the optimal working concentration.
2. Preparation of the Immunoprecipitated Kinase:
Incubate anti-SGK (able to IP native kinase), or anti-GST, anti-HA (for tag-kinase) with 10 to 20 µL of protein A for 1 hr. Then wash away any unbound antibodies. Incubate the cell lysate in 250 µL of lysate buffer with the antibody-protein A complex in a rotor shaker at 4oC for 2 hrs. The user should select their own cell lysate buffer that contains protease and phosphatase inhibitors. The cell lysate sample should contain >20 ng of active SGK. Centrifuge and aspirate with PBSt twice then with kinase assay dilution buffer (D) twice. After aspiration, re-constitute the immunoprecipitated matrix in 10 µL of kinase assay dilution buffer (D).
3. Preparation of Kinase Purified with Affinity Matrix (GSH, Ni, maltose, etc.): The user should purify therecombinant kinases, such as GST-SGK, following their own protocol. 10-20 µL of affinity matrix/assay is recommended. Do a final wash and aspiration of the matrix with kinase assay dilution buffer (D) then re-constitute the aspired matrix with 10 µL of the kinase assay dilution buffer.
Stage Two: SGK kinase activity assay
1. Add 2.5-5 µL of the BSA-kinase substrate (component C) to the kinase sample prepared in stage one.
2. Add 5 µL of the ATP (component E) solution to initiate the kinase reaction. Incubate at 37oC for 60 min with constant shaking or hand shake every 5 min.
3. Stop the kinase reaction with 20 µL of SDS-sample loading buffer and boil for 2 min.
Stage Three: Running SDS-PAGE and transfer;
1. Prepare a 8% SDS-acryamide gel.
2. Run the SDS-PAGE until the dye-front is approximately 2-3 cm past entering the separation gel.
3. Perform the normal gel transfer to nitrocellulose membrane. The membrane only needs to cover between the top of separating gel and the distance to MW marker 60 kDa.
Stage Four: Immunoblotting.
1. Block the membrane with 3% BSA or 3% skimmed milk for 30-60 min
2. Wash the membrane twice with PBSt.
3. Incubate with 10 mL of anti-pSubstrate (component A), 0.25-0.5 µg/mL in antibody dilution buffer (component B) at room temperature for 2-4 hours, or 4oC overnight.
4. Wash the membrane with PBSt 4 times at 5 min intervals.
5. Incubate with anti-rabbit IgG secondary antibodies for 1-2 hours.
6. The user should select their own method (either colormetric or ECL system) for the signal generation.
Summary of the Assay:
1)Kinase reaction: BSA-RPRAATF-NH2 + ATP + Kinase --> BSA RPRAApTF-NH2
2)SDS-PAGE resolution and transfer
3) Specific immunoblotting for detection of the kinase product BSA-RPRAApTF-NH2 probed with anti- PRAApTF-NH2 (anti-pSubstrate)
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-09-22
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2019-03-10
北京泰泽瑞达科技有限公司在发布的ITS细胞培养添加物（100×）供应信息，浏览与ITS细胞培养添加物（100×）相关的产品或在搜索更多与ITS细胞培养添加物（100×）相关的内容。 查看更多
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2021-07-24
北京裕恒丰科技有限公司在发布的前列腺上皮细胞生长添加物供应信息，浏览与前列腺上皮细胞生长添加物相关的产品或在搜索更多与前列腺上皮细胞生长添加物相关的内容。 查看更多
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2021-09-05
从活组织培养层中分离独立的细胞团.pdf 查看更多
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2019-01-17
江苏普诺生生物科技有限公司在发布的Helios UltraGRO 间充质干细胞营养添加物（科研级别）50ml供应信息，浏览与Helios UltraGRO 间充质干细胞营养添加物（科研级别）50ml相关的产品或在搜索更多与Helios UltraGRO 间充质干细胞营养添加物（科研级别）50ml相关的内容。 查看更多
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NEAA细胞培养添加物（100×）是由赛业（广州）生物科技有限公司代理或销售的OriCell品牌的试剂，产品来源于Cyagen Biosciences。赛业（广州）生物科技有限公司是中国最权威的NEAA细胞培养添加物（100×）试剂销售服务商之一，在广州等地方销售NEAA细胞培养添加物（100×）试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业NEAA细胞培养添加物（100×）仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的NEAA细胞培养添加物（100×）产品 查看更多
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2019-10-21
碧迪医疗器械（上海）有限公司(BD)在发布的细胞培养基添加物试用套装供应信息，浏览与细胞培养基添加物试用套装相关的产品或在搜索更多与细胞培养基添加物试用套装相关的内容。 查看更多
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2021-07-29
北京裕恒丰科技有限公司在发布的星形细胞生长添加物供应信息，浏览与星形细胞生长添加物相关的产品或在搜索更多与星形细胞生长添加物相关的内容。 查看更多
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2021-07-22
北京裕恒丰科技有限公司在发布的成纤维细胞生长添加物供应信息，浏览与成纤维细胞生长添加物相关的产品或在搜索更多与成纤维细胞生长添加物相关的内容。 查看更多
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2020-01-16
肝细胞生长添加物是由北京裕恒丰科技有限公司代理或销售的ScienCell品牌的试剂，产品来源于美国ScienCell。北京裕恒丰科技有限公司是中国最权威的肝细胞生长添加物试剂销售服务商之一，在北京丰台区等地方销售肝细胞生长添加物试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业肝细胞生长添加物仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的肝细胞生长添加物产品 查看更多
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2021-08-22
For amplification of cognate sequences from different organisms, or for "evolutionary PCR", one may increase the chances of getting product by designing 查看更多
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2021-08-24
AimMany cultures obtained from a culture collection, such as ECACC, will arrive frozen and in order to use them the cells must be thawed and put into culture. 查看更多
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商品咨询
认清食品中违法添加的这些物质资源下载金锄头文库123
2017-09-29
关键是第二问，希望能满意
【求助】DMSO ,丁酸钠这类添加物在生产上是否允许使用? 经验...123
jjxlt2021-07-21
想问下：DMSO，丁酸钠这类添加物在生产上是否允许使用？是否存在法规监管方面的问题？国外商业化生厂时有没有使用的例子
尼龙6切片生产中添加剂有哪些品种、哪里可以采购?...123
2017-09-29
是一样的东西，只是叫法不一样
聚酰胺俗称尼龙(Nylon)，英文名称Polyamid eP，它是大分子主链重复单元中含有酰胺基团的高聚物的总称。聚酰胺可由内酸胺开环聚合制得，也可由二元胺与二元酸缩聚等得到的。是美国DuPont公司最先开发用于纤维的树脂，于1939年实现工业化。20世纪50年代开始开发和生产注塑制品，以取代金属满足下游工业制品轻量化、降低成本的要求。PA具有良好的综合性能，包括力学性能、耐热性、耐磨损性、耐化学药品性和自润滑性，且摩擦系数低，有一定的阻燃性，易于加工，适于用玻璃纤维和其它填料填充增强改性，提高性能和扩大应用范围。PA的品种繁多，有PA6、PA66、PAll、PAl2、PA46、PA610、PA612、PAl010等，以及近几年开发的半芳香族尼龙PA6T和特种尼龙等新品种。
特性：
尼龙作为大用量的工程塑料，广泛用于机械、汽车、电器、纺织器材、化工设备、航空、冶金等领域。
成为各行业中不可缺少的结构材料，其主要特点如下：
1．优良的力学性能。尼龙的机械强度高，韧性好。
2．自润性、耐摩擦性好。尼龙具有很好的自润性，摩擦系数小，从而，作为传动部件其使用寿命长。
3.优良的耐热性。如尼龙46等高结晶性尼龙的热变形温度很高，可在150℃下长期期使用。PA66经过
玻璃纤维增强以后，其热变形温度达到250℃以上。
4.优异的电绝缘性能。尼龙的体积电阻很高，耐击穿电压高，是优良的电气、电器绝缘材料。
5.优良的耐气候性。
6.吸水性。尼龙吸水性大，饱和水可达到3%以上。在一定程度影响制件的尺寸稳定性。
分类
主要品种有尼龙6、尼龙、尼龙11.尼龙12、尼龙610、尼龙612、尼龙4fi、尼龙1010等。其中尼龙6、尼龙66产量最大，约占尼龙产量的90%以上。尼龙11、尼龙12具有突出的低温韧性;尼龙46具有优异的耐热性而得到迅速发展，尼龙1010是以蓖麻油为原料生产的我国特有的品种。
由于各种尼龙的化学结构不同，其性能也有差异，但它们具有共同的特性:尼龙的分子之间可以形成氢键，使结构易，发生结晶化 而且，分子之间互相作用力较大，赋予尼龙以高熔点和力学性;由于酰胺基是亲水基团，吸水性较大。在尼龙的化学结构中还存在亚甲基和芳基，使尼龙具有一定柔顺或刚性。尼龙中的亚甲 酸氨基的比例越大，分子中氢键数越少，分子间力越小，柔性增加，吸水性越小。因此，尼龙工程塑料一般都具有良好力学性能、电性能,耐热性和韧性，还具有优良的耐油性、耐磨性、自润滑性、耐化学品性和成型加工性。
聚酰胺俗称尼龙(Nylon)，英文名称Polyamid eP，它是大分子主链重复单元中含有酰胺基团的高聚物的总称。聚酰胺可由内酸胺开环聚合制得，也可由二元胺与二元酸缩聚等得到的。是美国DuPont公司最先开发用于纤维的树脂，于1939年实现工业化。20世纪50年代开始开发和生产注塑制品，以取代金属满足下游工业制品轻量化、降低成本的要求。PA具有良好的综合性能，包括力学性能、耐热性、耐磨损性、耐化学药品性和自润滑性，且摩擦系数低，有一定的阻燃性，易于加工，适于用玻璃纤维和其它填料填充增强改性，提高性能和扩大应用范围。PA的品种繁多，有PA6、PA66、PAll、PAl2、PA46、PA610、PA612、PAl010等，以及近几年开发的半芳香族尼龙PA6T和特种尼龙等新品种。
特性：
尼龙作为大用量的工程塑料，广泛用于机械、汽车、电器、纺织器材、化工设备、航空、冶金等领域。
成为各行业中不可缺少的结构材料，其主要特点如下：
1．优良的力学性能。尼龙的机械强度高，韧性好。
2．自润性、耐摩擦性好。尼龙具有很好的自润性，摩擦系数小，从而，作为传动部件其使用寿命长。
3.优良的耐热性。如尼龙46等高结晶性尼龙的热变形温度很高，可在150℃下长期期使用。PA66经过
玻璃纤维增强以后，其热变形温度达到250℃以上。
4.优异的电绝缘性能。尼龙的体积电阻很高，耐击穿电压高，是优良的电气、电器绝缘材料。
5.优良的耐气候性。
6.吸水性。尼龙吸水性大，饱和水可达到3%以上。在一定程度影响制件的尺寸稳定性。
分类
主要品种有尼龙6、尼龙、尼龙11.尼龙12、尼龙610、尼龙612、尼龙4fi、尼龙1010等。其中尼龙6、尼龙66产量最大，约占尼龙产量的90%以上。尼龙11、尼龙12具有突出的低温韧性;尼龙46具有优异的耐热性而得到迅速发展，尼龙1010是以蓖麻油为原料生产的我国特有的品种。
由于各种尼龙的化学结构不同，其性能也有差异，但它们具有共同的特性:尼龙的分子之间可以形成氢键，使结构易，发生结晶化 而且，分子之间互相作用力较大，赋予尼龙以高熔点和力学性;由于酰胺基是亲水基团，吸水性较大。在尼龙的化学结构中还存在亚甲基和芳基，使尼龙具有一定柔顺或刚性。尼龙中的亚甲 酸氨基的比例越大，分子中氢键数越少，分子间力越小，柔性增加，吸水性越小。因此，尼龙工程塑料一般都具有良好力学性能、电性能,耐热性和韧性，还具有优良的耐油性、耐磨性、自润滑性、耐化学品性和成型加工性。
...虽然属化学添加物,但对人体无害或危害性较低,常用于加强食品的保...123
晴空EK82017-09-29
卤菜，袋装食品，熏肉食品，膨松食品等
自来水里面都添加什么?这种添加物对身体有害吗?家里面接出来的...123
落尘202021-07-26
要想把自然界中的水变成我们日常生活所用的水，必须经过四步，第一步是澄清，让水中的悬浮杂质自行沉降；第二步是往水里加明矾，它能使胶状悬浮杂质沉到池底而被除去；第三步让水通过沙子层和砾石层，以滤去残存的悬浮杂质；最后，用氯气消毒、杀灭水中致病的细菌。再来分析净化自来水的成分：应该说，自来水厂生产的水是符合饮用标准的。但是，这并不表明它是标准的饮用水。原因有二：（1）自来水在生产过程中用氯净化水虽可杀死病原微生物等有害物质，但加入氯本身又可造成新的化学污染。氯可与水中的有机物生成三氯甲烷，它是一种致癌物质。同时，氯还破坏营养，易导致心脏病。（2）在自来水的管网中，长距离管道运输，管道陈旧生锈，城市高楼水箱和楼群蓄水池不清洁或常年使用不消毒，都可造成二次污染。二次污染使细菌、病毒和藻类繁殖，再加上原有的氯及氯化物、铁锈、重金属、放射性物质、使水体浑浊、有异味，其害无穷。所以说，自来水并不是标准的饮用水。在各种污染日益加重的环境下，我们喝到身体里的水一定要有严格的标准。还水的本来面目，喝纯净水才符合人体的需要，并且喝生水比喝开水更有利于人的健康。因为开水失去氧气太多，喝开水不利于向人体供氧。可能有的朋友要说，我喝了一辈子自来水，身体不照样挺好的吗？其实不然，首先，人体的疾病是个积累和渐进的过程，如果您不饮或少饮不洁的水，身体肯定比现在更健康。其次，现在的水环境也不能与若干年前相比。以前的水污染主要来源于有机物和自然界的污物，主要污染物质为细菌和病毒，因此，经过煮沸后的自来水基本可以达到消毒的目的。而现代水污染我们以上已经讲到，主要是工业废水中的化学污染和重金属，而这些污染物通过把水煮沸的办法是不可能去除掉的。因此，煮沸的开水同样不是标准的饮用水。因此，有条件的还是建议和纯净水。
饲料中添加调味剂的好处123
2017-09-29
饲料添加剂主要分营养性添加剂和非营养性添加剂。营养性添加剂顾名思义，补充营养的，主要含各种微量元素维生素氨基酸什么的；非营养性的添加剂主要是改善饲料性状的如粘合剂，甜味剂等等，这些添加剂作用是增加动物取食量或改善饲料性状，使之容易保存运输或饲喂。
2016年曝光违禁添加物的减肥药123
2017-09-29
2016年曝光违禁添加物的减肥药
油漆的主要成分是什么? 123
2017-09-29
油漆中一种最重要的添加物是什么
【整理总结】续:HUVEC 培养基中添加物的选择 细胞技术讨论版...123
可乐zhou2021-07-20
欲养HUVEC，翻了很多帖子，对于培养基中的添加物做些总结和提出些疑问
1、血清：大部分人提及的Hyclone和Gibco，现在很多人对其血清的来源及目前市面上流行的真假好坏有怀疑，有人买到说好，有人说像是假的；也有人用国产的胎牛血清培养的，多提及兰州民海和四季青的，并且对兰州民海似乎支持者较多。对血清的选择还想说，不同厂家不同批次的血清都不同保证成分完全一致，对于使用者而言，可以从外观、培养方面了解血清的质量。
2、内皮生长因子：养内皮细胞都需加入生长因子，ECGS和ECGF用的较多，含量ECGS0.03-0.05mg/ml或ECGF50μg/ml，品牌提的最多的是Sigma的，但是Sigma的真心贵啊，另有些人提的最多的是罗氏，较便宜，75mg才2200RMB左右，性价比应该是比较高的，本人准备入手。
3、肝素：肝素在内皮细胞培养中的作用是抑制其他杂细胞的生长，尤其是平滑肌细胞的生长，使内皮细胞成为生长优势群，浓度不定，有几种说法：查阅书，15μg/ml；美国ATCC说明书，0.1mg/ml；另有50U/ml，肝素买的话大部分人也都推荐Sigma。
1、血清：大部分人提及的Hyclone和Gibco，现在很多人对其血清的来源及目前市面上流行的真假好坏有怀疑，有人买到说好，有人说像是假的；也有人用国产的胎牛血清培养的，多提及兰州民海和四季青的，并且对兰州民海似乎支持者较多。对血清的选择还想说，不同厂家不同批次的血清都不同保证成分完全一致，对于使用者而言，可以从外观、培养方面了解血清的质量。
2、内皮生长因子：养内皮细胞都需加入生长因子，ECGS和ECGF用的较多，含量ECGS0.03-0.05mg/ml或ECGF50μg/ml，品牌提的最多的是Sigma的，但是Sigma的真心贵啊，另有些人提的最多的是罗氏，较便宜，75mg才2200RMB左右，性价比应该是比较高的，本人准备入手。
3、肝素：肝素在内皮细胞培养中的作用是抑制其他杂细胞的生长，尤其是平滑肌细胞的生长，使内皮细胞成为生长优势群，浓度不定，有几种说法：查阅书，15μg/ml；美国ATCC说明书，0.1mg/ml；另有50U/ml，肝素买的话大部分人也都推荐Sigma。
【求助】关于细胞培养液添加物能用临床药品代替吗? 细胞技术...123
zwpp0002021-07-25
现在准备原代养一种人组织细胞，看文献上要用胰岛素、肝素钠，可是这些东西sigma的特别贵，而且只用一点，不知可否用临床上用的普通胰岛素、肝素钠注射液代替？请用过的朋友指点。
食品添加剂和非法食品添加物的区别 123
主题gqVR87OB642017-09-29
合理合规使用食品添加剂应当是无罪的。
不过因为食品添加剂种类很多，适应范畴和添加量都是规定的，如果你未按gb2760的规定使用，可能构成违法，具体是否是犯罪，要看具体的性质。
比如:二氧化钛(就是食品级的钛白粉)允许在允许在膨化食品、果冷、凉果等类限量使用，如果你在肉制品中使用，属于超范围墙使用，就是违法行为。
其次是超量使用，一般超量使用，又没有构成严重后果，属滥用食品添加剂，一般不按犯罪处理。
但超范围使用，加上媒体炒作的话，可能就麻烦了，因为公-安-执-法部门对此不太专业，往往会有意无意的扩大化，有可能会按刑法143条，生产销售伪劣食品罪起诉。
要注意:食品添加剂和非法添加物的区别，食品添加剂是国家允许使用的物质，而非法添加剂则是指食品及添加剂以外的物质，如三聚氰胺、吊白块、苏丹红等，不是食品添加剂，如果使用此类物质，则构成犯罪。
不过因为食品添加剂种类很多，适应范畴和添加量都是规定的，如果你未按gb2760的规定使用，可能构成违法，具体是否是犯罪，要看具体的性质。
比如:二氧化钛(就是食品级的钛白粉)允许在允许在膨化食品、果冷、凉果等类限量使用，如果你在肉制品中使用，属于超范围墙使用，就是违法行为。
其次是超量使用，一般超量使用，又没有构成严重后果，属滥用食品添加剂，一般不按犯罪处理。
但超范围使用，加上媒体炒作的话，可能就麻烦了，因为公-安-执-法部门对此不太专业，往往会有意无意的扩大化，有可能会按刑法143条，生产销售伪劣食品罪起诉。
要注意:食品添加剂和非法添加物的区别，食品添加剂是国家允许使用的物质，而非法添加剂则是指食品及添加剂以外的物质，如三聚氰胺、吊白块、苏丹红等，不是食品添加剂，如果使用此类物质，则构成犯罪。
麻古其主要成分是什么123
jin156375195502017-09-29
麻古中添加物的化学分析
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